杨青
- 作品数：1 被引量：7H指数：1
- 供职机构：江西农业大学林学院/园林与艺术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 闽楠、红楠AFLP反应体系建立被引量：7
- 2009年
- 以闽楠、红楠总基因组DNA为模板,对AFLP分析各环节的条件进行了优化和筛选,建立了适合于闽楠、红楠AFLP分析的最佳反应体系。其中:酶切反应条件为在20μL反应体系中,加入模板DNA 150 ng,Buffer22μL,BSA0.2μL,EcoRI 3U,MseI 2U,37℃酶切4 h,65℃变性10 min,4℃保存;连接反应条件为将酶切产物中加入5μL连接体系(包括T4 Buffer 2.5μL,EcoRI接头5 pmol,MseI接头50 pmol,T4连接酶1U),16℃连接过夜。预扩增反应条件为在20μL体系中,加入稀释25倍的连接产物5μL,Mg2+(25 mM/L)1.6μL,dNTP(2 mM/L)2μL,预扩增引物E00、M00各30 ng,Taq酶1U。选择性扩增反应条件为:在20μL体系中,加入稀释100倍的预扩增产物5μL,Mg2+1.2μL,dNTP 2μL,选择性扩增引物(E+3/M+3)60 ng,Taq酶1U。本实验结果为闽楠、红楠AFLP分析打下了良好的实验基础。
- 田晓俊温强汪信东杨青江香梅
- 关键词：闽楠AFLP
