张泽峰 作品数:6 被引量:15 H指数:2 供职机构: 北京中医药大学 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
蚕茧壳水解粉对小鼠免疫增强作用的研究 探究家蚕茧壳水解物对正常小鼠的免疫调节作用.正常雄性BALB/c近交系小鼠分三个剂量组分别灌胃家蚕茧壳水解物(600、800或1200 mg/kg)30天后测定免疫器官的质量;MTT法测定ConA诱导的脾淋巴细胞的增殖作... 曹江叶 陈益红 邓红梅 田钰琪 张泽峰 王春梅关键词:免疫调节 细胞活性 文献传递 家蚕茧壳水解物对小鼠细胞免疫功能的影响 被引量:3 2016年 以小鼠为实验动物研究家蚕茧壳水解物对机体细胞免疫功能的影响。分别给正常雄性BALB/c小鼠灌胃低剂量(50mg/kg)、中剂量(200mg/kg)和高剂量(500mg/kg)的家蚕茧壳水解物6周,然后利用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖能力;利用血液涂片的方法对小鼠外周血白细胞进行分类计数;利用FACS检测CD4+T细胞和CD8+T细胞比率;利用抗体芯片方法检测细胞因子分泌量。结果显示,中剂量家蚕茧壳水解物可极显著提高小鼠脾淋巴细胞转化率(P<0.01),高剂量组也表现出显著作用(P<0.05),并且和对照相比,中剂量提高的量是对照的4倍;细胞涂片结果显示,摄取家蚕茧壳水解物的小鼠和对照组相比,嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞的比率下降,而单核细胞和淋巴细胞的比率上升;中剂量组CD4+T细胞和CD8+T细胞比率显著提高(P<0.05);IL-17、IL-6、IFN-γ3种细胞因子的分泌增多,其中,中剂量组IL-17分泌量达对照组的4.5倍。综上所述,家蚕茧壳水解物能够增强小鼠的细胞免疫功能。 王晶晶 张泽峰 邓红梅 田钰琪 陈益红 王春梅关键词:脾淋巴细胞增殖 CD8^+T细胞 迟缓爱德华氏菌Eta1-L-Gapdh融合蛋白在蓝藻中的表达 被引量:1 2016年 在蓝藻中表达迟缓爱德华氏菌Eta1-L-Gapdh融合蛋白。提取迟缓爱德华氏菌基因组DNA为模板,用PCR技术分别扩增两个已知具有较强免疫原性的基因eta1和gapdh,再采用重叠延伸PCR将这两个基因融合,获得目的融合基因eta1-L-gapdh。将目的基因连接到表达载体pRL489的两个Bam H I酶切位点之间构建表达载体,用质粒提取、PCR、酶切、测序等手段对表达载体进行验证。验证正确的表达载体通过三亲接合转化野生鱼腥藻PCC7120,用新霉素抗性筛选出转基因藻落,通过质粒提取和PCR验证转基因藻。用RT-PCR和Western-blot分别从转录水平和翻译水平对转基因藻中融合基因的表达进行了检测。结果表明,含目的基因的表达载体构建成功,目的基因在蓝藻中转录并表达蛋白,该蛋白在蓝藻中的表达量为2.46%。 王智 张泽峰 王晶晶 王春梅关键词:迟缓爱德华氏菌 GAPDH 鱼腥藻PCC7120 融合蛋白 土鳖虫醇提物制备方法及其制备物对MC3T3-E1成骨细胞促增殖作用活性评价 被引量:11 2018年 目的:研究土鳖虫最佳醇提物制备工艺。方法:使用浸渍法和匀浆法用50%乙醇以浸提时间(4 h-4 d)、温度(4-60℃)、料液比(4-12倍)和是否搅拌为因素,以提取物总获得率和蛋白获得率为指标提取土鳖虫;使用正交试验法优化浸渍法和匀浆法的提取条件;使用MTT法体外评价两种制备方法所得土鳖虫醇提物对MC3T3-E1成骨细胞促增殖作用的影响以探索土鳖虫最佳醇提物的制备工艺。结果:搅拌因素对两种方法制得提取物的获得率均影响甚微;在不搅拌的状态下浸渍法制得的提取物和总蛋白获得率随温度升高而增加,料液比对匀浆法物质获得率影响较大;正交试验优选浸渍法最佳提取方案为以10倍量料液比在60℃条件下静置4 d,其总获得率为11%;匀浆法最佳方案为:以8倍量料液比在50℃条件下静置12 h,其总获得率为10.2%;匀浆法和浸渍法提取土鳖虫的总获得率无统计学差异,但匀浆法制得的提取物对MC3T3-E1成骨细胞的促增殖作用更明显,当用药浓度均为0.2 mg/m L时,匀浆法和浸渍法制备物的促细胞增殖率分别达到171.59%和48.45%。结论:优化后的两种方法制备物获得率差异不显著,但匀浆法所得提取物对MC3T3-E1成骨细胞的促增殖作用优于浸渍法。 张泽峰 王晶 孙艺茹 王春梅关键词:土鳖虫 MTT法 MC3T3-E1成骨细胞 基于骨折愈合活性的土鳖虫醇提物及其水凝胶巴布剂的制备方法研究 目的:基于促骨折愈合体内外活性优选土鳖虫醇提物最佳制备工艺,将其制备成水凝胶巴布剂。方法:使用浸渍法和匀浆法分别以50%乙醇提取土鳖虫;单因素考察浸提时间(4 h~4 d)、温度(4℃~60℃)、料液比(4~12倍)和是... 张泽峰关键词:土鳖虫 乙醇提取 MTT法 迟缓爱德华氏菌ETA1-L-GAPDH融合蛋白在大肠杆菌中的表达 2016年 迟缓爱德华氏菌是水产养殖中危害性极大的一种致病菌,该菌的两种外膜蛋白GAPDH和ETA1被证明可以独立产生免疫原性,具有开发成疫苗的潜力。文章将这两个蛋白融合表达以期增强疫苗的保护作用。采用PCR方法扩增出融合有gapdh基因和eta1基因的融合基因rh,将该目的基因与表达载体p ET-30a(+)连接,转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株中表达融合蛋白,采用SDS-PAGE检测融合蛋白的表达,并用镍柱和葡聚糖凝胶Sephadex G-100对融合蛋白进行了纯化,最后通过Western-blot对纯化的融合蛋白进行了验证。结果表明融合蛋白主要以包涵体形式表达,在破碎后的菌体沉淀中该蛋白含量高达73.6%,经过纯化后的融合蛋白纯度高达90%,并通过Western-blot得到了验证。上述结果表明表达载体构建成功,目的蛋白在大肠杆菌中大量表达。 王智 王晶晶 张泽峰 王春梅关键词:迟缓爱德华氏菌 融合蛋白 鱼用疫苗 GAPDH 外膜蛋白