涂珍珍
- 作品数：10 被引量：17H指数：3
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- 转录因子LMO4调控前列腺癌细胞增殖及其机制被引量：1
- 2020年
- 目的研究LIM结构域蛋白4(LMO4)对前列腺癌中干性标记分子CD133表达和细胞增殖的影响,并初步探讨其分子机制。方法采用免疫组织化学检测前列腺增生组织和前列腺癌组织中LMO4和CD133的表达水平;流式分选技术在人前列腺癌细胞系PC-3中分选出CD133+和CD133-细胞;细胞克隆形成实验检测克隆形成能力;在人前列腺癌细胞系PC-3中建立干涉Lmo4细胞株PC-3/SiLmo4;利用Western blot和细胞免疫荧光技术检测PC-3细胞和PC-3/SiLmo4细胞中LMO4、CD133表达水平的变化;流式细胞术检测PC-3细胞和PC-3/SiLmo4细胞中前列腺癌细胞增殖能力以及CD133+细胞数量变化,细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力变化;免疫共沉淀方法(Co-IP)检测LMO4与细胞周期依赖性激酶9(CDK9)在前列腺癌细胞PC-3干涉Lmo4后的相互作用。结果与前列腺增生组织相比,在前列腺癌组织中LMO4与CD133表达量均明显增加,具有一致性;在人前列腺癌细胞系PC-3中,CD133+细胞比CD133-细胞具有较强的克隆形成能力(P<0.05);与对照组细胞相比,干涉Lmo4的人前列腺癌细胞系PC-3中CD133+细胞数显著减少,细胞增殖能力显著降低,细胞克隆形成能力下降(P<0.05);正常前列腺细胞中LMO4与CDK9形成复合体,过表达LMO4后复合体减少;而在前列腺癌细胞中未见LMO4/CDK9复合体。结论在前列腺癌组织和细胞中,肿瘤干性标记分子CD133与转录因子LMO4的表达均上升,并且具有一致性。LMO4调控前列腺癌细胞的增殖,且前列腺癌细胞的增殖不依赖于LMO4/CDK9复合体。
- 郭立钰刘蒙蒙涂珍珍曾凡军尹玉詹鹤琴周海胜
- 关键词：前列腺癌细胞增殖CD133
- Sigirr缺失调控NF-κB并参与慢性肾病小鼠发生肾间质纤维化被引量：1
- 2023年
- 目的研究Sigirr基因缺失小鼠在慢性肾病(CKD)并发肾间质纤维化(RIF)中的作用和机制。方法利用PCR鉴定正常基因型(Sigirr^(+/+))小鼠和Sigirr基因缺失(Sigirr^(-/-))小鼠。含0.2%高腺嘌呤饲料喂养小鼠,连续喂养12周,以建立慢性肾脏损伤并发RIF模型。收集小鼠眼框静脉血以检测肾功能;利用HE染色分析肾脏组织病理变化,通过Masson染色观察肾脏纤维化程度,利用IHC和Western blot检测白细胞介素(IL)-1β、MyD88和NF-κB等信号分子变化,同时观察转化生长因子(TGF)-β1、E-cadherin和Vimentin的表达变化。结果肾功能检测结果显示高腺嘌呤喂养小鼠的血清肌酐和尿素氮较对照组增加;HE和Masson染色结果显示:与Sigirr^(+/+)小鼠比较,Sigirr^(-/-)小鼠的肾组织中,炎症细胞浸润和胶原纤维沉积更明显。IHC和Western blot结果显示IL-1β及其下游的MyD88表达增加,p-P65水平显著增加;Sigirr^(-/-)小鼠的肾组织中IL-1β、MyD88、p-P65等变化较Sigirr^(+/+)小鼠显著;同时TGF-β1显著增加,且Vimentin的表达增加,E-cadherin的表达明显降低,Western blot检测Vimentin、E-cadherin结果与免疫组化一致,且α-SMA也显著升高。结论高腺嘌呤饮食可以建立CKD并发RIF小鼠模型。Sigirr的缺失增加肾间质IL-1β介导NF-κB信号通路的活化,促进TGF-β1表达,有利于上皮-间质细胞转分化相关RIF过程。
- 童子文徐德苹王喆杨萍涂珍珍臧丹丹周海胜
- 关键词：慢性肾病肾间质纤维化IL-1ΒNF-ΚB
- 人G蛋白偶联受体107表达载体构建及细胞定位的研究被引量：1
- 2021年
- 目的克隆人G蛋白偶联受体107(GPR107)基因以构建真核表达载体,并探讨GPR107在真核细胞中的亚细胞定位。方法通过分子克隆技术克隆人GPR107基因的cDNA;利用真核细胞表达载体pCMV-Tag2B构建重组载体pCMV-Tag2B-GPR107,瞬时转染至293T细胞,Western blot检测GPR107的表达变化;采用免疫荧光标记,激光共聚焦显微镜观察GPR107在细胞中的定位。结果经过基因测序证实获得人GPR107的cDNA;成功构建真核表达载体pCMV-Tag2B-GPR107;Western blot结果显示,与未转染组比较,转染组GPR107表达量明显上调。激光共聚焦显微镜观察显示GPR107主要表达于细胞质。结论GPR107在293T细胞中过表达,并定位于细胞质。
- 冯阳贺凡涂珍珍臧丹丹倪鸣岳周海胜
- 关键词：转染亚细胞定位
- 雷帕霉素对肾小管上皮细胞生物学行为的影响及其治疗糖尿病肾病分子机制的初步研究被引量：4
- 2017年
- 目的研究雷帕霉素(RAPA)对肾小管上皮细胞生物学行为的影响及其治疗糖尿病肾病分子机制。方法体外培养肾小管上皮细胞(HK-2),使用转化生长因子β1(TGF-β1)处理HK-2细胞,以建立肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转化(EMT)的细胞模型,并联合RAPA处理HK-2细胞,通过Transwell迁移实验和侵袭实验观察HK-2细胞的迁移和侵袭等细胞生物学行为变化;通过RT-PCR、Western blot法观察EMT分子标志物表达的变化;结合前期建立的糖尿病肾病小鼠模型的肾组织及通过腹腔注射RAPA[1mg/(kg·d)]处理后的模型小鼠肾组织,利用HE染色分析肾组织的病理变化;利用免疫组化检测EMT分子标志物的表达变化。结果 Transwell实验结果表明,TGF-β1诱导HK-2细胞发生迁移和侵袭能力明显增加;联合应用RAPA后,迁移和侵袭能力明显抑制。RT-PCR、Western blot和免疫组化结果显示TGF-β1可以促进间质细胞标志分子Vimentin的表达,而上皮标志分子E-cadherin的表达明显降低;联合应用RAPA后可以抑制TGF-β1诱发的EMT作用。HE染色显示,RAPA治疗后,能显著改善糖尿病肾病小鼠肾小管形态病变。结论 RAPA具有抑制肾小管上皮细胞发生EMT作用。
- 成芳涂珍珍周利利苏超王德光周海胜
- 关键词：雷帕霉素糖尿病肾病
- LCE3C在皮肤癌组织中分布和细胞定位及其调控机制的初步研究被引量：5
- 2015年
- 目的研究LCE3C蛋白在皮肤鳞状细胞癌(SCC)以及基底细胞癌(BCC)中的分布及其调控的分子机制。方法免疫组织化学法检测LCE3C在SCC和BCC组织中的表达。构建绿色荧光蛋白融合表达的LCE3C重组表达载体pLCE3C-GFP,转染人SCC细胞系A431,采用激光共聚焦显微镜分析LCE3C在A431细胞中的定位。Western blot法检测转录因子GRHL3对LCE3C表达的影响。结果免疫组化结果显示,与正常皮肤组织比较,LCE3C在SCC和BCC组织中表达明显增加;在皮肤癌组织中LCE3C主要分布在表皮的角质层。激光共聚焦结果显示,LCE3C主要分布在细胞外基质(ECM)中;Western blot结果显示,与角质形成细胞(HaCaT)比较,A431细胞中GRHL3表达量显著降低,而LCE3C表达量明显增高;过量表达GRHL3的细胞(A431/GRHL3)LCE3C表达量显著降低。结论与正常皮肤组织比较,LCE3C在皮肤癌中的表达增加,主要分布在皮肤角质层的ECM;转录因子GRHL3与皮肤癌组织LCE3C的表达呈负相关性。
- 陈琼琼涂珍珍王瑞张思平赵盼成芳查晓军周海胜
- 关键词：皮肤鳞状细胞癌基底细胞癌细胞定位
- IL-23信号通路介导LMO4调控银屑病角质形成细胞增殖和分化的研究
- 背景和目的银屑病是一种慢性自身免疫性皮肤疾病,其最常见的组织学特征是表皮增生、表皮角化不全等。其发病机制主要是受环境因素和遗传因素影响,免疫系统功能异常,最终导致角质形成细胞(Keratinocytes,KC)的过度增殖...
- 涂珍珍
- 关键词：银屑病角质形成细胞IL-23细胞增殖细胞分化
- 文献传递
- 转录因子GRHL3抑制SNX16表达促进乳腺癌细胞迁移和侵袭被引量：3
- 2019年
- 目的研究转录因子GRHL3参与调控分拣连接蛋白16(SNX16)表达的分子机制及其对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法免疫组织化学检测乳腺癌组织和癌旁组织中GRHL3和SNX16的表达变化;通过建立过量表达GRHL3的乳腺癌细胞MCF7,Western blot检测GRHL3、SNX16在MCF7细胞中表达变化;利用分子克隆技术构建含有SNX16基因启动子和突变的SNX16基因启动子的荧光素酶报告基因表达载体,通过检测荧光素酶活性变化观察GRHL3对SNX16基因启动子的调控作用;利用Transwell迁移和侵袭实验检测GRHL3过量表达的MCF7细胞迁移和侵袭能力的影响,并通过转染SNX16 cDNA的表达载体回补SNX16表达,观察MCF7细胞的迁移和侵袭能力变化。结果免疫组织化学结果显示:与癌旁组织相比,乳腺癌组织中GRHL3高水平表达,而SNX16的表达水平较低;Western blot结果显示,过量表达GRHL3的MCF7,SNX16的表达水平显著降低(P<0.05);通过分子克隆技术成功构建SNX16基因启动子和突变的SNX16基因启动子的荧光素酶报告基因表达载体;荧光素酶活性检测实验结果显示GRHL3对荧光素酶报告基因SNX16启动子具有显著抑制作用,突变后GRHL3结合位点,GRHL3对SNX16基因启动子的负调控作用消失;Transwell迁移和侵袭实验结果说明过表达GRHL3的MCF7细胞侵袭和迁移能力显著增强,回补SNX16后,MCF7细胞侵袭和迁移能力明显减弱。结论在乳腺癌细胞中,转录因子GRHL3对SNX16的启动子具有负调控作用,GRHL3通过结合SNX16基因启动子抑制SNX16表达,促进细胞的迁移和侵袭。
- 周利利曾凡军涂珍珍涂珍珍郭思佳郭思佳周海胜
- 关键词：乳腺癌迁移
- 基于CRISPR/Cas9系统建立GPR108缺失的THP-1细胞株及其功能初步研究
- 2023年
- 目的建立稳定敲除G蛋白偶联受体108(GPR108)基因的人单核细胞白血病细胞系(THP-1),并初步研究其功能。方法根据人GPR108基因序列设计,合成可应用于成簇有规律的间隔短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9)的单链引导RNA(sgRNA1和sgRNA2)对应的DNA,利用分子克隆技术在pL-CRISPR.EFS.GFP慢病毒载体中插入sgRNA1和sgRNA2序列,构建重组载体(pL-CRISPR.EFS.GFP-sgRNA1和pL-CRISPR.EFS.GFP-sgRNA2)。将测序正确的重组体与包装质粒(pMD2.G和psPAX2)共转染293T细胞进行病毒包装,收集病毒液并感染THP-1细胞。利用流式细胞分选技术分离GFP+细胞于96孔培养板中,培养获得单细胞克隆。利用聚合酶链式反应(PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测THP-1细胞中GPR108是否敲除成功。应用脂多糖(LPS)刺激GPR108-/-和GPR108+/+的THP-1细胞,Western blot法检测细胞内白细胞介素-8(IL-8)的表达,流式微球技术(CBA)检测细胞培养上清液中的IL-8浓度。结果成功构建重组慢病毒载体pL-CRISPR.EFS.GFP-sgRNA,转染THP-1细胞后通过流式细胞仪分选获得单细胞克隆F9。PCR和Western blot法均证实F9是GPR108-/-THP-1单细胞克隆。LPS刺激GPR108-/-和GPR108+/+THP-1细胞,Western blot和CBA的结果均显示敲除GPR108的THP-1细胞中IL-8的合成和分泌明显减少。结论成功建立GPR108缺失的THP-1细胞株;缺失GPR108的THP-1细胞在受到LPS刺激时产生的趋化因子IL-8显著降低。为后续研究GPR108在免疫炎症中的作用奠定了基础。
- 王雯雯涂珍珍臧丹丹汪璟张银涛周海胜
- 关键词：THP-1细胞IL-8
- 胃癌组织中GRHL3的表达及其临床意义被引量：2
- 2018年
- 目的探讨GRHL3在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化En Vision两步法检测100例胃癌组织及40例癌旁组织中GRHL3蛋白的表达,分析其与胃癌临床病理特征及预后的关系。结果 GHRL3在胃癌组织中的高表达率为64. 0%(64/100),在癌旁组织中高表达率为25. 0%(10/40); GRHL3蛋白阳性与患者性别(χ~2=0. 794,P=0. 373)、年龄(χ~2=1. 500,P=0. 211)、肿瘤位置(χ~2=0. 568,P=0. 451)、肿瘤大小(χ~2=1. 145,P=0. 285)、分化程度(χ~2=1. 382,P=0. 240)均无关;与肿瘤临床TNM分期(χ~2=7. 545,P=0. 006)显著相关。GRHL3表达水平与胃癌患者预后有相关性。结论 GHRL3在胃癌中的高表达率高于癌旁组织,GRHL3的表达与临床分期有相关性,且GRHL3高表达影响患者预后,检测胃癌组织中GRHL3基因的表达水平有助于分辨肿瘤的恶性程度,并对患者术后治疗和预后分析有一定的指导意义。
- 许易诚郭立钰蔡文文涂珍珍周海胜熊茂明
- 关键词：胃肿瘤免疫组织化学预后
- IL-6介导LMO4表达在银屑病及其共病炎症性肠病中的作用和机制
- 背景银屑病是一种难以治愈的慢性炎症性皮肤疾病,其最常见的组织病理学特征是皮下血管增生导致的红斑,表皮增生及角化不全导致的大量麟屑。银屑病的发病机制较为复杂,在有银屑病遗传背景的人群中,机体受创或暴露在高危环境因素中,固有...
- 涂珍珍
- 关键词：银屑病IL-6炎症性肠病
