孙小林
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：扬州大学兽医学院江苏省人兽共患病学重点实验室更多>>
- 发文基金：江苏省“青蓝工程”基金江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 我国地方品种姜曲海猪TLR5基因的克隆、表达及鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的:克隆我国地方品种姜曲海猪TLR5基因,构建该基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白并鉴定其免疫特性,为进一步研制TLR5单克隆抗体(mAb)提供免疫原。方法:从全血中提取姜曲海猪的基因组,设计特异性引物,利用PCR方法扩增得到TLR5基因片段,PCR产物克隆到原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达质粒pET-TLR5,将重组表达质粒转化E.coli BL21,0.5 mmol/L IPTG诱导表达目的蛋白,应用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定蛋白活性。结果:成功扩增出猪TLR5基因片段,大小为2 571 bp。酶切鉴定结果表明,猪的TLR5基因成功克隆入原核表达载体pET30a(+)中,重组质粒pET-TLR5在大肠杆菌中获得表达,SDS-PAGE结果显示出相对分子质量(Mr)大小约95 200;Western blot结果表明,表达产物与兔抗小鼠TLR5 mAb具有良好的反应性。结论:成功克隆并表达具有较好免疫原性的猪TLR5分子,为其mAb的制备提供生物材料。
- 孙小林潘志明方强刘仲义焦新安
- 关键词：克隆原核表达
- 我国地方品种猪TLR5分子的克隆、表达及鉴定
- 本研究通过克隆、表达我国地方品种猪Toll样受体5分子基因，以期为猪固有免疫应答机理研究提供有用的生物材料。通过SDS-PAGE电泳发现原核表达的TLR5分子以包涵体形式表达，Western blot结果表明，本研究表达...
- 孙小林潘志明方强刘仲义焦新安
- 关键词：TOLL样受体5免疫应答克隆技术基因表达
