魏娇
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：山东农业大学植物保护学院植物病理学系更多>>
- 发文基金：现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 小麦黄花叶病毒衣壳蛋白的原核表达及抗血清制备
- 通过RT-PCR的方法扩增获得小麦黄花叶病毒（Wheat yellow mosaic virus,WYMV）的衣壳蛋白（CP）基因,并将其连接原核表达载体pEHISTEV。将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta,通过IP...
- 唐伟程德杰魏娇孔凡惠李向东于金凤
- 关键词：小麦黄花叶病毒外壳蛋白原核表达抗血清
- 文献传递
- 小麦黄花叶病毒衣壳蛋白的原核表达及抗血清制备被引量：1
- 2015年
- 通过RT-PCR方法扩增获得小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)的衣壳蛋白(CP)基因,将其连接原核表达载体p EHISTEV,并将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导后,可以表达38 k D的融合蛋白。通过切胶回收的方法收集目的蛋白,免疫新西兰长耳兔,制备WYMV CP的多克隆抗体。间接ELISA测定该抗血清效价为1∶2 048,Western blotting分析表明该血清可以与病株中CP发生特异性反应,而与健康植株汁液无反应。该血清为WYMV的检测及CP功能的研究奠定了基础。
- 唐伟程德杰魏娇孔凡惠李向东于金凤
- 关键词：小麦黄花叶病毒外壳蛋白原核表达抗血清
- 中国小麦花叶病毒CP和CRP蛋白的原核表达、抗血清制备及RNA2侵染性克隆构建被引量：3
- 2015年
- 中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)引起的小麦土传花叶病在山东烟台、威海等地危害严重。本研究克隆了CWMV烟台分离物的衣壳蛋白(Coat protein,CP)及富含半胱氨酸蛋白(Cysteine-rich protein,CRP)基因,并将其连接到原核表达载体p EHISTEV,转化大肠杆菌Rosetta。经IPTG诱导,表达出分子量均为19 k D的CP和CRP。将二者从凝胶中切下,乳化后免疫新西兰大耳兔4次,获得了两种蛋白的多克隆抗体。ELISA检测表明,CWMV CP和CRP抗血清的效价分别为1∶4096和1∶2048。Western blot分析证明该抗血清只与感染CWMV的小麦有特异性反应,而与健康或感染小麦黄花叶病毒的小麦无反应。利用含T3启动子的引物通过RT-PCR扩增出CWMV RNA2全长片段,经T/A克隆连接到p MD18-T,获得质粒p MD18-T-CWMV-RNA2。该质粒经XbaⅠ线性化后,利用T3 RNA聚合酶进行体外转录,转录产物摩擦接种本氏烟,15℃培养3天后,利用Western blot可从接种叶片中检测到瞬时表达的CWMV CP蛋白。
- 孔凡惠脱建波魏娇唐伟李向东迟胜起田延平于金凤
- 关键词：抗血清制备侵染性克隆
