许国峰
- 作品数：4 被引量：11H指数：3
- 供职机构：第二军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人黄韧带细胞骨化发生过程中的自噬被引量：1
- 2020年
- 背景:黄韧带骨化发生的病理机制尚不清楚,临床上无有效的药物或非手术治疗的方法。目前研究发现,骨 桥蛋白与自噬在成骨过程中均发挥重要作用,二者在黄韧带骨化中的作用尚不清楚。 目的:通过对骨桥蛋白和自噬在黄韧带骨化发生机制的研究,尝试找出药物治疗的潜在作用靶点。 方法:①黄韧带骨化病、胸椎骨折或单纯腰椎间盘突出症患者行后路全椎板切除减压获取黄韧带,将标本分 为骨化组和非骨化组,每组各取 8 例标本,通过免疫组化染色观察骨桥蛋白、骨钙素及自噬指标 Beclin-1、 LC3、P62 的表达;②通过组织块贴壁法进行黄韧带细胞的分离培养,并用不同质量浓度的骨桥蛋白干预不 同时间来构建体外黄韧带细胞骨化模型;③非骨化组黄韧带细胞用不同浓度的自噬抑制剂 3-甲基腺嘌呤干 预后,再用 100 μg/L 骨桥蛋白诱导,应用 Western blot 检测骨化指标碱性磷酸酶、骨钙素的表达变化;④ 用 100 μg/L 骨桥蛋白干预非骨化黄韧带细胞,并在 0,15,30,60,120 min 终止骨化诱导过程,应用 Western blot 检测 MAPK 信号通路中重要分子 ERK1/2、JNK、P38 的磷酸化情况;⑤非骨化组黄韧带细胞 用 ERK1/2 特异的磷酸化阻滞剂 U0126 阻断 ERK1/2 通路磷酸化后,再用 100 μg/L 骨桥蛋白诱导,应用 Western blot 检测碱性磷酸酶以及骨钙素的表达变化。 结果与结论:①骨化黄韧带和非骨化黄韧带组织骨钙素、骨桥蛋白的免疫组化均呈阳性表达;骨化黄韧带组织 中 Beclin-1 呈阳性表达,而 LC3 及 P62 未见明显阳性结果;非黄韧带骨化组织中 Beclin-1、LC3、P62 均呈 阳性表达;②与非骨化组比较,骨化组黄韧带细胞中碱性磷酸酶和骨钙素的表达增加;骨桥蛋白可诱导黄韧带 骨化,骨桥蛋白的作用具有浓度相关性和时间相关性;③自噬强弱与骨化程度呈负相关,即自噬越明显,骨化 作用越弱;④骨桥蛋白能使 M
- 许国峰李学斌唐一钒赵寅周盛源陈雄生贾连顺
- 关键词：黄韧带骨化骨桥蛋白自噬信号通路国家自然科学基金
- 腰椎黄韧带增生肥厚中氧自由基H_2O_2介导转化生长因子β1表达的作用及意义被引量：4
- 2017年
- 背景:目前腰椎黄韧带肥厚的病理机制尚不明确,转化生长因子β1在肥厚黄韧带中表达明显增加。研究表明体内氧自由基堆积与组织器官退变密切相关,氧自由基可能通过介导转化生长因子β1表达参与腰椎黄韧带肥厚的进展。目的:观察氧自由基H_2O_2介导的人黄韧带细胞中转化生长因子β1、Ⅰ型胶原表达增加在腰椎黄韧带肥厚过程中的影响及意义。方法:腰椎后路减压术中取影像学上无黄韧带肥厚的单纯腰椎间盘突出症患者的腰椎黄韧带标本1例,进行体外细胞分离、培养,采用经培养的第4-6代细胞,应用H_2O_2对其进行干预,建立低氧诱导模型。设立正常对照组、H_2O_2浓度50μmol/L组、100μmol/L组、150μmol/L组、200μmol/L组,干预72 h,通过实时定量PCR(RT-qP CR)和Western blot方法分别检测转化生长因子β1、Ⅰ型胶原的mR NA及蛋白表达。结果与结论:(1)RT-qP CR检测结果显示:H_2O_2浓度150μmol/L组、200μmol/L组转化生长因子β1 m RNA表达显著增加(P<0.05);实验组Ⅰ型胶原mR NA表达均高于对照组(P<0.05),且200μmol/L组表达显著高于其余实验组,差异有显著性意义(P<0.05);(2)Western blot检测结果显示:随H_2O_2浓度增加,转化生长因子β1、Ⅰ型胶原蛋白水平表达显著增加(P<0.05);(3)结果表明,氧自由基H_2O_2通过刺激人腰椎黄韧带细胞产生转化生长因子β1,上调Ⅰ型胶原表达,进而促进腰椎黄韧带增生肥厚。
- 王智清陈雄生周盛源许国峰
- 关键词：原代细胞培养氧自由基H2O2
- X射线九分法评估腰椎间盘退变被引量：3
- 2018年
- 背景:X射线九分法评分系统基于颈椎间盘退变建立,其是否适用于腰椎间盘退变评估尚未验证。目的:验证X射线九分法评估腰椎间盘退变的可行性,探讨其临床应用价值。方法:借助核磁共振Pfirrmann分级系统进行验证,统计学分析X射线九分法与Pfirrmann评分法的相关性。回顾性分析2013年6月至2016年6月在上海长征医院诊治的172例腰椎退变或单纯腰痛患者的影像学资料。所有患者退变椎间盘的核磁共振表现按Pfirrmann评估标准进行评价,X射线表现按九分法评估标准进行评价。评价得出的2组评分数据借助SPSS软件,经Spearman秩和检验进行相关性及回归分析。结果与结论:(1)核磁共振Pfirrmann评分(自变量X):1分2例,2分8例,3分55例,4分84例,5分23例;X射线九分法评分(因变量Y):0分2例,1分6例,2分21例,3分43例,4分40例,5分26例,6分16例,7分8例,8分7例,9分3例;(2)经Spearman相关性检验证明Pfirrmann评分和九分法评分呈显著正相关(P<0.01)。对相关系数进行显著性检验,得出Pfirrmann评分与九分法评分的线性相关关系显著。进一步的回归分析结果显示Pfirrmann评分与九分法评分有直线回归关系;(3)结果表明,X射线九分法与Pfirrmann评分法评估腰椎间盘退变一致性好;X射线九分法作为一种科学、快捷、有效的评估手段,对腰椎间盘退变性疾病的诊断具有一定的参考价值。
- 赵寅周盛源苑博许国峰许政吕碧涛贾连顺陈雄生
- 关键词：椎间盘退化放射摄影术
- 丝裂原活化蛋白激酶信号通路在骨桥蛋白介导黄韧带骨化中的作用被引量：4
- 2017年
- 背景:丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是生物体内重要的信号转导系统之一。课题组前期动物实验提示骨桥蛋白可介导黄韧带骨化的发生。目的:观察MAPK信号通路在骨桥蛋白介导黄韧带骨化中的作用。方法:将16例患者后路椎板切除手术中取得黄韧带标本分为黄韧带骨化以及非骨化两组,每组8例。通过免疫组织化学染色观察骨桥蛋白及其受体CD44、整合素的表达;利用骨桥蛋白对黄韧带细胞进行诱导,并利用蛋白印记方法检测丝裂素活化蛋白激酶信号通路分子的磷酸化激活情况,随后再利用SB203580和U0126阻滞剂分别阻断丝裂素活化蛋白激酶相应信号通路观察骨桥蛋白的诱导情况。结果与结论:(1)骨桥蛋白及其受体CD44及整合素的表达:骨化组的标本中均检测到骨桥蛋白及其受体CD44的表达,但未检测到整合素的表达,非骨化组中则未见到骨桥蛋白及其受体的表达;(2)MAPK信号通路变化:在骨桥蛋白的诱导作用下黄韧带细胞中骨化指标碱性磷酸酶及骨钙素表达增加(P<0.05),同时骨桥蛋白能激活丝裂素活化蛋白激酶信号通路中的p38及ERK1/2信号分子的磷酸化(P<0.05),但JNK氨基末端激酶的磷酸化激活并不明显。利用SB203580阻滞剂阻断p38的磷酸化可明显阻断骨桥蛋白诱导的黄韧带细胞的骨向分化(P<0.05),而U0126阻滞剂阻断效果不明显;(3)结果证实,MAPK信号通路在骨桥蛋白介导黄韧带骨化中其重要作用,p38是诱导黄韧带细胞骨向分化的关键因子。
- 李学斌许政周盛源刘晓东王智清许国峰陈雄生
- 关键词：黄韧带骨化症骨桥蛋白
