袁园
- 作品数:7 被引量:23H指数:3
- 供职机构:广西大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金广西研究生教育创新计划项目更多>>
- 相关领域:农业科学更多>>
- 广西优势血清西优势血清型IBV代表株M基因在杆状病毒系统中的表达被引量:4
- 2017年
- 采用RT-PCR扩增鸡传染性支气管炎病毒(IBV)广西优势血清型代表性毒株GX-YL5的膜(M)蛋白基因,将其克隆至pFastBac^(TM)/HBM-TOPO杆状病毒转移载体,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,获得重组杆粒rHBM-M;将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒;利用间接免疫荧光试验(IFA)和蛋白质免疫印迹(Western-blot)鉴定表达的M蛋白。IFA检测可见重组杆状病毒感染后72h细胞出现特异性荧光,Westernblot检测可见大小约为26ku的特异性蛋白带,表明该重组M蛋白在Sf9昆虫细胞中成功获得表达。研究为IBVM蛋白的生物学功能、IBV诊断试剂和新型疫苗制备等奠定基础。
- 袁园张丽华董志华唐宁王海勇韦天超黄腾磨美兰韦平
- 关键词:鸡传染性支气管炎病毒M基因杆状病毒
- 鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白的真核表达及免疫原性分析被引量:4
- 2020年
- 为真核表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的S1蛋白并鉴定其免疫原性,构建了IBV广西优势血清型代表株GX-YL5 S1蛋白基因的重组表达载体pFastBacTM/HBM-TOPO-S1,转化DH10Bac细胞进而拯救出重组杆状病毒;经间接免疫荧光(IFA)和Western blot鉴定并大量表达;纯化后免疫新西兰大白兔制备兔抗血清,应用IFA和Western blot对该重组蛋白的反应原性进行鉴定,并应用气管环(TOC)中和试验分析其免疫原性。IFA显示重组杆状病毒感染后72 h细胞出现特异性荧光;Western blot显示重组蛋白与抗His标签单克隆抗体以及IBV特异性抗体均能结合,且反应性良好,特异性强;中和试验显示制备的血清对IBV的中和滴度为1∶512。表明该重组S1蛋白具有较好的免疫原性,为IBV S1蛋白的生物学功能、基因工程亚单位疫苗等研究奠定了基础。
- 苏艳静张愉廖健淇张韬张丽娟袁园磨美兰
- 关键词:鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白真核表达抗血清免疫原性
- GX-YL5株S1蛋白在杆状病毒系统中的表达和免疫原性研究
- <正>引言鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是一种急性、高度接触性呼吸道疾病,因其病原传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)基因组变异快,血...
- 袁园苏艳静张韬张丽娟廖健淇范文胜韦天超磨美兰韦平
- 文献传递
- 传染性支管炎病毒S蛋白的真核表达及其免疫原性研究
- 引言鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是鸡的一种急性、呼吸道传染的病毒性疾病。鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)基因组容易发生变异,导...
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- 关键词:免疫原性反应原性真核表达
- 鸡传染性支气管炎病毒GX-YL5株S蛋白在昆虫杆状病毒表达系统的表达及其免疫原性被引量:3
- 2021年
- 为了对鸡传染性支气管炎病毒(avian infectious bronchitis virus,IBV)广西优势血清型代表株GX-YL5的S蛋白进行真核表达并研究其免疫原性,设计GX-YL5毒株S基因特异引物,扩增出目的片段后,构建重组表达载体pFastBacTM/HBM-TOPO-S,转化DH10Bac细胞获得重组杆状病毒rHBM-S;重组S蛋白鉴定正确后,大量表达、纯化并免疫新西兰大白兔制备兔抗血清,应用IFA、Western blot以及间接ELISA、气管环(TOC)中和试验对该重组蛋白的反应原性及免疫原性进行分析。结果显示,成功获得重组S蛋白;制备的抗S蛋白多抗血清具有良好的特异性,ELISA效价可达1∶25600,TOC中和试验滴度为1∶512。结果表明,应用昆虫杆状病毒表达系统成功表达了具有很好免疫原性的GX-YL5株的S蛋白。本试验为研究IBV S蛋白的生物学功能、研发诊断试剂和制备新型疫苗等奠定了基础,为利用昆虫杆状病毒表达系统进行IBV或其他冠状病毒结构蛋白的表达及多抗的制备提供了借鉴和参考。
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- 关键词:鸡传染性支气管炎病毒S蛋白昆虫杆状病毒表达系统免疫原性
- 广西地区规模化鸡场禽偏肺病毒感染情况的血清学调查被引量:12
- 2017年
- 为了调查广西禽偏肺病毒(aMPV)的感染情况,本研究于2015年7月~12月期间采集广西南宁(A和B鸡场)和玉林(C和D鸡场)4个规模化鸡场的不同品种、不同周龄的种鸡和肉鸡血清共480份,进行aMPV抗体检测。检测结果显示这4个规模化鸡场的种鸡群在雏鸡阶段aMPV抗体阳性率为15%~66.67%,并且整个产蛋期aMPV抗体阳性率均为90%~100%;所调查的南宁和玉林地区3个鸡场的肉鸡群均存在aMPV感染,玉林地区C场肉鸡群的aMPV抗体阳性率和平均抗体滴度均高于南宁地区A和B场;检测的6个不同品种的种鸡群均存在aMPV感染,其中aMPV抗体阳性率以灵山土鸡和清远麻鸡最高(100%),铁脚麻鸡相对较低,但也高达78%。本研究表明在所调查的广西规模化鸡场鸡群中,aMPV感染普遍,种鸡感染尤为严重,尤其是玉林地区。本研究为aMPV感染的研究和防治积累了数据资料。
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- 关键词:血清学调查鸡群
- 鸡传染性支气管炎病毒E蛋白真核表达载体的构建及其产物抗原性的鉴定
- 2019年
- 以鸡传染性支气管炎病毒(IBV)GX-YL5毒株为模板,PCR扩增其E基因并克隆至融合有His标签的杆状病毒转移载体pFastBacTM/HBM-TOPO,构建重组转移载体pFastBacTM/HBM-TOPO-E,转化DH10BacTM感受态,经同源重组后转染Sf9细胞,并应用间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot进行鉴定。IFA结果表明融合了E蛋白的表达产物可被抗His标签的鼠单克隆抗体识别,在感染的细胞膜表面呈现强的黄绿色荧光;Western blot结果显示融合了E蛋白的表达产物既可被抗His标签的鼠单克隆抗体识别,也可被GX-YL5株的多抗血清特异性识别,且二者的目的条带大小均为16 ku。说明本研究已成功在Sf9细胞中表达了E蛋白,且表达产物抗原性良好,为进一步探讨IBV E蛋白的生物学功能和构建病毒样颗粒提供了基础。
- 袁园张愉张丽华范文胜韦天超黄腾磨美兰韦平
- 关键词:传染性支气管炎病毒E蛋白真核表达重组杆状病毒