龙永艳 作品数:9 被引量:49 H指数:4 供职机构: 南昌市疾病预防控制中心 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
基于多重荧光定量PCR技术快速检测桶装水中大肠埃希氏菌和铜绿假单胞菌 被引量:1 2022年 目的:建立大肠埃希氏菌(Escherichia coli,E.coli)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa)多重荧光定量PCR检测方法,用于桶装水中E.coli和P.aeruginosa的同时检测。方法:根据国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库中uid A和gyr B基因序列设计引物和探针,优化体系退火温度,构建多重荧光定量PCR检测体系,评价方法特异性、灵敏度、重复性和回收率,同时将该方法用于检测桶装水中的E.coli和P.aeruginosa。结果:多重荧光定量PCR能够同时检测E.coli和P.aeruginosa,方法检测周期短,从核酸提取到完成PCR扩增只需要2.0 h。方法检测灵敏度高,E.coli和P.aeruginosa的检测限均为102CFU·mL^(-1),且扩增效率高、线性范围宽、标准曲线具有良好的线性相关性;组内重复性好,16组扩增数据的变异系数在0.58%~2.34%,均小于5%;方法特异性强,能够准确区分检测各种非目标菌,且引物和探针之间不存在交叉扩增;对高浓度目标菌回收率均在70%以上,且能够用于桶装水目标菌的加标检测。结论:该方法检测性能优越,能够同时、快速、灵敏、准确的检测桶装水中的E.coli和P.aeruginosa。 龙慧 帅淑芬 龙永艳 王伟 吴葵 钟淙关键词:桶装水 大肠埃希氏菌 铜绿假单胞菌 645例HIV抗体筛查阳性样本确证检测分析 被引量:16 2014年 目的对645例HIV抗体筛查阳性标本确证实验结果进行分析,给HIV抗体检测工作提供指导依据。方法采用免疫印迹法(WB)对645例HIV抗体筛查阳性检测样品进行确证检测,对确证结果不确定者进行随访复查。结果 645例筛查阳性者中,确证HIV-1抗体阳性550例,阳性率为85.3%;阴性56例,阴性率为8.7%;不确定结果 39例,占筛查阳性的6%。反应条带gp160和gp120的出现率最高,分别为100%、99.5%;p17和p55出现率较低,为63.5%和40.5%。不确定者中,p24出现单一带型最多占56.4%,7例转为确定者带型分别为gp160/p24、gp160/p24/p66、gp160/p66。结论确定为HIV-1抗体阳性者带型,各带型出现的几率有所差别,HIV抗体不确定者,存在一定的假阳性,应谨慎处理,加强随访检测。 龙永艳 魏芳芳 冯长华 倪贤生 贺凤兰关键词:HIV抗体 假阳性 食品从业人员肠道细菌CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的携带状况研究 被引量:3 2016年 目的调查食品从业人员肠道革兰阴性细菌CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因的携带状况及基因型分布。方法选择140名食品从业人员健康体检时的肛拭子标本,用加入头孢曲松钠的营养琼脂平板筛选样本中革兰染色阴性耐药菌,PCR方法扩增blaCTX-M耐药基因,对阳性扩增产物进行测序以明确CTX基因亚型。结果 140份肛拭样本中有125份样本中分离到头孢曲松钠耐药革兰阴性菌,携带率为89.3%(125/140)。125株耐药菌株中CTX-M的检出率为97.6%;五组CTX中检出率最高的为CTX-M-9组56.0%,其次为CTX-M-1组38.4%,有4株菌同时检测到CTX-M-9组和CTX-M-1组酶。通过序列比对,共检测到9种CTX基因亚型,检出率最高的是CTX-M-14和CTX-M-15。结论食品行业从业人员对β-内酰胺类药物普遍存在有抗性的肠道细菌,产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的革兰染色阴性细菌广泛存在,鉴于其工作特点,获得并导致耐药菌传播的风险性很高。 龙永艳 倪贤生 李端 王瑞白 陈海婴 李娟 阚飙关键词:食品从业人员 超广谱Β-内酰胺酶 不对称PCR结合滚环扩增信号放大技术检测牛肉中单增李斯特菌 2023年 建立一种不对称聚合酶链式反应结合滚环扩增信号放大(Rolling circle amplification,RCA)的技术,对牛肉中单增李斯特菌进行快速灵敏检测。通过改变上下游引物的浓度,扩增得到一条带有通用序列的单链DNA,进而引发RCA反应,产生大量的G-四链体序列,硫黄素T嵌入G-四链体序列中产生荧光信号,从而实现对单增李斯特菌的检测。在最优的条件下,本研究所建立的方法对单增李斯特菌在PBS中的检测限为3.6×101 CFU/mL;在加标的牛肉中,其检测限达到了3.6×102 CFU/g。本研究所建立的方法可实现单增李斯特菌的快速检测,通过改变特异性的引物,该方法也可用于其他食源性致病菌的检测,具有较高的推广应用价值。 龙慧 钟淙 帅淑芬 龙永艳 王伟 吴葵 吴鑫关键词:单增李斯特菌 牛肉 3种核酸提取方法检测甲型H1N1流感病毒的比较 被引量:10 2010年 目的选择常见的3种核酸提取方法,比较其对低拷贝数甲型H1N1流感病毒核酸检测的敏感性差异,为实验室应用和结果的评价提供依据。方法对已确定阳性的甲型H1N1流感病毒标本,作10-1~10-4系列稀释,选用Promega公司全自动核酸提取仪及配套试剂盒、QIAGEN公司Rneasy MiniKit和国产H公司提取试剂盒3种核酸提取方法提取上述标本核酸模板,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(荧光RT-PCR)对其进行评价。结果在对不同拷贝数流感病毒的检测中,3种核酸提取方法以Promega公司全自动核酸提取仪提取效率最高,以此提取效率作为100%,则QIAGEN Rneasy MiniKit和国产H公司提取试剂盒的平均提取效率依次为83.27%、55.70%。经方差分析,3种方法之间存在显著性差异(P<0.05)。结论各试剂之间提取核酸的效率存在显著差异,建议根据实际情况采用合适的核酸提取试剂和方法。 傅松哲 倪贤生 夏文 龙永艳 涂俊凌关键词:实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 餐饮从业人员耐喹诺酮类药物大肠埃希菌基因突变研究 被引量:1 2019年 目的调查和分析餐饮从业人员体检人群分离的大肠埃希菌gyrA、gyrB、parC、parE基因的突变特征。方法用加入4μg/mL环丙沙星营养琼脂平板筛选耐环丙沙星大肠埃希菌耐药菌株,PCR方法扩增其gyrA、gyrB、parC、parE基因,琼脂稀释法测定环丙沙星的最小抑菌浓度(MIC)值。结果共分离到112株环丙沙星耐药大肠埃希菌,所有菌株的MIC值都介于16~512μg/mL之间。gyrA检测到3种突变类型:112株都出现Ser83→Leu替代,103株发生Asp87→Asn替代,7株菌出现Asp87→Tyr替代。gyrB检测到2种突变类型:6株菌出现Ser343→Phe替代,9株菌出现Ser492→Asn替代。parC共检测到7种突变类型:112株菌都发生Ser80→Ile代替,12株大肠埃希菌发生Glu84→Val代替,5株菌发生了Ala56→Thr替代,各有1株菌发生Glu84→Gly和Glu84→Lys代替,另外各有1株发生Ala108→Thr和Val144→Gly替代。parE基因共检测到2种突变类型:有2株菌发生了Leu445→His代替,49株菌发生Ser458→Ala代替。其中gyrA Ser83→Leu、Asp87→Asn、Asp87→Tyr替代和parC Ser80→Ile、Glu84→Val、Glu84→Gly、Glu84→Lys代替,为gyrA和parC喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变引起的氨基酸替代类型。所有菌株都有2个及以上氨基酸位点的突变,都是高耐药菌株。环丙沙星的MIC值32μg/mL以上的耐药菌株都发生了3个以上位点的突变。Spearman相关系数显示,gyrB492、parE458的突变与环丙沙星的MIC值成正相关,差异有统计学意义(r=0.226 9,P=0.016 1;r=0.273 7,P=0.003 5)。结论餐饮从业人员耐喹诺酮药物的大肠杆菌gyrA、gyrB、parC、parE基因具有多种氨基酸替代类型,gyrB492、parE458的突变与环丙沙星的MIC值呈正相关。 龙永艳 倪贤生 吴葵 阚飙关键词:餐饮从业人员 喹诺酮耐药 大肠埃希菌 基因突变 质粒介导的喹诺酮耐药细菌的耐药机制 被引量:8 2018年 喹诺酮类抗菌药物是一种重要的广谱抗生素,属于化学合成抗菌药物。喹诺酮类抗菌药物,由于其优良的抗菌活性,安全性好,目前已在临床、畜牧业和水产业中广泛使用。耐药质粒的水平转移是喹诺酮耐药在不同细菌间传播的主要原因。本文就质粒介导的喹诺酮耐药机制和不同来源菌株质粒介导的喹诺酮耐药在国内的流行情况进行概述。 龙永艳 吴葵 傅松哲 涂俊凌关键词:喹诺酮耐药 质粒介导 2012年江西省南昌市手足口病病原学监测结果分析 被引量:7 2013年 目的分析江西省南昌市2012年临床诊断为手足口病患者标本的病原学检测结果,为手足口病的临床诊治和防控提供实验室依据。方法采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(real time RT-PCR)对2012年1—12月间1028例医院诊断为手足口病的患者标本核酸进行鉴定分型,并统计分析。结果临床诊断为手足口病的患者标本1028份中,632份为肠道病毒通用阳性,总阳性率为61.48%,其中肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)、EV71和Cox A16混合感染、其他肠道病毒阳性检出率分别为39.0%、10.21%、0.09%和12.16%。病原学检测阳性标本中男女性别比为1.8∶1;发病年龄段主要集中在5岁以下儿童(94.36%),尤其是3岁以下男童。结论 2012年南昌地区手足口病的主要病原体为EV71,且较2009—2011年有上升趋势。 贺凤兰 夏文 周显凤 樊国印 龙慧 龙永艳 倪贤生关键词:手足口病 EV71 COX 病原学监测 食物中毒样品中大肠埃希氏菌的分离、检测和鉴定 被引量:3 2022年 目的:建立食物中毒样品中大肠埃希氏菌(Escherichia coli)的检测方法,并对分离的大肠埃希氏菌进行生化鉴定和药敏分析。方法:根据E. coli特异性基因设计引物和探针序列,建立荧光定量PCR检测体系,并使用VITEK系统对分离的E. coli进行生化鉴定和药敏分析。结果:成功建立了荧光定量PCR检测E. coli的方法,方法检测灵敏度高(LOD为10 CFU·mL^(-1))、特异性强,应用该方法对10份食物中毒样品中的E. coli进行检测,发现4份阳性样本,纯培养后获取4株E. coli,进一步的VITEK生化鉴定结果表明这4株分离株为E. coli,药敏分析结果显示4株E. coli分离株均表现为多重耐药株。结论:本研究建立的荧光定量PCR能够灵敏、准确地检测食物中毒样品中的E. coli,且通过生化鉴定和药敏分析掌握食物中毒样品中E. coli的生化特征,为预防和控制E. coli引发的食物中毒提供了科学依据。 龙慧 龙永艳 王伟 吴葵 樊国印关键词:大肠埃希氏菌 荧光定量PCR 生化鉴定 药敏分析