李亮平
- 作品数：6 被引量：15H指数：3
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- H_2O_2下调miR-21对MC3T3-E1细胞成骨分化影响的研究被引量：6
- 2018年
- 目的探讨H_2O_2诱导的miR-21下调对MC3T3-E1细胞成骨分化的作用及机制。方法取MC3T3-E1细胞系,培养传至第7代进行实验。取MC3T3-E1细胞,以不同浓度H_2O_2(0、40、80、160、320μmol/L)培养,经实时荧光定量PCR检测miR-21表达、MTS法检测细胞活性,选择H_2O_2最合适实验浓度。取MC3T3-E1细胞分为空白对照组(A组)、H_2O_2组(B组)、成骨诱导组(C组)、H_2O_2+成骨诱导组(D组),对应培养后实时荧光定量PCR检测miR-21表达以及成骨标志基因Runx2、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠalpha 1,Col1a1)表达,Western blot检测磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)蛋白表达,茜素红染色观察细胞外钙基质沉积情况,分析H_2O_2对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。然后再取MC3T3-E1细胞,分为H_2O_2组(A1组)、H_2O_2+成骨诱导组(B1组)、H_2O_2+ miR-21抑制剂+成骨诱导组(C1组)、H_2O_2+ miR-21抑制剂阴性对照+成骨诱导组(D1组);以及H_2O_2组(A2组)、H_2O_2+成骨诱导组(B2组)、H_2O_2+ siRNA-PTEN阴性对照+成骨诱导组(C2组)、H_2O_2+siRNA-PTEN+成骨诱导组(D2组);对应培养后检测成骨标志基因(Runx2、OPN、Col1a1)表达以及细胞外钙基质沉积情况,分析下调miR-21或沉默PTEN对细胞成骨分化的影响。结果结合实时荧光定量PCR检测以及MTS法结果,选择160μmol/L H_2O_2进行实验。第1、2周B组miR-21相对表达量低于A组(P<0.05),D组低于C组(P<0.05);第2周C组PTEN蛋白相对表达量均低于A、D组(P<0.05);第1、2周D组Runx2、OPN及Col1a1 mRNA相对表达量均低于C组(P<0.05),茜素红染色显示D组钙基质沉积少于C组。C1组PTEN蛋白相对表达量高于D1组(P<0.05);第1、2周B1、D1组Runx2、OPN mRNA相对表达量均高于C1组(P<0.05),第2周B1、D1组Col1a1 mRNA均高于C1组(P<0.05);茜素红染色显示C1组钙基质沉积少于B1、D1组。第1周D2组OPN、Col1a1 mRNA相对表达量高于B2、C2组(P<0.05),第3周茜素红染色显示D2
- 彭建强黄年盛黄胜李亮平凌泽民靳松黄爱军林昆邹学农
- 关键词：H2O2MIR-21成骨分化MC3T3-E1细胞
- C3H10T1/2成软骨分化过程中miR-19a与CCND1的表达及调控
- 2015年
- 【目的】在间充质干细胞诱导成软骨分化过程中,探讨mi R-19a与细胞周期基因CCND1之间的关系,为揭示mi R-19a参与调控成软骨分化的可能机制提供基础。【方法】选取小鼠间充质干细胞C3H10T1/2为研究对象,运用离心沉淀法进行pellet细胞微球培养,用含有TGF-β3及2%FBS的高糖DMEM进行成软骨诱导并作为实验组,用含2%FBS的高糖DMEM培养(替换)导作为对照组。分别在1、2、3周进行定量PCR检测成软骨分化相关基因表达以及在第3周进行甲苯胺蓝染色。【结果】与对照组比较,细胞功能基因Bax与Klf-4表达均下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。成软骨分化关键启动因子SOX-9及相关基因aggrecan,collagen II,Collagen Xa1的表达均在2周时显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。通过互联网生物信息学预测CCND1可能是mi R-19a的靶基因;在成软骨分化过程中,mi R-19a表达逐渐上升(P<0.05),而CCND1的表达与对照组相比逐渐下降(P<0.05)。甲苯胺蓝染色pellet细胞微球呈蓝紫色,细胞核呈深蓝色,诱导组中细胞外基质含量明显增多。【结论】在C3H10T1/2成软骨分化过程中,mi R-19a参与维持细胞干性及增殖基因表达降低,分化能力得到增强;且mi R-19a参与该分化调控过程。
- 龚铭周治宇代学俊高蔓蔓罗嘉全黄胜李亮平邹学农
- 关键词：间充质干细胞成软骨分化
- 脂多糖诱导THP-1细胞固有免疫相关miRNAs表达的研究
- 2015年
- 目的检测脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导THP-1巨噬细胞固有免疫反应不同时间点(4、8、12、24、48 h)差异表达的microRNAs(miRNAs)及预测的靶基因的表达情况,探讨骨修复材料移植早期的宿主免疫炎症反应调控机制。方法 LPS处理由佛波醇PMA诱导分化的THP-1细胞,分别在刺激4、8、12、24、48 h之后提取总RNA,用实时荧光定量PCR方法检测microRNAs表达。生物信息学预测miR-10b靶基因是SCARB2并检测其蛋白表达。结果 miR-10b、let-7家族以及miR-181c与芯片结果相符。SCARB2预测为miR-10b的靶基因,且蛋白表达上升。结论 miR-10b可能通过靶基因SCARB2参与调控炎症免疫过程。
- 余婷邹学农罗嘉全黄胜李亮平高蔓蔓龚铭周治宇陈孝
- 关键词：MICRORNA固有免疫
- 低氧诱导因子1α及2α在人BMSCs成软骨分化中的表达规律被引量：3
- 2015年
- 目的通过诱导人BMSCs(human BMSCs,hBMSCs)成软骨分化,观察低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)、HIF-2α在分化过程中的表达趋势,为阐明HIF参与调控成软骨分化机制提供依据。方法对已消化的悬浮hBMSCs进行离心沉淀,形成细胞微球。将细胞微球分为2组,对照组加入含2%FBS的H-DMEM培养基,成软骨诱导组加入软骨诱导液,于低氧(2%O2)条件下培养。培养3周后行甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察,培养1周行Western blot检测HIF-1α、HIF-2α蛋白表达,培养1、2、3周行实时定量PCR检测成软骨分化关键转录因子及相关标志基因表达。结果甲苯胺蓝染色示,对照组染色细胞核整体分布稀疏,而成软骨诱导组分布致密;成软骨诱导组细胞外基质染色明显较对照组深。Ⅱ型胶原免疫组织化学染色示阳性信号主要位于细胞质内;与成软骨诱导组相比,对照组细胞核分布较稀疏且着色浅。Western blot检测示,培养1周成软骨诱导组HIF-1α和HIF-2α蛋白相对表达量均显著低于对照组(t=8.345,P=0.001;t=7.683,P=0.002)。实时定量PCR检测示,与对照组比较,成软骨诱导组HIF-1αmRNA相对表达量在培养1周时降低、2周时显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);3周时两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。成软骨诱导组培养各时间点HIF-2αmRNA相对表达量均显著低于对照组,Sox-9 mRNA相对表达量均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。培养过程中,Ⅱ型胶原及Ⅹ型胶原表达呈逐渐增加趋势,第2、3周时两者的mRNA相对表达量显著高于对照组(P<0.05)。而成软骨诱导组多聚蛋白聚糖mRNA相对表达量在各时间点均高于对照组(P<0.05)。结论 HIF-1α参与诱导hBMSCs成软骨分化过程,但HIF-2α表达在该分化过程中受抑制。
- 龚铭黄胜罗嘉全黄保丁周治宇代学俊高蔓蔓李亮平邹学农
- 关键词：低氧诱导因子成软骨分化
- 氧化应激活化RAW264.7巨噬细胞对MC3T3-E1成骨细胞迁移、增殖及成骨基因表达影响的实验研究被引量：3
- 2016年
- 目的探索氧化应激活化RAW264.7巨噬细胞对MC3T3-E1成骨细胞迁移、增殖及成骨基因表达的影响。方法取MC3T3-E1细胞系及RAW264.7细胞系,分别培养传至第7代进行实验。利用不同浓度(0、25、50、100μmol/L)H_2O_2刺激RAW264.7细胞,MTS检测培养1、3、6 h后细胞增殖率,采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)检测试剂盒检测培养1 h时细胞内SOD含量,筛选H2O2引起RAW264.7细胞氧化应激的最佳浓度和作用时间,并对应收集RAW264.7细胞(加或不加H_2O_2处理)24 h上清液。取第7代MC3T3-E1细胞,分别以100μL无血清DMEM培养基(A组)、未氧化应激RAW264.7细胞上清液(B组)、氧化应激RAW264.7细胞上清液(C组)培养,采用MTS法检测细胞增殖情况,行划痕实验检测细胞迁移能力;另取细胞分为4组,空白对照组,以完全培养基培养;阳性对照组,以含50μg/m L维生素C及10 nmol/L的β甘油磷酸钠的完全培养基进行成骨诱导培养;正常对照组,以含50μg/m L维生素C及10 nmol/L的β甘油磷酸钠的完全培养基及未氧化应激RAW264.7细胞上清液培养;实验组,以含50μg/m L维生素C及10 nmol/L的β甘油磷酸钠的完全培养基及氧化应激RAW264.7细胞上清液培养。培养3、7、14 d,RT-PCR检测细胞内成骨相关基因ALP、Runx2、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠ,COL-Ⅰ)、骨钙素(osteocalcin,OC)、骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein,BSP)表达水平。结果 MTS和SOD检测结果显示:25μmol/L H_2O_2刺激1 h为构建RAW264.7细胞氧化应激模型最佳浓度和作用时间。细胞生长检测显示:1、2、3 d B、C组细胞增殖率显著高于A组(P<0.05),C组低于B组,其中2、3 d时组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验显示12 h时B、C组MC3T3-E1细胞迁移显著快于A组,C组快于B组,细胞迁移距离比较差异有统计学意义(P<0.05);24 h时B、C组划痕已被细胞爬满。除3 d外,实验组各时间点ALP、Runx2、OC、BSP m RNA相对表
- 彭建强易志新武明鑫黄爱军林昆靳松李亮平黄胜罗嘉全邹学农
- 关键词：H2O2MC3T3-E1细胞RAW264.7细胞成骨分化
- 体质量指数对后路360°融合术治疗单节段腰椎退行性疾病疗效的影响被引量：3
- 2016年
- 目的探讨体质量指数(body mass index,BMI)对后路360°融合术治疗单节段腰椎退行性疾病疗效的影响。方法回顾分析2009年9月-2013年9月收治的符合选择标准的302例行后路360°融合术治疗的单节段腰椎退行性疾病患者临床资料。根据术前BMI不同将患者分为3组,A组为正常体重组(BMI<24kg/m^2),105例;B组为超重组(24 kg/m^2≤BMI<28 kg/m^2),108例;C组为肥胖组(BMI≥28 kg/m^2),89例。3组患者性别、年龄、病程、病变类型、病变节段及术前日本骨科协会(JOA)评分与Oswestry功能障碍指数(ODI)比较差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。记录患者手术时间、术中出血量、术后住院时间、术后并发症情况;术前及术后3、6、24个月采用腰椎JOA评分及ODI评价患者腰椎功能情况。结果 C组手术时间、术中出血量及术后住院时间均显著多于A、B组(P<0.05);A、B组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。3组患者均获2年以上随访,随访时间24~45个月。各组术后各时间点JOA评分及ODI均较术前显著改善(P<0.05);术后各时间点3组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。并发症发生情况:3组患者术后总体并发症发生率比较差异无统计学意义(χ~2=3.288,P=0.193)。其中C组切口相关并发症(切口感染和切口愈合不良)发生率显著高于A、B组(P<0.05),A、B组间差异无统计学意义(P>0.05);脑脊液漏、假关节形成及翻修等并发症发生率3组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论不同BMI的腰椎退行性疾病患者行后路360°融合术均能获得良好临床疗效,但BMI≥28 kg/m^2患者手术时间更长、术中出血更多、术后住院时间更长,且术后切口相关并发症发生率更高。
- 黄胜罗嘉全李亮平漆启华刘少喻万勇彭新生邹学农
- 关键词：腰椎失稳症体质量指数
