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肠出血型大肠埃希菌O104∶H4转运蛋白AatA单克隆抗体制备及鉴定: 2017年; 目的表达肠出血型大肠埃希菌O104∶H4的融合蛋白GST-Aat A,获得单克隆抗体。方法人工合成肠出血型大肠埃希菌O104∶H4的转运蛋白基因aat A,连接至p MDl8-T载体,转化E.coli DH5α,双酶切回收,构建原核表达质粒PGEX-6P-1-GST-Aat A,测序鉴定后,转化E.Coli BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot分析目的蛋白的表达并纯化该重组蛋白。将纯化后的融合蛋白GST-Aat A免疫Balb/c小鼠,制备相应单克隆抗体;并对该单克隆抗体的纯度、亚型、效价、特异性进行鉴定和分析。结果构建的原核表达载体PGEX-6P-1-GST-Aat A能表达融合蛋白GST-Aat A;亲和层析纯化后融合蛋白GST-Aat A纯度达到95%,免疫小鼠后得到相应特异性单克隆抗体。结论成功制备出一株抗转运蛋白Aat A的单克隆抗体,该抗体为Ig G1亚型,特异性好,效价高,纯度可达97%。; 邵娜李以圣王湘雨华颖万成松; 关键词：抗体特异性

沙眼衣原体荧光定量PCR检测方法的建立被引量：2: 2018年; 目的建立沙眼衣原体实时荧光定量PCR检测技术,以期用于沙眼衣原体的感染检测。方法针对沙眼衣原体ompA基因序列保守区域设计引物和TaqMan探针,构建标准质粒并制作标准曲线,建立沙眼衣原体实时荧光定量检测方法,通过对人型支原体等的检测评价方法的特异性。结果建立的沙眼衣原体荧光定量PCR体系能特异性检测沙眼衣原体,与人型支原体、解脲脲原体、淋球菌、大肠埃希菌EDL933、金黄色葡萄球菌无交叉反应;标准曲线在3.9×109～3.9×103 copies/μl之间线性关系良好(r2=0.99);方法的灵敏度高,检测最低拷贝数为3.9copies/μl;组内及组间变异系数均<5%。结论建立的检测沙眼衣原体实时定量PCR方法特异、灵敏,可用于沙眼衣原体感染的早期筛查和临床快速诊断。; 牛丛付牧青李以圣华颖王湘雨张仁利万成松; 关键词：沙眼衣原体实时荧光定量PCR

肠出血型大肠埃希菌O157:H7 espF基因缺失株和回补株的构建被引量：1: 2015年; 目的利用Red同源重组系统敲除肠出血型大肠埃希菌的esp F基因及其核苷酸片段;建立以p BAD 33质粒为载体的esp F基因回补实验平台。方法设计1对同源臂引物扩增卡那霉素抗性打靶片段,将抗性打靶片段电转入含有PKD46质粒的EDL933w,在PKD 46介导的重组系统帮助下,打靶片段和菌体esp F基因发生同源重组,PCR和测序验证;PCR扩增esp F及其核苷酸片段的整个ORF区序列,将其克隆入p BAD33质粒,分别将重组质粒转入相应的缺失株,以构建出相应的回补突变株。采用RT-PCR的方法验证在相应的回补突变株中esp F及其核苷酸片段是否转录。结果构建了esp F基因及其核苷酸片段缺失的EHEC O157:H7 EDL933w突变菌株和相应的回补株,且esp F基因及其核苷酸片段在回补株中均发生转录。结论本研究运用Red重组系统构建了肠出血型大肠埃希菌O157:H7 esp F基因缺失株,并建立以p BAD33质粒为载体的EHEC O157:H7基因回补方法,为进一步研究肠出血型大肠埃希菌中esp F基因的调控机制奠定了基础。; 华颖孙琦王湘雨杜艳丽邵娜张其威赵卫万成松; 关键词：同源重组突变株

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型的建立被引量：3: 2015年; ＂超级细菌＂耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA）是诱发连续腹膜透析患者腹膜炎的常见细菌,且治疗困难。目前缺少MRSA腹膜炎动物模型。腹腔注射2×10^9-2×10^10CFU/mL 7组不同浓度的MRSA感染小鼠,观察小鼠死亡时间,测定肝脏与脾脏细菌定植量,进行肝、脾病理分析,确定适宜的建模浓度。研究发现,小鼠感染细菌浓度最小致死剂量为每只2×10^9CFU,最适建模浓度为每只1.4×10^9CFU。结果表明建立了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠腹膜炎模型,为MRSA致腹膜炎的致病机制研究、疫苗的研制提供实验基础。; 孙琦王湘雨陈诗琪司徒莉芳赵卫万成松; 关键词：腹膜炎小鼠模型

大肠埃希菌PPK极端环境下调控作用研究进展被引量：1: 2014年; 为了阐明大肠埃希菌多聚磷酸盐激酶在极端环境下的调控作用,该文分析了多聚磷酸盐激酶参与大肠埃希菌应对Rpo S主导的广泛压力响应、DNA损伤修复、营养缺乏、蛋白降解、生物被膜形成等不利环境的反应,论述了多聚磷酸激酶在基因转录、蛋白修饰等分子调控机制的研究现状,展望了多聚磷酸盐激酶在抗菌药物靶点筛选和生物杀虫剂候选方面的研究前景。大肠埃希菌的多聚磷酸盐激酶可能在信号转导、细菌毒力及适应氧化压力、紫外辐射、热激、高渗、酸性p H等不利环境等方面发挥重要调控作用。; 张蕾丝王湘雨韩朋万成松; 关键词：大肠埃希菌极端环境

大肠杆菌O157:H7 EspF蛋白在出血性结肠炎中的作用及其致病机制研究: 肠出血型大肠埃希菌O157:H7是经粪-口途径传播的肠道致病菌,可导致人体出现溶血性尿毒综合征、出血性结肠炎等病症;该菌主要通过导致肠粘膜上皮细胞出现黏附-抹去损伤(A/E损伤)和产生志贺毒素(Stx)致病。自1982年...; 王湘雨; 关键词：大肠杆菌O157:H7 细胞凋亡蛋白调控分子机制; 文献传递

巢式-荧光定量PCR技术快速检测生殖支原体: 2019年; 目的建立生殖支原体巢式-荧光定量PCR快速检测技术。方法针对生殖支原体MgPa基因的保守片段(1414~1561bp),利用Primer express3.0设计引物及探针,巢式PCR扩增临床样本,纯化后克隆到载体,制备阳性标准品。优化PCR反应条件,研究其特异性、灵敏性和重现性。结果构建了含MgPa基因的重组质粒,以不同浓度的重组质粒制作标准曲线,在101~109拷贝数之间有较好的线性关系。该方法检测阳性率高达15.4%,能特异性检测生殖支原体,而人型支原体、解脲脲原体、沙眼衣原体等检测为阴性;灵敏度高,可检测到10个拷贝数;3组重复试验的变异系数均小于3%。结论本研究建立了生殖支原体的快速检测技术,具有检测阳性率高、特异性强、灵敏度高、重现性好等特点。; 付牧青薛耀华李以圣牛丛王湘雨华颖唐时幸万成松; 关键词：生殖支原体

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王湘雨