戴悦
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
- 供职机构：湖南师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学杰出青年基金湖南省教育厅优秀青年基金更多>>
- 相关领域：生物学理学更多>>
- 斑马鱼ISL1蛋白多克隆抗体的制备被引量：1
- 2013年
- 目的为了进一步研究ISL1作为第二生心区心脏前体细胞的分子标志在心脏发育中的功能,需要获得ISL1蛋白并制备其抗体。方法根据已报道的ISL1基因序列,以斑马鱼mRNA为模板进行PCR扩增得到ISL1部分编码区序列,然后将其连接到pET-28a载体上获得原核表达载体。将重组质粒进行酶切测序鉴定,然后利用大肠杆菌E.coli BL21对该重组质粒进行表达。经过IPTG诱导,采用Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化的his-ISL1融合蛋白免疫新西兰大白兔制备ISL1多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体效价。结果获得了ISL1原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗ISL1多克隆抗体。结论本实验为ISL1在斑马鱼心脏发育中的新功能的进一步研究奠定了基础。
- 任恋唐超刘宪楚李容戴悦彭佩莹莫小阳
- 关键词：斑马鱼融合蛋白多克隆抗体
- 建立果蝇心脏发育候选基因CG3295的基因敲除系
- 2009年
- 果蝇CG3295基因是哺乳动物基因RMND5在果蝇中的同源物,其功能未知.利用P转座子敲除技术进行果蝇CG3295基因的敲除研究,将果蝇14234系的P转座子与Δ2-3系中的转座酶基因组合到同一个体,使P转座子在体内敲掉目的基因.从后代挑选不含P转座子和转座酶基因的500头雄蝇分别与缺失了CG3295基因的测交系交配,从后代筛选获得20个CG3295基因敲除候选系.进一步利用Hand-GFP系使候选系的心脏表达绿色荧光蛋白,在荧光显微镜下根据候选系是否表现心脏突变表型鉴定敲除系,最后获得了12个表现心脏突变表型的CG3295基因敲除系.
- 夏琼邓云邓志伟廖丹戴悦万永奇莫小阳李永清王跃群袁婺州
- 关键词：果蝇
- 果蝇Bves蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备
- 2013年
- 目的为了进一步研究细胞粘附分子Bves在肿瘤的发生及转移过程中的作用,需要获得Bves蛋白并制备其抗体。方法根据Flybase网站所提供的Bves基因序列,以果蝇的总RNA为模板进行PCR扩增,得到Bves部分编码序列,随后将其连接到pET-28a载体上获得原核表达载体。重组表达质粒经酶切测序鉴定后,转化入大肠杆菌BL21感受态细胞中,并用IPTG诱导融合蛋白的表达,使用活化的Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化后得到的His-Bves融合蛋白免疫注射新西兰大白兔制备Bves多克隆抗体,并用Western blot对抗体效价进行检测。结果和结论获得了Bves原核表达重组融合蛋白及高效价的兔抗Bves多克隆抗体,为后期深入研究Bves基因的功能奠定了基础。
- 彭佩莹赵阳王静周英郝建军曾群陈思行任恋戴悦袁婺洲吴秀山邓云戴国
- 关键词：果蝇融合蛋白多克隆抗体
- 果蝇EF-1α蛋白的原核表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2013年
- 为进一步研究延长因子-1(elongation factor-1α,EF-1α)在调控心脏发育和果蝇心脏功能中发挥的作用,制备延长因子-1的抗体.利用生物信息学选择果蝇EF-1α基因抗原亲水区,并设计出特异性引物,PCR扩增出的片段克隆到原核表达pET-28a载体中,转入E.coli中后通过IPTG诱导融合蛋白表达,将His-EF-1α融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,再用Western Blot检测抗体的效价和特异性.研究结果表明,获得了EF-1α原核表达重组融合蛋白以及高效价的、特异性兔抗EF-1α多克隆抗体.EF-1α多克隆抗体的效价可以达到1比1500,并且有很强的特异性,为后续研究EF-1α基因在心脏发育和心脏功能中的作用奠定了基础.
- 戴悦任恋彭佩莹王盼盼袁婺洲吴秀山
- 关键词：果蝇原核表达多克隆抗体
- 人类心脏特异表达基因pygo1的克隆与功能研究
- 2008年
- 心血管疾病已经成为危害人类健康和生命的头号杀手．研究发现，各种心血管疾病与心脏心律失常和心力衰竭有关．wg信号途径直接调控心脏前体细胞的形成和特化过程．pygo基因是近几年在果蝇市新鉴定的一个参与wg信号途径的基因，但pygo是否参与心力衰竭发生的过程尚不得而知．利用RT-PCR的方法，克隆出人类pygo1基因的全长．该基因位于15q21．1，蛋白342～396区域包含一个PHD结构域．亚细胞定位分析表明，pygo1蛋白分布在细胞核中．利用心力衰竭果蝇模型，通过电场对正常和突变基因的成蝇瞬间中断其心脏功能，记录果蝇心衰率的表现，研究pygo的功能．结果表明，果蝇pygo基因突变杂合子的心脏停止跳动和心脏纤维性颤动的比例达32．3％，比对照的高15．6％，表明pygo与心力衰竭的发生有关．
- 戴悦
- 关键词：心率失常心力衰竭果蝇
- 斑马鱼charon基因的克隆、抗体制备及分析
- 2011年
- 斑马鱼charon基因位于1号染色体上,其成熟肽编码区含有731bp,编码243个氨基酸。charon基因编码Cerberus/Dan家族的一种分泌因子,它与心脏的左右不对称发育有关。为进一步研究charon在心脏左右不对称发育中的功能,以斑马鱼为动物模型,利用RT-PCR的方法成功克隆了斑马鱼charon基因片段,并将其进行原核表达,制备了charon多克隆抗体。通过western blotting对抗体进行分析,结果表明:实验获得了效价较高、特异性较好的charon多克隆抗体,而且charon在斑马鱼中表达较为广泛,在心脏、肌肉、眼睛等组织表达尤其明显。
- 吴坚王玲戴悦吴秀山王跃群
- 关键词：CHARON融合蛋白斑马鱼原核表达多克隆抗体
