龚强
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
- 供职机构：长江大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 农杆菌介导大麦无筛选标记转基因植株的获得被引量：2
- 2020年
- 【目的】目前,国内外大麦遗传转化主要利用Golden Promise品种,基因依赖性严重,尤其是大麦的转化效率较低,并且获得安全型转基因大麦植株对其进一步产业化非常重要。建立高效、无筛选标记大麦遗传转化体系,拓展大麦遗传转化的受体基因型,为大麦基因功能解析和大麦转基因育种及商业化种植提供技术保障。【方法】以优良大麦品种Vlamingh为受体,取开花授粉后14 d左右的幼胚为转化材料,通过对培养基成分及培养步骤优化,建立农杆菌介导的高效遗传转化体系,并利用该体系将Bar和GUS在不同T-DNA区段的双T-DNA表达载体pWMB123转化大麦,获得候选转基因植株,然后利用PCR、Bar试纸条、组织化学染色和Southern blot等检测方法,在T1代转基因植株中成功获得无筛选标记大麦转基因植株。【结果】在愈伤组织分化阶段,发现培养基中添加1.0 mg·L^-1 KT、0.5 mg·L^-16-BA和0.05 mg·L^-1 NAA明显促进愈伤组织分化。在转基因植株生根阶段,发现采用添加1.0 mg·L^-1的IBA的SM1(无其他生长素)的生根效果最佳,培养基中添加2.5 mg·L^-1 CuSO4显著降低了大麦转基因植株白化现象。共转化了138个幼胚,最终获得14株大麦转基因植株,转化效率10.14%。PCR、Bar试纸条、GUS染色等检测证实,T0代转基因植株中均含有Bar,而仅有10株含有GUS,2个T-DNA的共转化效率为71.43%。选取4个同时含有Bar和GUS的转基因植株,对其自交后代进行检测,在BL8株系中筛选到2株只含GUS而不含Bar的转基因植株,无筛选标记效率为6.9%。在T1代转基因植株中对Bar和GUS进行了Southern blot鉴定,发现在多数转基因植株中Bar和GUS均为多拷贝整合,进一步证实BL8-15和BL8-19为无筛选标记的转基因植株。【结论】利用大麦品种Vlamingh为转化材料可以较高效率获得转基因植株,提高愈伤组织分化效率和转基因植株生根效率,降低转基因植株白化现象。利用�
- 龚强王轲王轲叶兴国杜丽璞
- 关键词：大麦农杆菌介导法
- 大麦不同组织成熟过程中DNA甲基化的MSAP分析被引量：5
- 2017年
- DNA甲基化参与调控生长植物发育。使用甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplification polymorphism,MSAP)方法并结合毛细管自动电泳分析仪,对大麦(Hordeum vulgare L)的种子、根、茎、叶等4种组织在成熟过程中的DNA甲基化修饰进行了分析。结果表明,大麦不同组织在成熟过程中基因组总甲基化水平改变较小,但44.90%~65.17%的CCGG位点甲基化模式在不同组织在成熟过程中发生了改变。在大麦种子成熟过程中,CCGG位点半甲基化水平急剧升高,达到65.40%,全甲基化位点显著下降仅为13.39%,与其他组织的甲基化特征差异显著。结果显示,在大麦组织成熟的过程中,DNA甲基化修饰发生了巨大的变化。
- 熊肖李博龚强徐延浩
- 关键词：DNA甲基化发育
- 大麦遗传转化体系的建立及Nud基因的编辑
- 大麦是世界第四大禾谷类作物，因其抗逆性强、适应性广而被广泛种植，其基因组较小，是麦类遗传研究的模式植物之一。目前大麦的转基因研究较少，有严重的基因型依赖性，而且中国还没有安全型转基因大麦植株的报道，因此建立商业化推广大麦...
- 龚强
- 关键词：大麦
- 印度梨形孢对玉米苗期盐胁迫下DNA甲基化影响显著被引量：5
- 2019年
- 土壤盐害严重影响玉米的生长发育及产量。甲基化是基因组DNA一种重要的表观遗传修饰形式,在植物遭受逆境胁迫时会发生改变并调控基因表达。本试验用印度梨形孢(Piriformospora indica)接种玉米‘华玉11’幼苗,利用毛细管电泳技术及甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplification polymorphism,MSAP)分析方法,比较不同盐浓度胁迫条件下不同时间点叶片及根系的DNA甲基化水平和甲基化模式的变化。结果显示,在盐胁迫条件下,随着盐浓度升高接菌植株叶片甲基化水平升高(2.5%~3%)而未接菌植株叶片甲基化水平下降(0.3%~6.6%);接菌与未接菌植株根系甲基化水平均下降,但接菌植株根系甲基化水平降低量仅为未接菌植株的25%~50%。同时,短期盐处理会使玉米叶片DNA发生甲基化位点的数目增加(未接菌植株为7.4%~14%,接菌植株为7.7%),而根系DNA发生甲基化位点的数目减少(未接菌植株为4.5%~36.1%,接菌植株为1.7%~2.3%),未接菌植株的甲基化模式变化幅度为接菌植株的1.8~15倍。本研究结果表明,盐胁迫条件下,接种印度梨形孢能够使玉米叶片DNA甲基化水平升高,同时使玉米的DNA甲基化水平及模式维持在更稳定的状态,以提高玉米幼苗对盐害的耐受性。本研究进一步明确了盐胁迫条件下接种印度梨形孢对玉米根系及叶片甲基化水平及模式变化的影响,对印度梨形孢从表观遗传角度提高玉米耐盐性的机制提供参考依据。
- 贠平任茂龚强徐延浩Ralf Oelmüller张文英
- 关键词：盐胁迫DNA甲基化
- 大麦皮壳率快速测定方法研究被引量：1
- 2017年
- 大麦皮壳率测定主要有氨水浸泡法和千粒重量法,但均不适合进行快速、高通量样品分析。纤维素是大麦皮壳的主要化学成分。采用新型纤维素溶解体系,探讨了快速、稳定和高通量测定大麦皮壳率的方法。结果表明,NaOH溶液、NaClO溶液、NaOH/尿素体系都能用于测定大麦皮壳率,但碱性次氯酸钠法效率更高。通过比较NaOH浓度、NaClO浓度以及处理时间对大麦皮壳率测定的影响,得出4% NaOH配合20%的NaClO溶液,经过2min的短沸是一个比较快速稳定的方案。比较碱性次氯酸钠法与氨水浸泡法、千粒重量法、NaOH/尿素法的准确性与重复性,发现碱性次氯酸钠法准确度高、重复性好、效率高,最适合作为快速、稳定、大批量测定大麦皮壳率的方法。
- 龚强王国荣李博徐延浩
- 关键词：大麦皮壳率
- 大麦无筛选标记遗传转化体系的建立及Nud基因的编辑
- 大麦是世界第四大禾谷类作物,因其抗逆性强、适应性广而被广泛种植,其基因组较小,是麦类遗传研究的模式植物之一。目前大麦的转基因研究较少,有严重的基因型依赖性,而且中国还没有安全型转基因大麦植株的报道,因此建立商业化推广大麦...
- 龚强
- 关键词：大麦CRISPRNUD
- 文献传递
