张志霞
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
- 供职机构：枣庄职业学院更多>>
- 发文基金：四川省教育厅科学研究项目四川省中医管理局科研基金枣庄市科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 流行性乙型脑炎病毒E蛋白基因在大肠杆菌中的克隆与表达被引量：2
- 2008年
- 目的;获得JEVE蛋白基因,构建重组表达载体并在E.coli中高效表达。方法:参照GeneBank中的日本乙型脑炎病毒SA14-14株序列设计一对特异性引物,采用RT-PCR法扩增E基因全长,克隆至PUCm-T载体,经测序证实后克隆至原核表达载体pET32a中,转化入BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。结果:限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,扩增出了JEVE蛋白基因全长1500bp,成功构建了重组质粒pET-32a/JEVE,SDS-PAGE分析显示目的蛋白主要以包涵体的形式在大肠杆菌中获得表达,表达量占总菌体蛋白的35%。结论:在大肠杆菌中成功表达了JEVE蛋白,为ELISA早期诊断试剂盒的研制和E蛋白基因结构与功能的分析奠定了基础。
- 王丽李洪张志霞刘晓燕谢华福宋杰梅志强
- 关键词：流行性乙型脑炎病毒基因克隆
- 体外合成的ABC转运蛋白2 mRNA在小鼠体内表达促进尿酸排泄被引量：4
- 2021年
- 高尿酸血症是指嘌呤代谢紊乱尿酸在体内堆积所导致的慢性代谢疾病,近年来其发病率增高且发病年龄呈现年轻化趋势,寻找有效的治疗靶点以及治疗方法是当前研究的热点。尿酸盐转运蛋白ABC转运蛋白2(ATP-binding cassette subfamily G member 2,ABCG2)主要表达于肾,促进尿酸排泄。本研究通过体外合成ABCG2 mRNA,将其转染至高尿酸血症模型小鼠体内,观察对小鼠尿酸的影响及其相关作用。化学合成ABCG2 mRNA的DNA模板,体外转录mRNA修饰后转染到小鼠肾小管上皮细胞TCMK-1,Western印迹检测细胞中的蛋白质表达。结果显示,TCMK-1细胞中的蛋白质表达量与mRNA转染量呈正相关(P<0.01),提示转染成功。动物实验,将24只SPF级小鼠随机分为正常组、高尿酸血症模型组、苯溴马隆治疗组[20 mg/(kg·d)]和mRNA治疗组[2 mg/(kg·3d)],共4组(n=6)。边造模边治疗持续28 d,治疗结束后检测其血尿酸、尿液中尿酸、血肌酐、血尿素氮和肝中黄嘌呤氧化酶指标。结果显示,与模型组小鼠相比,mRNA治疗能显著降低小鼠血尿酸(100.38±10.94)及血尿素氮(6.30±1.10)、肌酐(30.86±5.78)水平(P<0.05或P<0.01),升高小鼠尿液尿酸(617.48±50.34)水平(P<0.05),促进尿酸排泄,对肝中黄嘌呤氧化酶活性(26.19±2.58)无显著影响。HE染色观察小鼠肾病理结构改变。结果显示,与模型组小鼠相比,mRNA治疗组小鼠肾内肾小管细胞水肿、炎细胞浸润等病理损伤得到明显改善。qRT-PCR检测小鼠肾组织mRNA相对表达量,免疫组化、Western印迹检测小鼠肾ABCG2蛋白质表达水平。结果显示,mRNA组小鼠肾组织中ABCG2 mRNA及其蛋白质相对表达量明显上调(P<0.01)。综上所述,体外修饰合成的ABCG2 mRNA可以在高尿酸小鼠模型体内成功表达,并促进尿酸及其它有机离子排泄,同时改善小鼠肾损伤。该结果为临床利用ABCG2基因作为治疗高尿酸血症相关疾病的靶点提供了实验依据。
- 孙忠兴葛科立张志霞张志霞张金玉张金玉
- 关键词：高尿酸血症肾功能
- 中医药多途径联合治疗慢性乙型重型肝炎的临床研究被引量：7
- 2009年
- 目的:观察中医药多途径联合治疗慢性乙型重型肝炎的临床效果。方法:将55名慢性乙型重型肝炎(早、中期)随机分为对照组27例,治疗组28例,两组均采用基础西医治疗,治疗组加用甘露消毒丹辨证加减、丹参粉针并中药灌肠,观察不同治疗方案对其临床症状、生化指标及凝血酶原活动度的影响。结果:治疗组总有效率71.43%(20/28),显效率39.29%(11/28),对照组分别为51.85%(14/27)、14.81%(4/27),两组比较显效率差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组与对照组均可改善转氨酶及凝血酶原活动度(PTA),治疗组在降低胆红素(TBil、DBil)及升高PTA方面有统计学意义(P<0.05,PDBil<0.01)。结论:中医药多途径联合治疗慢性重型肝炎,可更好的消退黄疸,改善凝血酶原活动度。
- 张囡囡汪静刘鹏张志霞
- 关键词：慢性重型肝炎甘露消毒丹丹参粉针
- 一种新的肿瘤相关蛋白——Twist被引量：1
- 2009年
- Twist蛋白属于碱性的螺旋-环-螺旋蛋白家族中的高度保守的转录因子,在胚胎的发生、发展中发挥重要作用。Twist作为上皮-间质转变过程中的关键调控因子,促进了肿瘤的发生、侵袭和转移。作为潜在的癌基因蛋白,抑制肿瘤细胞的凋亡,促进肿瘤细胞对化疗药物的耐药。
- 张志霞金莲玲何涛
- 关键词：TWIST转录因子抗药性肿瘤细胞凋亡
- 乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-435S中Twist基因表达与紫杉醇耐药的实验研究
- 2013年
- 目的探讨转移能力不同的两种人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-435S中Twist基因表达差异,及其与紫杉醇药物敏感性差异的相关性。方法用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,检测两种细胞中Twist基因的表达情况,MTT法检测两种细胞对紫杉醇的敏感性。结果 (1)RT-PCR结果显示:两种细胞中均有Twist基因表达,在MDA-MB-435S细胞中的表达高于MCF-7(P<0.05);(2)紫杉醇对MDA-MB-435S细胞的抑制作用弱于对MCF-7细胞的抑制作用(P<0.05)。结论 Twist基因在转移能力强的MDA-MB-435S细胞中表达高于转移能力中等的MCF-7细胞,同时高转移的MDA-MB-435S细胞对紫杉醇的敏感性弱于中等转移性的MCF-7细胞,且更易出现耐药。
- 张志霞何涛董衍东王丽
- 关键词：TWIST基因MCF-7紫杉醇
- 改性石榴皮果胶性质及抗氧化活性被引量：4
- 2020年
- 石榴皮果胶纯化后,采用酸碱修饰和高压蒸汽法分别制备酸碱改性和热改性石榴皮果胶,并在分析石榴皮果胶改性前后理化性质的基础上,进一步研究了其体外抗氧化活性。结果表明:与未改性果胶相比,酸碱改性和热改性后的石榴皮果胶半乳糖醛酸含量由(53.87±0.39)%分别增加到(73.36±0.34)%和(66.62±0.29)%,酯化度由(86.03±0.83)%分别降低到(68.30±0.33)%和(66.78±0.56)%。改性前后石榴皮果胶对DPPH自由基的清除作用,随着浓度的增加其DPPH自由基清除活性亦有不同程度提高,p H改性果胶的清除活性高于未改性果胶和热改性果胶。
- 孟凡磊褚智慧宋凤玲张志霞谢纱纱张立华
- 关键词：石榴改性酯化度半乳糖醛酸抗氧化活性
- Twist蛋白在肾肿瘤组织中的表达及与MRP、P-gp、LRP、TOPOⅡ的关系
- 2013年
- 目的 探讨Twist蛋白在肾肿瘤组织中的表达及与几种多药耐药蛋白表达之间的关系.方法 应用免疫组化SABC技术检测人肾癌组织不同区域的Twist蛋白、多药耐药相关蛋白（multidrug resistance-associated protein,MRP）、P糖蛋白（P-gp）、肺耐药蛋白（lung resistance-related protein,LRP）、拓扑异构酶Ⅱ（topoisomerase Ⅱ,TOPOⅡ）的表达.结果 在肿瘤边界区,Twist蛋白、MRP、P-gp、LRP、TOPOⅡ均为阳性表达;而在肿瘤中心区,Twist蛋白和P-gp的表达为阴性,MRP、LRP、TOPOⅡ蛋白仍为阳性表达,但MRP和TOPOⅡ在肿瘤中心区表达强于肿瘤周边区（P〈0.01）,而LRP在肿瘤中心区的表达弱于肿瘤周边区（P〈0.01）.结论 Twist基因的表达与肾肿瘤转移、浸润以及耐药性有关.
- 张志霞何涛董衍东王丽
- 关键词：肾肿瘤多药耐药相关蛋白P糖蛋白肺耐药蛋白
- PAB-Gal4-DBD-HA-Twist重组质粒的制备
- 2014年
- 目的:构建人Twist基因的表达载体pAB-Gal4-DBD-HA-Twist,为研究其转录调控机制提供实验工具。方法:重组克隆质粒pcDNA-Flag-Twist用含有特异BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的引物进行聚合酶链反应;对含有两种酶切位点的目的 Twist基因片段和pAB-Gal4-DBD-HA载体进行酶切、分离、回收纯化、连接后转入感受态DH5α中,细菌培养,菌落聚合酶链反应、测序鉴定。结果:鉴定结果显示,Twist基因正确克隆到PAB-Gal4-DBD-HA表达载体,并且转入了大肠杆菌中。结论:成功构建了人twist基因PAB-Gal4-DBDHA-Twist表达载体,为进一步研究其表达、调控、作用机制奠定基础。
- 张志霞刘萍何涛
- 关键词：转录因子TWIST基因克隆重组质粒
- Twist基因RT-PCR检测方法的建立被引量：2
- 2010年
- 目的建立Twist基因的逆转录聚合酶链式反应(Reverse tran scription polymerase chain reaction,RT-PCR)条件,为探讨Twist功能学研究奠定方法学基础。方法根据Genebank中的Twist(NM_000474)基因序列设计引物,以GAPDH为内参照基因(NM_002046),用RNAsimple Total RNAkit提取培养的肾癌细胞总RNA,按照Quantscript RTkit Quant cDNA第一链合成试剂盒说明书合成cDNA,PCR扩增操作按照TAKARA公司的LA Taq with GC Buffer PCR试剂盒说明书,设置PCR反应体系并优化扩增反应条件,琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。结果采用TAKARA的LA Taq with GC buffer PCR试剂盒并通过PCR扩增条件的优化,成功建立了Twist基因的RT-PCR方法,在肾癌细胞系786-0中扩增出大小为150bp左右清晰的目的条带。结论成功摸索出了具有复杂二级结构、富含GC的Twist基因的RT-PCR扩增方法,并证明在肾癌细胞系786-0中存在Twist基因的特异性表达。
- 刘晓燕王丽张志霞李娟何涛
- 关键词：肿瘤TWIST基因RT-PCR
