陈伟生
- 作品数：7 被引量：29H指数：4
- 供职机构：珠海出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：珠海市软科学研究计划项目广东省农业攻关项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- TaqMan探针荧光PCR检测副猪嗜血杆菌方法的建立和应用被引量：5
- 2011年
- 为了建立基于TaqMan探针荧光PCR技术检测副猪嗜血杆菌的方法,本试验参考GenBank已发表的副猪嗜血杆菌(Hemophilus parasuis,HPS)转录起始因子infB基因序列,利用生物学软件Primer Express 2.0设计特异性引物和探针;并对副猪嗜血杆菌标准菌株提取DNA后进行PCR扩增,将产物测序鉴定后克隆到pMD18-T载体,再转化到大肠杆菌感受态细胞,细菌培养后对菌液进行PCR扩增,把产物测序鉴定后获得的重组质粒作为标准阳性对照;最后将建立的TaqMan探针荧光PCR方法进行灵敏度、特异性、稳定性试验。结果显示,该检测方法可以达到1μl 1.0×101拷贝数量级的灵敏度;另外,该方法可以将HPS和大肠杆菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌分开,特异性良好;稳定性试验显示,2次批内变异系数分别为0.65%和0.92%,批间变异系数为1.31%,稳定性良好。对口岸送检的56份猪肉和12份血浆蛋白粉样品进行检测,结果表明TaqMan探针荧光PCR方法和细菌分离方法的检测效果一致。
- 罗宝正王振全薄清如徐海聂沙才华廖秀云陈伟生
- 关键词：副猪嗜血杆菌荧光PCR
- 液相色谱-电喷雾串联质谱法测定水产品中氯霉素含量
- 建立了以氘代氯霉素(d5-CAP)为内标,液相色谱-电喷雾串联质谱法检测鱼、虾等水产品肉中氯霉素(chloramphenicl,CAP)残留的方法.方法灵敏度高,检测限低于0.01μg/kg,回收率97.1-106％,符...
- 瞿进文吴洁珊蔡勤仁黄新民古学群陈伟生
- 关键词：水产品氯霉素抗生素药物残留液相色谱-电喷雾串联质谱法
- A型H1N1及H3N2亚型流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立被引量：1
- 2010年
- 根据A型H1N1亚型流感病毒2009年北美变异株和H3N2亚型流行株的基因序列,设计了3套特异性引物、TaqMan探针,分别用不同的荧光基团标记,以构建的A型流感病毒及H1N1和H3N2亚型流感病毒基因重组质粒作为阳性对照,经反应条件优化,特异性、敏感性和重复性试验,筛选出3套不同的反应体系及同一个反应参数,建立了可同时检测A型流感病毒、H1N1和H3N2亚型流感病毒的实时荧光RT-PCR方法。结果表明,该方法可特异地检测H1N1(人源、猪源)、H3N2(猪源),禽流感病毒H5、H9等A型流感病毒,且与新城疫病毒、减蛋综合征病毒等其他病毒不发生交叉反应,具有特异、敏感、重复性好、快速、费用低廉等优点,试验耗时仅3h。表明,建立的方法,一次试验即可完成A型流感病毒的初筛和H1N1、H3N2亚型流感病毒的初步确认定型。
- 杨素陈博文沙才华廖明秦爱建徐海聂廖秀云罗宝正薄清如陈伟生
- 关键词：A型流感病毒H1N1亚型H3N2亚型实时荧光RT-PCR
- 多重荧光PCR鉴别诊断猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒被引量：9
- 2012年
- 为了建立一种快速、灵敏、特异的能够同时检测猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR方法,根据GenBank中公布的猪瘟病毒基因序列,设计一套特异性的引物和探针,对猪瘟病料提取RNA,经RT-PCR扩增后将产物回收,克隆至pMD18-T构建pMD18-T-CSFV阳性质粒;非洲猪瘟的目的片段序列采用化学合成,构建pMD18-T-ASFV阳性质粒。以两种阳性质粒为模板对建立的多重荧光PCR方法做特异性、灵敏度和重复性试验,结果表明该方法可以将猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒同口蹄疫病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪水泡病病毒、猪圆环病毒2型区分开,灵敏度可以达到10拷贝的数量级,而且方法稳定。对2份已知猪瘟阳性血清样品和120份猪内脏、猪鼻腔拭子及血清样品检测后,发现对已知阳性样品的检测结果符合预期目标,未知样品检出猪瘟病毒3份阳性,未检出非洲猪瘟病毒阳性。
- 陈静静罗宝正沙才华廖秀云王振全陈伟生徐海聂薄清如
- 关键词：猪瘟病毒非洲猪瘟病毒
- 禽流感病毒通用型及H5亚型套式荧光RT-PCR检测方法研究被引量：4
- 2012年
- 将套式PCR与荧光RT-PCR技术相结合,叠加这两种技术在敏感性和特异性方面的优势,建立敏感性高于常规荧光RT-PCR的套式荧光RT-PCR检测方法。从GenBank下载禽流感病毒NP基因和HA基因序列,通过比对选取较为保守的片段,设计AIV通用型及H5亚型套式荧光RT-PCR引物和TaqMan探针;利用体外转录技术制备阳性对照,构建目的片段重组质粒;经反应体系和反应条件的优化,建立套式荧光RT-PCR检测方法。试验结果表明,该方法可特异性地检测禽流感病毒及H5亚型AIV,在30份鱼类养殖水样中检测到19份阳性样品,具有较高的敏感性和良好的特异性;具有高通量、快速的特点,可对大批量样品同时进行检测,试验耗时仅需5h,是自然环境样品中极微量禽流感病毒检测的好方法。
- 杨素廖秀云廖明沙才华徐海聂曹伟胜陈伟生
- 关键词：禽流感病毒通用型H5亚型
- 猪繁殖与呼吸综合征RT-LAMP检测方法研究被引量：5
- 2011年
- 应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)ORF7基因保守序列的6个区域设计2对特异引物,经反应体系、反应条件优化及敏感性和特异性试验,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。研究结果表明,该检测方法不需要复杂仪器,仅用一台普通恒温水浴锅,在等温条件(63℃)保温1 h,即可完成核酸扩增反应,加入核酸染料SYBR GreenⅠ后,用肉眼即可对试验结果进行准确判定,为田间和基层部门检测猪繁殖与呼吸综合征病毒提供了一种廉价、简便、快速、敏感、特异的新方法。
- 杨素沙才华顾海洋董尚智廖秀云徐海聂薄清如罗宝正陈伟生
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-LAMP
- 基因芯片方法检测6种动物源性人兽共患病病原被引量：5
- 2011年
- 为了建立可同时检测H5亚型禽流感病毒、狂犬病病毒、猪链球菌2型、炭疽芽孢杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157的基因芯片检测方法,本实验根据GenBank中上述6种病原的基因序列,设计并合成了特异性的引物和探针。采用点样法制备杂交芯片,将上述病原扩增产物混合后与芯片杂交。杂交结果显示,针对本试验中6种人兽共患传染病所设计的寡核苷酸探针可特异性识别靶基因,与其他常见病原体之间没有交叉反应。检测的灵敏度在1.38×10-5 pg/μL～151 pg/μL之间。将建立的基因芯片检测方法对临床样品进行检测,结果与荧光PCR方法一致。
- 王振全罗宝正薄清如徐海聂沙才华廖秀云陈伟生
- 关键词：基因芯片人兽共患病
