冯景
- 作品数：9 被引量：30H指数：3
- 供职机构：上海交通大学附属第六人民医院更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人EZH2基因编码区及3'非翻译区融合蛋白重组慢病毒表达载体构建及其在293T细胞中的表达被引量：4
- 2012年
- 目的构建携带人EZH2基因编码区(coding region,CDS)及3'非翻译区(3'untranslated region,3'UTR)融合红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)重组慢病毒表达载体,使mCherry-EZH2融合蛋白在293T细胞中稳定表达。方法运用In-Fusion定向克隆技术构建人EZH2基因CDS区及3'UTR融合蛋白重组慢病毒表达载体,测序无误后抽提质粒,转染293T细胞,包装病毒,测定病毒滴度。Western blot检测mCherry-EZH2的表达。结果测序证实重组慢病毒表达载体基因序列完全正确;病毒颗粒包装成功,滴度为1.59×109IU/ml;Western blot检测293T细胞中可以表达mCherry-EZH2融合蛋白。结论成功构建人EZH2基因CDS区及3'UTR融合蛋白重组慢病毒表达载体及病毒,其mCherry-EZH2可以在293T细胞中稳定表达。为进一步分析可能调控EZH2基因CDS区及3'UTR表达的miRNA奠定前期实验基础。
- 彭攸赵卫卫李晓娇王玉平卢晓佳邬美玉冯景
- 关键词：EZH2基因红色荧光蛋白
- 区域内HPV亚型分布特点及其与宫颈病变的关系被引量：7
- 2017年
- 目的了解上海市奉贤地区妇女生殖道人乳头状瘤病毒(HPV)的感染状况及其分布特点,分析其与宫颈病变的关系,为区域内HPV防治提供初步建议。方法以2011年1月至2015年12月于上海市第六人民医院南院接受HPV检测的16岁以上女性为研究对象,对其宫颈分泌物进行HPV的21个亚型分型检测,其中1 374例经阴道镜下定点宫颈活检,确定病理分级,数据录入并应用SPSS20.0软件进行统计学分析。结果研究病例中HPV的21个亚型均有检出,HPV阳性率为17.54%(6 313/35 977),奉贤区5年间HPV感染率较高型别依次是HPV18、HPV52、HPV16、HPVCP8304、HPV58、HPV53;在1 374例宫颈病变中HPV的阳性率为82.75%(237/1 374),在宫颈病变患者中常见型别分布为HPV16、HPV58、HPV52、HPV18、HPV31。结论上海市奉贤地区的HPV感染情况具备一定的地域特征,可根据研究结果制定符合奉贤地区的HPV防治策略。
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- 关键词：人乳头瘤病毒宫颈癌感染率
- EZH2及DNMT1在三阴性乳腺癌中的表达及意义被引量：7
- 2015年
- 目的探讨EZH2及DNMT1在三阴性乳腺癌中的表达特点及与主要临床病理参数的关系。方法采用免疫组化SP法,检测131例三阴性乳腺癌、78例非三阴性乳腺癌及65例癌旁组织中EZH2及DNMT1的表达情况。采用多因素logistic回归分析EZH2及DNMT1阳性表达有关的因素,Spearman等级相关分析三阴性乳腺癌中EZH2及DNMT1表达的相关关系。结果 EZH2蛋白在三阴性乳腺癌组织、非三阴性乳腺癌组织和癌旁组织的阳性表达率分别为86.3%、89.7%和40.0%;DNMT1蛋白在三种组织中的阳性表达率分别为63.4%、66.6%和44.6%;两种蛋白在乳腺癌组织中的表达均高于癌旁组织(P<0.05);两种蛋白在三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌组织间表达差异无统计学意义。在三阴性乳腺癌中,EZH2阳性表达与肿瘤组织学分级、肿瘤直径、淋巴结是否转移有关(P<0.05),DNMT1的表达与肿瘤组织学分级、淋巴结是否转移有关(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,肿瘤组织学分级为影响EZH2及DNMT1表达的最主要因素;三阴性乳腺癌中DNMT1与EZH2的表达呈正相关(r=0.34,P<0.01)。结论 EZH2与DNMT1的高表达与三阴性乳腺癌的分化、生长、转移有关,且两者在三阴性乳腺癌中的表达呈正相关,其联合检测可能对三阴性乳腺癌的预后判断更有价值。
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- 关键词：DNA甲基转移酶1
- miRNAs慢病毒文库筛选靶向EZH23'非翻译区的新型miRNAs及其在乳腺癌中的表达被引量：2
- 2014年
- 目的重组过表达EZH2基因3'非翻译区的MCF-7细胞株中筛选靶向miRNAs,并进行细胞和组织定量分析。方法重组细胞株感染慢病毒文库,利用细胞毒性药物筛选后抽提细胞基因组,以此为模板PCR扩增出miRNA前体,测序确定miRNAs名称,并对其进行PCR定量分析。结果在重组细胞株中共筛选出7种miRNAs,依次为miR-15b、miR-16-2、miR-181b2、miR-217、miR-224、miR-329-1、miR-487b,这些新型miRNAs用生物信息学软件PicTar和TargetScan无法预测。Real-time PCR发现,与乳腺癌细胞MCF-7相比,正常乳腺细胞株HBL-100中miR-217、miR-329-1、miR-487b高表达;乳腺癌组织中仅miR-15b及miR-16-2表达增加,与癌旁组织相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论在重组过表达EZH2 3'-UTR的乳腺癌MCF-7细胞株中结合慢病毒文库可筛选出用生物信息学软件未预测的新型靶向miRNAs,这些新型miRNA在正常乳腺细胞与肿瘤细胞及组织中存在差异表达。
- 刘萃萃王璐璐赵卫卫彭攸王玉平孙振亮冯景
- 关键词：乳腺癌EZH2EZH2
- EZH2基因3'非翻译区慢病毒载体构建及重组体筛选被引量：1
- 2013年
- 目的构建携带人EZH2基因3'非翻译区(3'UTR)的慢病毒筛选载体并实现该重组体在人乳腺癌MCF-7中稳定整合,为下一步MicroRNAs(miRNAs)筛选奠定基础。方法从组织中提取并用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出EZH2基因3'UTR,构建携带EZH2基因3'UTR的重组慢病毒载体CTX-Lentivirus-EZH2 3'UTR,脂质体法将重组的慢病毒载体和包装载体混合物共转染工具细胞293T细胞,包装产生慢病毒颗粒。用裂解液裂解病毒颗粒,根据慢病毒载体上的CMV启动子表达量检测病毒滴度。用慢病毒颗粒感染乳腺癌MCF-7细胞后,通过嘌呤霉素筛选稳定整合的乳腺癌细胞MCF-7,用Real-Time PCR和Western blotting方法检测EZH2基因3'UTR是否整合入细胞MCF-7中。结果 PCR扩增检测阳性菌落和测序结果证实,EZH2基因3'UTR成功定向克隆到慢病毒载体上。Real-Time PCR检测病毒滴度为4.3×109拷贝/mL。筛选稳定整合MCF-7细胞的最佳浓度为0.2μg/mL。重组慢病毒转导MCF-7后,Real-Time PCR和Western blotting方法分别检测EZH2基因3'UTR整合到乳腺癌细胞MCF-7基因组中。慢病毒感染实验组和对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建携带EZH2基因3'UTR慢病毒筛选载体,实现重组体在乳腺癌MCF-7细胞中稳定整合。
- 赵卫卫彭攸李晓娇卢晓佳王玉平刘萃萃王璐璐冯景
- 关键词：EZH2非翻译区慢病毒载体MCF-7
- 三阴性乳腺癌耐药机制的研究探索被引量：3
- 2017年
- 乳腺癌是女性最常见的侵袭性恶性肿瘤,在全世界范围内每年的死亡人数已达到450 000人,是仅次于肺癌的死亡人数的第二大肿瘤。乳腺癌临床分类依据雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和her2/erbB2这几个基因的表达来分类,分别为ER＋、her2/erbB2＋和ER-PR-Her2/erbB2-（即三阴性乳腺癌TNBC）。三阴性乳腺癌是一个异质性的肿瘤群体,与其他乳腺癌亚型相比有明显的侵袭性,较高的复发率以及较短的生存期。
- 郑清平李静冯景
- 关键词：三阴性乳腺癌化疗耐药机制
- 实验室认可进程中不同检测系统常规生化结果比对与临床可接受性评价被引量：2
- 2017年
- 实验室认可的国际标准ISO15189（医学实验室一质量和能力的专用要求）对检验结果的溯源性和可比性提出了明确要求,强调方法学比较试验（比对试验）是实现准确度溯源和患者标本检验结果可比性的重要途径。对于拥有多个不同生化检测系统的实验室,应参考美国临床实验室标准化委员会NCCLS EP9-A文件,对不同检测系统进行方法比对和偏差评估,并判断其临床可接受性,
- 肖林林冯景魏取好赵亮杨晓英
- 关键词：生化检测系统
- 人乳腺癌上皮细胞miR-217对DNMT1调控作用的研究被引量：1
- 2013年
- 目的验证在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达,为后期动物实验和临床试验提供实验基础。方法利用瞬时转染技术,在对应细胞系中,过表达、抑制miR-217,Western blot检测各实验组中DNMT1蛋白表达,并用含有miR-217野生型及突变型识别位点的DNMT1 3′UTR载体质粒分别转染293T细胞,检测相对荧光素酶活性改变。结果过表达miR-217,DNMT1表达下降;抑制miR-217,DNMT1表达增高;双荧光素酶检测实验,DNMT1-UTR-WT的相对荧光素酶活性显著低于DNMT1-UTR-MUT,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217对DNMT1表达具有调控作用,且miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达。
- 王璐璐刘萃萃郭腾陶然彭攸赵卫卫王玉平孙振亮冯景
- 关键词：DNMT1MCF-7MDA-MB-231
- ROC曲线在HLA-B27界值设置中的应用被引量：3
- 2016年
- 人类白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA）是机体内具有高度多态性的抗原系统,其中HLA-B27是HLA B位点上的一个重要的等位基因。有研究发现,90%以上的强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis,AS）患者携带HLAB27,由于二者的强相关性,HLA-B27的检测已成为临床筛查AS的重要辅助手段。
- 肖林林王璐璐赵卫卫彭攸肖虎孟倩魏取好冯景
- 关键词：人类白细胞抗原B27界值受试者工作特征曲线筛查试验
