刘世芳 作品数:23 被引量:36 H指数:4 供职机构: 新疆农业大学动物医学学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 新疆维吾尔自治区自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 环境科学与工程 天文地球 更多>>
马泰勒虫新疆株EMA2基因的克隆及原核表达 2019年 裂殖子表面抗原蛋白家族因其高抗原保守性常作为马泰勒虫ELISA检测方法的基质。本研究根据马泰勒虫EMA2基因序列合成引物,以马泰勒虫新疆株DNA为模板,扩增获得目的基因,将其连接至pEASY-E1载体构建重组质粒pEASY-E-TE,并转化至大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达重组EMA2蛋白并鉴定。结果显示:PCR扩增获得了约819bp特异性DNA片段,构建了pEASY-E-TE重组质粒,成功诱导表达了35kDa的可溶性目的蛋白;经SDS-PAGE、Western blot鉴定,重组蛋白rEMA2具有良好的抗原性。本试验克隆表达的重组蛋白rEMA2可为ELISA方法的建立及后期研究提供靶基因材料。 张杨 刘世芳 海尼木古力·艾合买提 王盼举 宋瑞其 巴音查汗关键词:原核表达 新疆和静县牦牛环形泰勒虫病流行病学调查 杜兰兰 谢小婉 刘世芳 郭子涵 闻秀秀 李才善 巴音查汗 郭庆勇中国新疆部分地区马泰勒虫感染的差异性及系统发育分析 被引量:5 2017年 【目的】分析新疆南北疆马泰勒虫感染的差异性及地方流行株遗传进化距离,研究马泰勒虫遗传多样性及其感染率。【方法】采自南北疆478份疑似马匹的血样,经马泰勒虫PCR方法检测,分析马泰勒虫感染情况并应用最大似然法(ML)基于18 S rRNA基因的遗传进化树及构建系统发育树。【结果】在所采集的样品中,中国新疆北疆地区马泰勒虫感染阳性率为13.96%(25/179),中国新疆南疆地区马泰勒虫感染阳性率为27.09%(78/299)。印度、南非、西班牙、伊朗等地方株聚为一支,扩增的18S rRNA基因(MF398476、MF398477)与瑞典地方株聚为一支。【结论】中国新疆南疆马泰勒虫感染率高于北疆,南北疆马泰勒虫感染存在显著性差异(P=0.001<0.05),在不同年龄段马匹的感染无显著性差异(P>0.05);扩增的马泰勒虫阿勒泰、托克逊地方流行株(MF398477、MF398476)与瑞士地方株(KM046918.1)亲缘关系最近。 刘世芳 郭庆勇 闻秀秀 张梦园 党娜娜 阿拉西.阿滨 巴音查汗关键词:系统发育 阿勒泰地区三个县牛新孢子虫病的rELISA检测 吾力江 刘世芳 杜兰兰 王丽君 张梦圆 巴音查汗马梨形虫病双重PCR检测方法的建立 被引量:5 2018年 为了建立马梨形虫病双重PCR检测方法,试验根据Gen Bank发表的驽巴贝斯虫和马泰勒虫18S rRNA保守基因序列分别合成2对特异性引物,以核酸混合物为模板,优化反应条件建立马梨形虫病双重PCR检测方法,并检验该方法的特异性和敏感性。同时用该双重PCR检测方法对采自昭苏种马场的马疑似病例全血进行检测,并与镜检法和单重PCR法进行比较。结果表明:该双重PCR检测方法能对驽巴贝斯虫和马泰勒虫核酸扩增出大小为529 bp和789 bp特异性目的片段,而对双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、羊泰勒虫、牛巴贝斯虫核酸的扩增均为阴性;驽巴贝斯虫和马泰勒虫阳性DNA被稀释1×108倍时均能检出其相应目的片段;对采集的46份马疑似病例血样进行PCR诊断,其中驽巴贝斯虫感染率为30.4%(14/46),马泰勒虫感染率为41.3%(19/46);双重PCR检测方法与单重PCR方法的符合率为100%。说明建立的双重PCR检测方法具有一定的特异性和敏感性,可用于驽巴贝斯虫和马泰勒虫临床感染隐性病例的联合检测与鉴别诊断。 瓦热斯·吐尔松 王振宝 阿兵 宋瑞琪 刘世芳 闻秀秀 巴音查汗关键词:驽巴贝斯虫 双重PCR 马泰勒虫感染新西兰兔的病理组织学观察 被引量:2 2019年 旨在研究马泰勒虫感染家兔后器官组织病理变化。以家兔为动物模型,去脾后人工感染马泰勒虫、在其体内进行扩繁,PCR检测是否成功感染,每日进行血液涂片和血常规检查,记录感染率,同时用1只健康兔作为对照;达感染高峰时,试验兔和对照兔进行剖检、制作组织切片,观察其主要器官病理变化。结果显示,感染兔心肌发生颗粒变性及水泡变性,心肌细胞间质增宽;肝脏小叶间静脉淤血,肝细胞呈现水泡变性,甚至气球样变;肺脏呈现典型间质性肺炎的病理变化;肾脏主要表现为急性肾小球肾炎;健康兔的各器官未见明显异常。血常规检测结果显示,感染兔有炎性血象、贫血和轻度脱水;感染兔临死前血液涂片检查发现红细胞中含大量马泰勒虫裂殖子,而健康兔未见异常。PCR检测得到512bp的目的条带,与预期目的片段相符。综上表明,感染兔心脏、肝脏、肺脏、肾脏均有明显的病理变化,与健康兔对比差异明显。 王莉君 刘世芳 段永只 党娜娜 巴音查汗关键词:病理切片 血常规 新疆部分地区牛环形泰勒虫流行病学研究 谢小婉 杜兰兰 郭子涵 刘世芳 闻秀秀 李财善 巴音查汗 郭庆勇马泰勒虫EMA2基因的原核表达及应用于ELISA检测 张杨 刘世芳 许正茂 谢小婉 闻秀秀 王盼举 杜兰兰 巴音查汗马泰勒虫裂殖子表面抗原2基因真核表达载体的构建及在293T细胞中表达 2020年 为了构建马泰勒虫裂殖子表面抗原(Theileria equi merozoite antigen,EMA)2的真核表达载体,试验采用PCR方法扩增出马泰勒虫EMA2基因,并构建真核表达载体pCMV-Flag-N-EMA2,用其转染293T细胞,通过Western-blot法检测EMA2蛋白的表达情况。结果表明:EMA2基因长度为819 bp,核酸测序证实pCMV-Flag-N-EMA 2真核表达载体构建成功,转染后Western-blot法可检测到EMA2蛋白的表达。说明马泰勒虫特异性的pCMV-Flag-N-EMA2真核表达载体可转染至293T细胞中,实现体外表达。 张杨 肖培培 王盼举 张梦圆 许正茂 刘世芳 巴音查汗关键词:同源重组 转染 真核表达载体 马泰勒虫昭苏流行株在去脾小鼠体内的扩繁试验 马泰勒虫病是马泰勒虫寄生于马属动物网状内皮系统、红细胞内而引起的蜱传血液原虫病。该病临床上表现稽留热、贫血、呼吸困难、黄疸及败血症等症状,如诊治不及时,死亡率极高,对地方马产业的发展危害较大。据前期实验调查发现,该病在新... 刘世芳 王盼举 张梦圆 闻秀秀 吾丽江 王莉君 巴音查汗关键词:实验动物模型 昆明白小鼠 文献传递