汤瑞华 作品数:3 被引量:17 H指数:2 供职机构: 深圳市疾病预防控制中心 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省医学科学技术研究基金 深圳市基础研究计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
高效液相色谱-串联质谱检测基因组DNA甲基化方法的建立 被引量:2 2014年 目的:建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-ESI-MS/MS)检测基因组DNA甲基化水平的方法。方法:以5-mdC和dG为标准品,采用全自动高效液相色谱系统进行分离,串联电喷雾质谱检测,选择多反应监测模式(MRM)测定标准品,绘制标准工作曲线。结果:在MRM模式下选取5-mdC(m/z 241.9→126.3)和dG(m/z 268.1→152.3)分别作为定量检测的母子离子对,各化合物能实现良好的基线分离;5-mdC和dG碰撞能均为15 eV,去簇电压分别为40和45 V,最低定量限分别为1.65和2.47 fmol;标准品的响应值比为90%~110%;5-mdC含量的天内相对标准偏差和天间相对标准偏差均小于8%。结论:HPLC-ESI-MS/MS是能应用于检测基因组DNA甲基化的一种高通量、高准确率、高分辨率、高灵敏度且重复性好的方法。 张航 胡俊杰 汤瑞华 叶金波 任晓虎 胡韬 黄培武 杨细飞 黄海燕 刘建军关键词:高效液相色谱 串联质谱 DNA甲基化 Hoechst33342/PI双染法和TUNEL染色技术检测神经细胞凋亡的对比研究 被引量:14 2014年 目的:利用Hoechst33342/PI双染法和原位末端标记法(TUNEL染色检测纳米二氧化硅(nm-SiO2)对神经细胞凋亡的影响,比较两种检测方法的优缺点。方法:以体外培养的人神经母细胞瘤SK-N-SH为研究对象,15和30 nm粒径的nm-SiO2(剂量为2.5、5、10μg/mL)分别处理细胞24 h,另设1-5 m SiO2组和溶剂对照组,采用Hoechst33342/PI双染法和TUNEL染色检测各处理组对SK-N-SH细胞凋亡的影响。结果:与对照组相比,两种检测方法分析均显示了nm-SiO2处理组SK-N-SH细胞凋亡率显著增加(P〈0.05),且具有尺寸、剂量依赖性,而微米级SiO2对凋亡的影响不显著(P〉0.05)。结论:nm-SiO2能诱导SK-N-SH细胞凋亡。Hoechst33342/PI双染法特异性高,简单易行;TUNEL法灵敏度高,能检测少量的细胞凋亡,但成本较高,两种方法可结合使用以便更加准确的检测神经细胞的凋亡。 杨细飞 贺春娥 汤瑞华 田生礼 刘建军 田生礼关键词:神经细胞 凋亡 HOECHST33342 TUNEL 肠道病毒71型致轻症手足口病患儿血清蛋白质组分析 被引量:1 2014年 目的探讨肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV-71)感染致轻症手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)的致病机制,筛选相关的血清蛋白生物标志物。方法应用差异荧光双向电泳(Two-dimensional difference ingel electrophoresis,2D-DIGE)分析比较8例轻症手足口病儿童和8名健康儿童血清蛋白表达谱,以DeCyder V6.5软件分析得到有显著差异的蛋白质点,以基质辅助激光解吸离子飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)鉴定差异蛋白质。结果建立了轻症手足口病与正常对照的2D-DIGE图谱,经MALDI-TOF-MS/MS鉴定得到14个差异蛋白。与对照组相比,在轻症手足口病组中表达下调的是:Alpha-2-antiplasmin、Antithrombin-III、Vitamin D-binding protein、Fibrinogengamma chain、Apolipoprotein A-IV、Clusterin、Ig lambda chain C regions、Apolipoprotein A-I、Transthyretin、ApolipoproteinC-III、Apolipoprotein A-II;表达上调的是:Leucine-rich alpha-2-glycoprotein、Haptoglobin、Serum amyloid A protein。结论鉴定得到EV-71感染后轻症手足口病患者血清中差异表达的多种蛋白,这些与炎症反应、免疫应答和神经系统相关蛋白质的差异表达与病毒的感染和宿主的防御过程有关,为进一步研究EV-71致病机理提供一定的理论基础,也为寻找潜在的治疗靶点提供了思路。 杨细飞 黄培武 汤瑞华 任晓虎 洪文旭 刘建军 何雅青 程锦泉关键词:手足口病 蛋白质组