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曾蕾
曾蕾
作品数:
1
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供职机构:
浙江大学医学院附属第一医院
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发文基金:
浙江省自然科学基金
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相关领域:
生物学
医药卫生
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合作作者
曹江
浙江大学医学院附属邵逸夫医院
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2006
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HAI-1基因不同功能域的原核表达载体构建及融合蛋白表达
2006年
目的:分段克隆1型肝细胞生长因子激活剂抑制因子(HAI-1)基因的功能域并在大肠杆菌中表达,为进一步研究HAI-1的生物学功能打下基础。方法:针对HAI-1的不同功能域设计相应的5对引物,分别扩增KD1、KD1+LDLR、KD2、LDLR+KD2和KD1+LDLR+KD2片段。将PCR产物克隆至pGEM-TEasy载体中并经测序鉴定。将5个cDNA片段亚克隆至具有6个组氨酸标签(His-Tag)的原核表达载体pIVEX2.3-MCS中。以上述表达不同功能域的载体转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导融合蛋白的表达,表达产物以Westernblot进行鉴定,并进一步通过镍亲和层析柱纯化His-Tag标记的KD1+LDLR+KD2融合蛋白。结果:成功地构建了HAI-1各功能域基因片段的原核表达载体。Westernblot分析证实,在大肠杆菌BL21(DE3)中分段表达了5种HAI-1不同功能域的His-Tag融合蛋白,并通过亲和层析法纯化到了相对分子质量为22200的KD1+LDLR+KD2融合蛋白。结论:重组质粒pIVEX2.3-MCS/HAI-1能在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,纯化的融合蛋白可用于研究HAI-1不同功能域的生物学作用。
曾蕾
曹江
关键词:
原核表达
融合蛋白
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