王珊
- 作品数：33 被引量：13H指数：2
- 供职机构：首都儿科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SIRT2基因通过调节WNT通路在RA诱导的神经管畸形的初步试验研究
- 2024年
- 目的:基于敲除sirtuin2(SIRT2)基因的人胚胎肾细胞(HEK293)模型的转录组学结果,在细胞水平和动物模型中探究SIRT2基因是否通过调控WNT通路参与维甲酸(Retinoic acid,RA)诱导的神经管畸形(neural tube defects,NTDs)。方法:培养SIRT2敲除组(KO-SIRT2)和正常组(KO-Con)的HEK293细胞,提取总RNA,应用转录组测序技术(RNA-seq)对上述两组细胞进行分析,寻找差异表达基因(P<0.05,|log_(2)FoldChange|≥1)并进行GO (Gene Ontology)以及KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析。RA分别诱导KO-SIRT2组和KO-Con组的HEK293细胞,应用Western Blot(WB)技术检测WNT5B表达水平。建立RA诱导的NTDs小鼠模型,应用免疫组织化学染色技术(IHC)检测孕龄10.5天(E10.5)的胚鼠脑组织Sirt2和Wnt5b蛋白水平。结果:与KO-Con组相比,KO-SIRT2组的HEK293细胞中显著改变的差异表达基因有209个,KEGG分析集中在WNT、Hippo、PI3K-Akt等信号通路。敲除SIRT2组,KO-SIRT2组的WNT5B蛋白水平升高。RA诱导HEK293细胞,KO-Con组的WNT5B蛋白水平升高。IHC结果显示,RA诱导的NTDs胎鼠脑组织Sirt2蛋白和Wnt5b蛋白水平增高。结论:SIRT2基因可以通过调节WNT通路参与RA诱导NTDs的发生。
- 王怡何学佳曾雨冰刘帆裴培王珊
- 关键词：神经管畸形WNT通路胚胎发育
- 生物标志物的检测产品在制备辅助诊断、诊断或预后评判神经管畸形的产品中的用途
- 本发明提供的生物标志物的检测产品在制备辅助诊断、诊断或预后评判神经管畸形的产品中的用途，所述生物标志物为ACSS2基因或其转录产物或其表达产物，本发明经过研究发现，叶酸缺乏通过改变ACSS2导致NTDs的发生，这可能是由...
- 王珊张霆刘帆
- 蛋白质翻译后修饰与神经退行性疾病
- 2024年
- 神经退行性疾病是严重影响中枢神经系统的一类复杂、难治性疾病,其特征是中枢神经系统不同区域神经元功能或者结构的进行性丧失。由于神经受损后难以再生、恢复,目前尚无治疗神经退行性疾病的有效策略。神经退行性疾病患者逐渐增多,给社会带来巨大经济负担,找到神经退行性疾病的治疗新靶点、改善预后具有重要意义。蛋白质翻译后修饰可以调节各种细胞过程,包括蛋白质-蛋白质相互作用、酶的活性和基因表达。神经退行性疾病的发生和进展与异常的蛋白质翻译后修饰有关。许多翻译后修饰,如乙酰化、磷酸化和乳酸化修饰等,被证实参与神经退行性疾病造成的脑认知损伤。本文综述了蛋白质翻译后修饰在神经退行性疾病中的重要作用,同时总结了几种蛋白质翻译后修饰在神经退行性疾病发生、发展中的作用,以期为研究神经退行性疾病的分子生物学机制提供新思路。
- 刘帆刘帆王怡何学佳裴培裴培张霆
- 关键词：神经退行性疾病蛋白质翻译后修饰磷酸化乙酰化
- 一种shRNA、慢病毒载体及其构建方法和应用
- 本发明提出了一种shRNA、慢病毒载体及其构建方法和应用，所述shRNA的核苷酸序列为：GCAATCAGTTAGCAGACTTGA。慢病毒载体，包括载体质粒，所述载体质粒中包含有上述shRNA序列。本发明提出了慢病毒对T...
- 邰隽王珊孔雅茹季洁占小俊姚海兰董佳佳刘一帆齐雨薇
- 一种检测神经管畸形的分子标志物及其应用
- 本发明属于生物领域，具体涉及一种检测神经管畸形的分子标志物及其应用。该分子标志物包括特异性标志基因和/或蛋白质；其中，所述特异性标志基因为Pax6、Nestin和Bmp4中的至少一种，所述蛋白质为H2AK119、Mdm2...
- 裴培王珊张霆崔小岱
- 文献传递
- 低叶酸联合甲氨蝶呤诱导神经管畸形小鼠模型的建立被引量：6
- 2019年
- 目的 通过低叶酸饲喂联合二氢叶酸还原酶竞争性抑制剂甲氨蝶呤对小鼠胚胎神经管发育产生影响,建立小鼠神经管畸形的动物模型。 方法 实验采用C57BL/6J小鼠,通过随机数字表法,分为正常饲喂组(以正常鼠粮饲喂)、低叶酸组以及低叶酸+甲氨蝶呤组。低叶酸+甲氨蝶呤组在孕7.5 d给予不同剂量的甲氨蝶呤(分别为1.00 mg/kg、1.25 mg/kg、1.50 mg/kg、2.50 mg/kg、3.50 mg/kg、4.50 mg/kg)腹腔注射,低叶酸组则给予等体积的生理盐水。于孕13.5 d收集3组小鼠胚胎,观察胚胎的表型,记录正常胎与畸形胎的数量、胎鼠顶臀长、胎鼠体质量以及胎盘的重量。 结果 低叶酸组小鼠可见发育迟缓,未见小鼠胚胎神经管畸形的发生;低叶酸+甲氨蝶呤组小鼠的神经管畸形比率最高为36.5%,且甲氨蝶呤应用剂量为1.50 mg/kg时,小鼠的畸形率最高,神经管畸形表型多为脊柱裂。 结论 低叶酸饲喂联合甲氨蝶呤可诱导小鼠胚胎神经管畸形的发生。
- 裴培崔小岱张霆王珊
- 关键词：神经管畸形甲氨蝶呤小鼠
- 应用CRISPR/Cas9系统构建MTHFD1基因敲除的HEK-293细胞系
- 2019年
- 目的:利用成簇的、规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)基因编辑技术构建亚甲基四氢叶酸脱氢酶1(methylenetetrahydrofolate dehydrogenase 1, MTHFD1))基因敲除人胚肾(HEK-293)稳定细胞系。方法:利用在线软件筛选出评分最高的3条针对MTHFD1基因的单向导RNA (sg RNA),然后合成sg RNA序列并将其插入到含有GFP标签的质粒中;重组质粒转染HEK-293细胞后通过流式细胞仪分选出已被转入sg RNA的单细胞,通过测序确认单克隆细胞系中MTHFD1的DNA序列突变状态;最后应用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real-time quantitative Polymerase Chain Reaction, RT-q PCR)和蛋白质印迹(Western blot)方法检测单克隆细胞中MTHFD1的m RNA和蛋白表达水平。结果:重组载体中含有正确的sg RNA序列;测序结果显示该细胞系中MTHFD1基因发生了单个碱基插入突变和6个碱基的缺失突变;RT-qPCR结果显示单克隆细胞系中MTHFD1在m RNA水平显著降低;Western blot检测成功构建MTHFD1蛋白缺失的HEK-293细胞。结论:本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建的MTHFD1敲除HEK-293细胞系。
- 解晓露王芳裴培成翕悦包怡华包怡华王珊
- 关键词：人胚肾细胞基因敲除
- 一种孕期肠道菌群代谢紊乱检测物在制备检测NTDs胎儿试剂中的应用
- 本发明公开了一种孕期肠道菌群代谢紊乱检测物在制备检测NTDs胎儿试剂中的应用。其中，所述NTDs胎儿为孕母低叶酸致NTD胎儿。所述孕期肠道菌群代谢紊乱检测物用于检测甘油磷脂代谢相关肠道菌群或/和甘油磷脂合成相关代谢物；所...
- 王珊张敏何学佳
- 维甲酸诱导小鼠神经管畸形胚脑中H2BK120ub1的全基因组状态变化被引量：1
- 2022年
- 目的 利用染色质免疫共沉淀测序技术(ChIP-seq)分析E10.5 d正常小鼠胚脑组织与维甲酸(RA)诱导神经管缺陷(NTDs)小鼠胚脑组织H2BK120单泛素化(H2BK120ub1)修饰的全基因图谱,以期发现H2BK120ub1修饰与神经管发育通路基因表达的关系,为NTDs的诊断及治疗提供生物学靶点及依据。方法 孕鼠分为随机对照组和RA诱导的NTDs组,利用ChIP-seq技术对获得的H2BK120ub1特异结合DNA片段进行序列鉴定,获取比对Reads,进行全基因组的Peak分析、基因注释(GO)以及功能富集分析peak相关基因的生物学功能。结果 E10.5 d正常小鼠脑组织和RA诱导神经管畸形小鼠脑组织两组间有306个基因有显著的H2BK120ub1差异,根据GO富集的基因个数进行统计:在cellular component中前三位为别为Cell(82个基因), Cell part(82个基因),Organelle part(52个基因);在biological process中前三位为别为celluar process(68个基因),metabolic process(47个基因),biological regulation(40个基因);KEGG通路分析的结果主要富集于刺猬因子(HH)信号通路、TGF-beta信号通路、Wnt信号通路等参与调控神经管发育的关键信号通路,有显著统计学意义(P<0.05)。结论 H2BK120ub1修饰的差异可作为NTDs的一个潜在的诊断及治疗靶点。
- 王珊何学佳成翕悦林烨裴培占小俊
- 关键词：维甲酸神经管缺陷
- 低叶酸联合甲氨蝶呤诱导神经管畸形胎鼠模型的lncRNA相关ceRNA网络构建及分析被引量：1
- 2023年
- 目的 构建低叶酸联合甲氨蝶呤(methotrexate, MTX)诱导神经管畸形(neural tube defect, NTDs)的胎鼠模型中lncRNA相关的竞争性内源RNA(competing endogenous RNAs, ceRNA)调控网络,探讨低叶酸条件下NTDs中lncRNA可能的调控作用。方法 利用SPF级、7~8周龄的健康雌性C57BL/6J小鼠(体质量18~22 g)40只及健康雄性C57BL/6J小鼠(体质量20~22 g)20只,建立叶酸缺乏情况下的NTDs胎鼠模型为实验组,并设立对照组,每组选取3只胎鼠分离脑组织并提取总RNA,进行高通量RNA测序(RNA sequencing, RNA-seq),并对测序结果进行lncRNA-mRNA共表达网络构建、对共表达网络中mRNA进行GO功能富集及KEGG通路富集分析、构建lncRNA相关ceRNA调控网络,并用qPCR验证胎鼠、细胞样本中lncRNA Xist、Sema4f、Padi2的相对表达量。结果 测序共检测到差异lncRNA 47个(Log2FC>0.585或Log2FC<-0.585,FDR<0.05),其中上调38个,下调9个。构建lncRNA和mRNA基因间的共表达网络,并对共表达网络关系中的mRNA进行KEGG/GO功能富集分析,发现GO条目中管道发育(P<0.001)、胶原蛋白代谢过程(P=0.002)、系统发育(P=0.002)等显著富集,在KEGG通路分析中富集到与NTDs密切相关的PI3K-Akt通路;构建lncRNA相关ceRNA调控网络,发现lncRNA Xist、LOC102633899、1700086L19Rik等靶向差异基因Sema4f、Padi2、Lin28a等;选取与神经发育密切相关的lncRNA Xist及预测的靶基因Sema4f、Padi2,用qPCR验证胎鼠脑组织、细胞样本,结果与测序一致,相较对照组,均显著下调(P<0.05)。结论 在叶酸缺乏下的NTDs胎鼠模型中lncRNA Xist及预测的靶基因Sema4f、Padi2发生显著下调。
- 曾雨冰刘帆裴培王珊
- 关键词：神经管畸形表观遗传学
