潘新宇
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：潍坊医学院基础医学院山东省高校免疫学重点实验室更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人类CD252基因片段在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性分析
- 2009年
- 目的优化表达含人类CD252胞外段的融合蛋白,纯化目的蛋白,为单克隆抗体的制备打下良好的基础。方法将测序正确的pET32a(+)-CD252胞外段重组质粒转入表达菌株BL21感受态细菌中,用SDS-PAGE电泳鉴定重组菌的诱导表达情况,通过改变pET32a(+)-CD252阳性菌株的诱导时间、温度,以优化出最佳表达条件。采用包涵体纯化法纯化目的蛋白。用纯化的重组蛋白免疫BalB/C小鼠,采用ELISA法测定血清中抗体效价。结果成功获得表达pET32a(+)-CD252的阳性菌株。转化有pET32a(+)-CD252胞外段重组质粒的表达菌经IPTG诱导后,在蛋白分子量标准的31.0～42.7kD之间出现了新的蛋白条带,新的蛋白主要存在于包涵体中。优化表达条件分析表明,在诱导4h、温度37 ℃、IPTG浓度为1.0mmol/L时,融合蛋白的表达量最高。包涵体洗涤纯化后,经SDS-PAGE电泳证明可得到较纯的目的蛋白。免疫小鼠后测得的平均抗体效价为1:3200。结论pET32a(+)-CD252胞外段原核表达载体能够表达CD252蛋白,并获取了目的蛋白的优化表达条件,表达蛋白具有良好的免疫原性。
- 王成伟潘新宇冯永堂辛宁鞠吉雨苗乃法
- 关键词：融合蛋白纯化单克隆抗体免疫原性
