刘东海
- 作品数：64 被引量：131H指数：6
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- 发文基金：宁波市自然科学基金“十五”重点攻关项目宁波市科技局资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 胃肠恶性肿瘤及其切缘组织中p53基因突变和p53蛋白表达被引量：1
- 2001年
- 目的 探讨胃肠道恶性肿瘤及其切缘组织中p5 3基因突变和 p5 3蛋白表达与手术切缘的安全性关系。 方法 用PCR -SSCP和免疫组化S -P方法检测 2 0例胃癌和 10例大肠癌标本和切缘组织中 p5 3基因突变和p5 3蛋白表达情况。 结果 (1)胃肠道恶性肿瘤组织中有很高的 p5 3基因突变率(6 3 % )和 p5 3蛋白阳性表达率 (5 3 .33 % )。 (2 )肿瘤组织中 p5 3蛋白表达是切缘组织中p5 3蛋白表达的前提。 (3) p5 3基因突变和 p5 3蛋白表达随肿瘤切缘距离的增加而呈现极显著的递减趋势。 结论 就p5 3基因突变和 p5 3蛋白表达而言 ,距离肿瘤边缘
- 李孝麟陈少茂刘东海张乐鸣
- 关键词：胃肠肿瘤P53基因P53蛋白基因突变
- 用流式细胞仪检测大黄鱼三倍体被引量：15
- 2006年
- 通过对大黄鱼二倍体和三倍体的倍性分析,建立流式细胞仪检测三倍体的方法。大黄鱼受精卵经三倍体诱导处理后,胚胎期进行染色体滴片证实在处理组中有三倍体细胞存在。接着对该组胚胎进行育苗,获得1￣3cm的鱼苗,用流式细胞仪进行检测。以二倍体大黄鱼的肌肉组织或血液细胞DNA含量的峰值道数作为对照,用同样的方法取样处理、上机、测定处理组样本个体细胞的DNA含量的峰值道数。如果处理组个体细胞的DNA含量的峰值道数是二倍体组的1.5±0.1倍,则认为该个体为三倍体。实验结果经冷休克或静水压诱导处理的样本共检测182个,三倍体检出率为12.09%,其中有一组检出率高达55.56%。
- 郑春静吴雄飞刘东海张顺
- 关键词：大黄鱼三倍体流式细胞仪
- 非小细胞肺癌p15基因缺失的研究被引量：1
- 2001年
- 目的 研究 p1 5基因的纯合性缺失与非小细胞肺癌的发生、发展和预后的关系。 方法 应用聚合酶链反应 (PCR)对 97例非小细胞肺癌与 1 0例非肿瘤疾病的正常肺组织和 2例畸胎瘤进行 p1 5基因的检测。 结果 97例非小细胞肺癌中 ,p1 5基因的缺失率为 44.3 % ,而正常肺组织和畸胎瘤均未发生缺失 ;不同病理类型间缺失率差异无统计学意义 ,不同TNM分期中 ,p1 5的缺失率是不同的 ,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别为 2 9.4%、40 .0 %和 5 3 .3 % (P <0 .0 5 ) ;有淋巴结转移组的缺失率为 5 2 .2 % ,高于无淋巴结转移组的 2 6.7% ;p1 5基因缺失组的术后 1、3年生存率分别为 88.4%和 3 2 .6% ,较无缺失组的 97.7%和5 1 .2 %为低 (P <0 .0 1 )。 结论 p1 5基因缺失与非小细胞肺癌的发生、发展相关 ,是预后的独立预测指标。
- 蔡挺刘东海余静张顺郑兴国赵国芳沈海波
- 关键词：非小细胞肺癌基因缺失P15基因
- 乳腺癌患者c-erBb-2基因荧光定量PCR方法的研究被引量：1
- 2006年
- 目的:建立乳腺癌中c-erbB-2基因的荧光定量PCR(FQ-PCR)方法。方法:乳腺癌细胞中的c-erbB-2基因与质粒PGEM-Teasy vector重组,转化大肠杆菌E.coliDH5α,获得克隆的c-erbB-2基因标准模板。用ABI PRISM7700PCR仪检测FQ-PCR扩增产物制成标准曲线来检测未知标本中c-erbB-2的含量。结果:FQ-PCR扩增产物呈“S”形动力学曲线;ct(循环阈值)与PCR体系中起始模板拷贝数的对数值之间存在严格的线性关系,显示了FQ-PCR定量的准确性。结论:FQ-PCR是一种快速、简便、灵敏、准确的定量c-erbB-2基因的方法。
- 刘东海张乐鸣张顺毛联钢冯伟云
- 关键词：乳腺肿瘤
- 感染严重程度与红细胞膜钙泵、细胞内外钙离子浓度关系的研究被引量：4
- 2001年
- 目的 研究感染患者红细胞膜钙泵、细胞内外钙离子浓度的变化及其相互关系 ,阐明钙离子、钙离子通道异常在重症感染病理过程中所起的作用。 方法 用原子吸收分光光度法测定红细胞总钙 ,钙荧光指示剂Fara -2法测定红细胞浆游离钙浓度 ,Ca2 + Mg2 + ATP细胞膜酶活性法测定红细胞膜钙泵活性 ,甲基百里酚兰比色法测定血清总钙。 结果 3 5例重症感染在感染极期和恢复期红细胞内总钙、游离钙、膜钙泵及血清钙均有明显的变化 ,感染程度与血清钙浓度及红细胞膜钙泵活性呈负相关 ,而与红细胞内游离钙呈正相关。 结论 感染患者存在细胞外钙向细胞内流动 ,导致细胞功能紊乱、损害甚至死亡。
- 毛亚伦刘东海张顺
- 关键词：CA^2+-MG^2+-ATP酶钙代谢异常
- 胃肠道肿瘤及其边缘组织端粒酶活性表达的临床研究被引量：2
- 1999年
- 通过检测胃肠道癌症患者肿瘤中心组织、癌旁组织的端粒酶活性，探讨肿瘤手术切缘的安全性。方法分别取肿瘤中心组织及肿瘤上下切缘各２ｃｍ、４ｃｍ组织共５处，用ＴＲＡＰ银染显色法检测各部分端粒酶的活性。结果１５例胃癌中端粒酶阳性９３．３％。癌旁距肿瘤边缘２ｃｍ，阳性２０％，４ｃｍ以上均为阴性。１０例直肠癌中端粒酶阳性率为８０％，癌旁距肿瘤２ｃｍ阳性率为１０％，４ｃｍ以上皆为阴性。结论肿瘤的中心部分与边缘组织的端粒酶活性存在显著性差异，而且与离肿瘤的距离有关，
- 张乐鸣刘东海董虹张顺毛国庆
- 关键词：端粒酶活性胃肠道肿瘤分子切缘
- 定量荧光PCR法验证流式细胞术测定人类白细胞抗原B27临界值标本的研究被引量：3
- 2013年
- 目的观察用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法来验证流式细胞术(FCM)检测人类白细胞抗原表达为临界值标本,评价其在强直性脊柱炎(AS)的临床诊治价值。方法分别对482例患者用流式细胞术检测人类白细胞抗原表达为阳性、临界值、阴性的样本及100名健康人群样本,以实时定量荧光PCR检测外周血HLA-B27DNA,确定样本的阳性率。结果 PCR法检测出阳性组调查282例阳性率100.00%、临界值组调查80例阳性率91.25%、阴性组调查120例阳性率为0.83%;健康对照组调查100名,阳性率3.00%。结论以定量荧光PCR检测>103为标准,FCM检测临界值组阳性率过高,差异有统计学意义,存在假阳性;阳性组和阴性组无明显差异,但阴性组有假阴性产生,定量PCR法对流式细胞术检测为临界值标本具有较高诊断价值,可防止假阳性和假阴性的产生,进一步提高AS诊断率和可靠性。
- 徐冉行李宇宁姚亚萍刘东海
- 关键词：聚合酶链反应强直性脊柱炎流式细胞术
- 血清蛋白质指纹图谱诊断乳腺癌的临床意义被引量：6
- 2006年
- 激光解吸电离-飞行时问质谱（SELDI-TOF-MS）技术已成功用于前列腺癌、卵巢癌、膀胱癌、大肠癌等恶性肿瘤的诊断、肿瘤标记物的筛选及其他蛋白质组学的研究。我们应用SELDI技术检测了乳腺癌患者与正常人血清标本的蛋白质组图谱变化，采用生物信息学技术对这些数据进行分析，建立了基于支持向量机的乳腺癌血清蛋白质的诊断图谱，为早期诊断乳腺癌提供了一种新的方法。
- 刘东海张乐鸣冯伟云李旭军毛联钢张顺
- 关键词：蛋白质指纹图谱乳腺肿瘤预后
- 人绒毛膜促性腺激素β亚基cDNA的克隆
- 1999年
- 用新鲜的人绒毛膜组织提取总RNA,并通过逆转录反应合成cDNA第一链,利用人工合成的一对寡核苷酸引物,采用PCR技术特异性地扩增人绒毛膜促性腺激素β亚基(hCG—β)cDNA,琼脂糖凝胶电泳结果显示扩增片段大小为500bp,与预计的片段长度相符,将此片段刊用T—A载体克隆至PCRⅡ质粒上并进行全序列分析,结果显示克隆片段包含hCG—βcDNA5’端和3’端的非编码区及完整的编码区。
- 张乐鸣刘东海董虹
- 关键词：人绒毛膜促性腺激素Β亚基克隆
- ePNP自杀基因载体的构建及其表达
- 2009年
- [目的]构建稳定表达ePNP(E.coliPNP)的细胞模型,为肿瘤的基因治疗提供实验基础。[方法]提取大肠杆菌E.coliK12总DNA,PCR方法克隆大肠杆菌ePNP基因,构建逆转录病毒载体质粒pMSCV-ANGPTL4,鉴定测序。脂质体法将三种逆转录病毒载体pMSCV-ANGPTL4、pVSV、pGAG-POL共转染293-EBNA包装细胞,获得高滴度病毒并感染MDA-MB435细胞。荧光显微镜与RT-PCR检测MDA-MB435细胞ePNP基因的表达。[结果]所克隆的ePNP基因与文献报道一致;成功构建了pMSCV/ePNP重组逆转录病毒载体;ePNP基因在MDA-MB435细胞中获得稳定表达。[结论]pMSCV/ePNP自杀基因载体的成功构建及其表达为ePNP应用于肿瘤基因治疗奠定了基础。
- 李克强李文林饶泽昌赵林刘东海唐洪林石小玉
- 关键词：嘌呤核苷磷酸化酶自杀基因重组逆转录病毒载体大肠杆菌
