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兔脂肪干细胞的体外分离培养特性被引量：6: 2009年; 背景:现有国内外文献报道的脂肪干细胞分离、培养方法并不完全一致,所应用的消化酶、消化方法、培养基等均存在差异。目的:观察体外分离培养的兔脂肪干细胞生物学特性。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-04/2008-03在昆明医学院生物医学中心干细胞所完成。材料:健康成年新西兰大白兔6只,由昆明医学院实验动物中心提供。Ⅰ型胶原酶为美国Gibco公司产品,胰蛋白酶为美国Sigma公司产品。方法:无菌切取兔腹股沟皮下脂肪垫,采用Ⅰ型胶原酶搅拌消化法分离培养原代脂肪干细胞,待细胞生长至80%融合时传代。主要观察指标:倒置显微镜和苏木精-伊红染色观察细胞形态及生长情况,免疫荧光细胞化学染色检测细胞表面抗原的表达,MTT比色法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞增殖指数。结果:自兔皮下脂肪分离培养获得的脂肪干细胞增殖迅速,低密度生长时呈三角形或短梭形,核/浆比例较大,接近融合时呈成纤维细胞样外观,长期传代形态无明显改变。第3代脂肪干细胞表面抗原CD44呈阳性表达,CD34为阴性;细胞生长曲线呈"S"形,在对数生长期其细胞倍增时间为59h。随传代次数的增加,来自同一供体的兔源性脂肪干细胞增殖指数逐渐升高,至第8代达到最高,以后逐渐降低。结论:兔皮下脂肪组织中含有丰富的间充质干细胞,兔源性脂肪干细胞体外以成纤维细胞样形态贴壁生长,表达CD44表面标志物,具有较强的体外增殖能力。; 唐少锋刘承杏姬林松马涛李世和; 关键词：脂肪干细胞生物学特性

兔骨髓基质干细胞体外定向分化为软骨细胞被引量：1: 2007年; 目的体外诱导兔骨髓基质干细胞(BMSC)向软骨细胞定向分化,并对分化后的细胞进行鉴定.方法选用16周新西兰大白兔,于胫骨或股骨抽取骨髓,经梯度离心、培养、扩增,取第3代BMSC按一定比例种植于6孔板中,并加入含有转化生长因子β1、地塞米松和维生素C的培养液.于不同时间点取材固定,甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化鉴别.结果诱导的软骨样细胞甲苯氨蓝异染性;Ⅱ型胶原免疫组化阳性.结论在本实验条件下,获取的兔BMSC生长稳定、增殖快,并成功地诱导其向软骨细胞表型转化.; 姬林松吴迪董坚李世和唐少峰马涛; 关键词：骨髓基质干细胞软骨细胞

兔脂肪干细胞分离培养及成脂成骨分化潜能的研究被引量：1: 2008年; 目的分离培养兔脂肪干细胞,并在特定条件下诱导分化,观察其成脂成骨潜能.方法无菌切取新西兰大白兔腹股沟脂肪垫,Ⅰ型胶原酶消化,分离培养原代细胞,传代后,取第3代细胞接种培养于6孔板,分别在成脂和成骨培养液中诱导分化,采用油红O染色、钙钴法碱性磷酸酶染色和Alizarin red S染色鉴定分化结果.结果分离培养获得的细胞具有很强的增殖能力;成脂诱导的细胞油红O染色阳性,成骨诱导的细胞钙钴法碱性磷酸酶染色和Alizarin red S染色阳性.结论本实验分离培养的细胞为脂肪干细胞,具有成脂和成骨潜能,可作为骨组织工程种子细胞.; 唐少锋刘承杏吴迪姬林松马涛李世和; 关键词：脂肪组织干细胞细胞分化

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马涛

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