郑佳琪
- 作品数：5 被引量：24H指数：3
- 供职机构：内蒙古农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 绵羊肺炎支原体、丝状支原体山羊亚种和精氨酸支原体多重PCR检测方法的建立及应用被引量：8
- 2016年
- 根据GenBank登陆的绵羊肺炎支原体(MO)、丝状支原体山羊亚种(MmC)和精氨酸支原体(M.arg)的相关基因序列,分别设计了扩增MO hsp70基因、MmC hsp70基因和M.arg ADI基因片段的特异性引物,通过对反应条件和反应体系的优化,建立了MO、MmC和M.arg的多重PCR检测方法。特异性试验结果显示:该方法能同时扩增出MO 703bp、MmC 385bp和M.arg223bp的特异性目的片段,而对其他病原的DNA扩增为阴性。敏感性试验结果显示:该方法对这3种支原体的最低核酸检出量均为10pg。55份临床样品检测结果表明:三重PCR检测结果与分离培养诊断方法一致,均能检测出样品中的病原菌。本试验建立的多重PCR方法能为MO、MmC和M.arg的感染提供正确快速诊断方法。
- 郑佳琪黄海碧王晓晖刘文浩麻昌姣岳全占郝永清
- 关键词：绵羊肺炎支原体丝状支原体山羊亚种多重PCR
- 绵羊肺炎支原体P71蛋白分段表达及其间接ELISA方法的建立被引量：9
- 2015年
- 为研究绵羊肺炎支原体(MO)P71蛋白免疫学相关功能及建立MO的快速检测方法,本研究采用PCR扩增MO P71基因片段,测序后利用生物学软件分析P71蛋白的抗原表位,选取抗原表位富集的3个基因片段P71-1(1 bp^516 bp)、P71-2(505 bp^1 338 bp)和P71-3(1 327 bp^1 905 bp)分别克隆至原核表达载体p ET-32a中进行表达。分别利用western blot和间接ELISA方法对表达产物的免疫原性、反应原性进行鉴定,以筛选的优势抗原蛋白为诊断抗原,通过对反应条件的优化,建立检测MO抗体的间接ELISA方法。结果表明:重组蛋白P71-3产生的抗体效价最高,与MO阳性血清的结合能力最强,阴阳性临界值为:OD450nm值=0.292。该方法与口蹄疫、小反刍兽疫、副结核、羊布鲁菌病、结核阳性血清均无交叉反应,具有极强的特异性。组内组间变异系数均小于10%,重复性较好。利用该方法与间接血凝试验对150份临床血清样品进行检测,结果显示,两者符合率为96.67%。本研究为进一步研制MO ELISA检测试剂盒奠定了基础。
- 黄海碧郑佳琪王仁超王晓晖陈德浩王灵芮郭逸贤郝永清
- 关键词：绵羊肺炎支原体抗原性分析ELISA
- 绵羊气管上皮细胞的分离培养及绵羊肺炎支原体对其的吸附被引量：3
- 2015年
- 为建立简便、高效、稳定的绵羊气管上皮细胞的体外培养及鉴定的方法,并在所培养的细胞上研究绵羊肺炎支原体侵染模型,本研究利用链蛋白酶冷消化法对绵羊气管上皮细胞进行体外分离,通过差速贴壁法纯化气管上皮细胞并进行传代后用液氮保存,细胞复苏后通过测定生长曲线、上皮细胞骨架蛋白角蛋白8和18以及对染色体与微生物的检测等对所培养细胞进行鉴定,并将鉴定纯化的气管上皮细胞用绵羊肺炎支原体进行侵染。结果显示,成功培养出绵羊气管上皮细胞,纯化的细胞在显微镜下排列紧密,形态均一,呈鹅卵石铺路样。细胞生长曲线呈"S"型,分子生物学手段和增菌试验未检测到气管上皮细胞中含有微生物污染,通过细胞免疫组化检测到了细胞角蛋白8、18,染色体核型数目为2n=54。绵羊肺炎支原体能黏附于分离纯化的绵羊支气管上皮细胞,为进一步研究支原体侵染细胞的机制等奠定了基础。
- 黄海碧郑佳琪王晓晖陈德浩张超刘利郝永清
- 关键词：绵羊气管上皮细胞绵羊肺炎支原体
- 绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体双重PCR检测方法的建立及应用
- 2015年
- 为建立绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的双重PCR检测方法,本试验分别设计了绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的特异性引物,优化反应条件后对其特异性和敏感性进行评价,并对40份鼻拭子进行了检测。结果显示,该方法能同时扩增出绵羊肺炎支原体545bp和精氨酸支原体806bp的特异性片段,而对其他病原的DNA扩增均为阴性。该双重PCR方法对绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的最低检测限分别为100和10pg/μL。40份鼻拭子检测结果显示,双重PCR检测方法与分离培养法符合率高达92.5%,均能鉴定出绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体。结果表明,本研究建立的双重PCR方法可用于绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体的临床快速诊断。
- 郑佳琪黄海碧王晓晖李真亚邢蒙恩郝永清
- 关键词：绵羊肺炎支原体双重PCR
- 绵羊肺炎支原体p60蛋白N端与C端的表达及其免疫学特性研究被引量：5
- 2017年
- 为分析绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)膜表面脂蛋白p60的免疫学特性,本研究分别扩增p60蛋白N端与C端的基因,并通过重叠延伸PCR将C端基因序列中的TGA(1 459-1 461bp)定点突变为同义密码子TGG。将扩增的基因片段分别插入到pET-32a(+)表达载体上,重组质粒分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,得到分子质量约57ku的p60-N蛋白和分子质量约为30.5ku的p60-C蛋白;再对纯化后的重组蛋白进行Western blotting分析,结果表明重组蛋白均可与MO阳性血清发生特异性免疫学反应,表明表达的重组蛋白p60-N和p60-C均有良好的反应原性。本研究为筛选MO主要的免疫原性蛋白和建立特异的血清学诊断方法提供了依据。
- 麻昌姣郑佳琪黄海碧王晓晖白帆郝永清
- 关键词：绵羊肺炎支原体
