周从良
- 作品数:1 被引量:0H指数:0
- 供职机构:武汉大学基础医学院免疫学系更多>>
- 发文基金:湖北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:生物学更多>>
- 人DC-SIGN的原核表达载体的构建、重组蛋白的表达纯化和鉴定
- 2008年
- 目的:获得纯化的DC-SIGN蛋白,为揭示DC-SIGN参与抗原提呈的机制,探讨宿主细胞DC-SIGN蛋白和HIV、HCV、结核杆菌等病原体的相互作用机制奠定基础。方法:人DC-SIGN的cDNA克隆到pGEX-KG表达载体上,转化入E.coli中,通过IPTG诱导,过度表达GST-DC-SIGN融合蛋白,并使用Glutathione-Sepharose 4B亲和层析柱提取得到纯化的DC-SIGN蛋白,最后通过SDS-PAGE和Western Blot方法进行检测和鉴定。结果:酶切鉴定证实DC-SIGN基因已插入原核表达载体pGEX-KG。重组表达质粒pGEX-KG-DC-SIGN在大肠杆菌BL21中成功表达了DC-SIGN融合蛋白,其分子质量约为44 kU。结论:成功构建DC-SIGN原核表达重组质粒,并提取纯化出DC-SIGN原核蛋白,为下一步研究DC-SIGN的功能奠定了基础。
- 曾洁周从良孙平曹晓春章晓联
- 关键词:WESTERNBLOT