- 尘螨主要变应原蛋白的IgE结合表位序列分析被引量：8
- 2011年
- 目的对屋尘螨主要变应原(Derp1)蛋白分子中与过敏病人血清特异性IgE相结合的表位序列的鉴定。进而获得基于串联表位的小分子低毒过敏原以作为新的免疫治疗剂。方法采用全蛋白序列重叠扫描法对Derp1蛋白进行全表位筛选,即合成了覆盖Derp1全蛋白222个氨基酸的31段各含15个氨基酸的多肽,且相邻肽段间有8个氨基酸的重叠。并将这些肽段按点状固相多肽合成法依顺序合成于纤维膜上。再将该膜与由数份过敏血清组成的血清池孵育,经抗人IgE-HRP二抗结合及X光片显影后对阳性点进行灰度比对及分析。结果经对X光片阳性点的比对及分析,我们确定出了Derp1过敏原蛋白中的3个强阳性表位序列。它们是位于第85～99位的氨基酸序列(表位1,Ep1),第106～120位的氨基酸序列(表位2,Ep2)及第190～204位的氨基酸序列(表位3,Ep3)。结论我们获得了Derp1中3个15肽的线性IgE结合表位(B细胞表位)序列。证实了Derp1分子中存在IgE结合的线性表位。为进一步构建T/B细胞串联表位的小分子低毒过敏原提供了物质基础。
- 钟志美郑传东王方
- 关键词：变应原屋尘螨
- 高可溶性Aβ融合蛋白的表达、纯化和鉴定
- 2010年
- 目的在大肠杆菌中表达阿尔茨海默病(AD)相关肽段Aβ与具有强助溶作用的麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合蛋白,从而经济有效地获得具有天然免疫原性的Aβ肽段,为深入研究AD的发病机理和治疗药物提供重要的物质基础。方法用PCR法扩增Aβ的基因片段,并将其插入到含有麦芽糖结合蛋白的融合表达载体pMAL-c2中,经测序后再将重组质粒转化入大肠杆菌TB1中进行诱导表达。经多聚麦芽糖亲和色谱的纯化获得MBP-Aβ融合蛋白。再用SDS-PAGE及Western blotting鉴定Aβ及其融合蛋白的表达和免疫原性。结果测序结果证实插入的DNA片段与Aβ序列一致。SDS-PAGE电泳显示Aβ融合蛋白被高效表达。Western blotting结果表明Aβ及其融合蛋白可被其特异性抗体识别。结论在大肠杆菌中高效表达了可溶性的Aβ融合蛋白并经纯化和酶解后获得了Aβ纯肽段,为AD病机理的研究及其病理模型的建立提供了物质基础。
- 朱瑞郑传东王方
- 关键词：阿尔茨海默病APPAΒ原核表达融合蛋白
