张榕麟
- 作品数：2 被引量：11H指数：1
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- 相关领域：环境科学与工程生物学更多>>
- 聚乙烯降解菌白浅灰链霉菌LBX-2烷烃羟化酶基因SaalkB的克隆与表达分析被引量：1
- 2023年
- 白浅灰链霉菌(Streptomyces albogriseolus)LBX-2能够高效降解聚乙烯(polyethylene,PE),而烷烃羟化酶alkB基因在聚乙烯降解中可能发挥重要作用.以LBX-2基因组为模板,利用PCR技术扩增SaalkB基因,该基因全长1086 bp,编码361个氨基酸.对该基因编码蛋白进行生物信息学分析,发现AlkB蛋白包含5个跨膜结构域,无信号肽,属于亲水性蛋白,二级结构主要由无规则卷曲和α螺旋组成,与链霉菌Stretomyces sp.XY006的AlkB蛋白的同源性达100%.将克隆得到的SaalkB基因连接到表达载体pDE1上进行原核表达,且重组工程菌株能够降解PE.SDS-PAGE结果显示得到与预期蛋白分子量(40.9 kDa)大小一致的蛋白.利用荧光定量PCR发现,白浅灰链霉菌LBX-2在以PE为唯一碳源的培养基中SaalkB基因的表达量约为在高氏一号培养基中的30倍;蛋白质组学数据分析发现,白浅灰链霉菌LBX-2在以PE为唯一碳源培养48 h和84 h时,AlkB蛋白的表达量比在高氏一号培养基中分别上调了2.35和1.57倍,表明SaalkB基因可能是白浅灰链霉菌LBX-2降解聚乙烯的关键基因.
- 张榕麟高田蕊陈美菊熊爽何欣怡雍彬邵欢欢
- 关键词：基因克隆
- 一株聚乙烯降解菌的筛选及其降解特性研究被引量：10
- 2017年
- 为解决聚乙烯塑料在自然环境中难降解的问题,从土壤中分离出一株降解菌用于聚乙烯塑料生物降解研究。经筛选纯化,对该菌进行生理生化实验、16Sr DNA序列分析和系统发育进化树构建;将菌株接种于以不同相对分子质量聚乙烯粉末(相对分子质量分别为2000、5000、100 000)和膜片(相对分子质量>400 000)为唯一碳源的基础液体培养基中,于30℃、180 rpm下培养;采用分光光度法每隔24 h测定菌体生长浓度、总蛋白含量、还原糖含量以及p H值;培养14 d,采用ABTS法和愈创木酚法测定漆酶和锰过氧化物酶酶活力;培养60 d,称量聚乙烯残留物质量,于扫描电子显微镜下观察膜片表观,对膜片力学性能变化进行测定。鉴定结果表明,该菌为放线菌属的东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis);菌生长浓度随聚乙烯相对分子质量的增大而减小;胞外蛋白质量浓度为(27.625±0.400)^(0.958±0.180)μg·m L^(-1);还原糖质量浓度为(15.664±1.764)^(2.660±0.000)μg·m L^(-1);p H值显著下降;漆酶和锰过氧化物酶酶活力酶活力分别为3 500~3 000 U·L^(-1)和2 600~2 000 U·L^(-1);聚乙烯失重率为(35.81%±0.39%)^(5.57%±0.22%);电镜观察发现膜片表面出现大量降解孔洞和大面积菌体附着;膜片力学性能显著下降;亲水性增大,表面能增大。证明东方拟无枝酸菌能够直接作用于普通聚乙烯塑料表面,是一株高效的降解菌株。推测该菌通过分泌胞外酶氧化聚乙烯长烃链,降低聚乙烯表面能,且在降解过程中产生酸性物质,长烃链最终转化成小分子物质;在菌株降解聚乙烯中起直接作用的酶为漆酶和锰过氧化物酶。
- 钟越李雨竹张榕麟罗贝旭张尔亮陶宗娅竹文坤
- 关键词：聚乙烯塑料生物降解漆酶锰过氧化物酶
