王斌
- 作品数：3 被引量：49H指数：2
- 供职机构：中国动物疫病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒强毒株HUB2株全基因组序列分析被引量：1
- 2009年
- 从湖北省暴发猪“高热病”的猪场分离出1株猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV），并命名为HUB2株。根据GenBank上已发表的PRRSV全基因序列设计引物进行RT—PCR扩增，获得PRRSV HUB2株全基因组cDNA序列。测序结果表明PRRSV HUB2株基因组全长15320bp（不包括PolyA尾）。分析结果显示该毒株与PRRSV美洲型标准株（VR-2332）和欧洲型标准株（LV）全基因核苷酸同源性分别为89．6％和50．3％，说明HUB2属于美洲型毒株。与VR-2332相比，HUB2株非结构蛋白（Nsp2）存在2处不连续的缺失（共缺失30个氨基酸），其缺失位点位于推定氨基酸序列的第481位和532～560位。此次新出现的强毒株全基因组序列特性的揭示为科学防治猪高致病性蓝耳病奠定了理论基础。
- 王斌赵铁柱张云霞候丽丽曹振邓小雨遇秀玲孙明陈西钊田克恭
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组非结构蛋白
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查被引量：44
- 2009年
- 2006年6月份以来,我国多个省份暴发高致病性猪繁殖与呼吸综合征,给我国养猪业造成了巨大经济损失。为全面了解高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒在我国的流行情况以及遗传变异规律,本研究采用RT-PCR的方法,对从2006年8月至2007年10月期间,来自于19省(市)共474份样品进行高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸的检测,结果检出阳性样品294份。在各省不同时期样品中均有阳性样品检出。通过对阳性样品进行Nsp2基因和ORF5基因扩增,序列分析发现所有检测的猪繁殖与呼吸综合征病毒株高度同源,为同一毒株遗传变异而来,所有猪繁殖与呼吸综合征毒株与HB-1株遗传关系最近;且Nsp2均缺失30个氨基酸。
- 侯丽丽赵铁柱遇秀玲曹振邓小雨乔明明张硕王斌陈西钊田克恭
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2ORF5
- 高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1株Nsp2基因分段克隆表达及其单克隆抗体的制备被引量：4
- 2009年
- 分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白Nsp2,扩增和克隆JXA1株Nsp2基因的4个片段,并将它们分别插入pGEX-6P-1表达载体构建重组表达质粒,经IPTG诱导表达得到蛋白,纯化后进行活性鉴定。以分段表达的蛋白为抗原,建立间接ELISA方法用于杂交瘤细胞株的筛选。用PRRSVNVDC-JXA1株灭活疫苗对BALB/c小鼠进行常规免疫,最后一次用活毒加强免疫,取其脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,经过选择性培养、有限稀释筛选到1株针对Nsp2的杂交瘤细胞株6B8。鉴定结果表明,该株杂交瘤细胞仅与4个蛋白片段中的Nsp2F1有反应,细胞经长期体外培养和冻存后复苏能稳定分泌抗体,上清效价达1∶210,腹水效价达1∶106。本研究成功表达了4个PRRSV JXA1株的非结构蛋白Nsp2的片段,以其为抗原建立筛选方法,得到1株针对Nsp2的单克隆抗体,为研究Nsp2功能和建立相关诊断方法奠定物质基础。
- 胡鸿惠曹振赵铁柱王斌秦亚嫚杨璐王传彬陈西钊田克恭
- 关键词：NSP2单克隆抗体
