李敏 作品数:15 被引量:24 H指数:3 供职机构: 天津市疾病预防控制中心 更多>> 发文基金: 天津市卫生局科技基金 天津市应用基础与前沿技术研究计划 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 环境科学与工程 更多>>
基于GADD45α基因的遗传毒性高通量筛选体系(GSHC)的构建及其应用研究 被引量:1 2023年 目的建立基于GADD45α基因的遗传毒性高通量筛选体系(Green Screen human cells,GSHC),并将其应用于新型可生物降解的食品接触材料改性淀粉/聚对苯二甲酸-己二酸丁二酯(MS/PBAT)的遗传毒性评价。方法将克隆有GADD45α基因启动子和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒用慢病毒转染的方法感染p53野生型人淋巴母细胞系TK6,构建稳转细胞系。用已知遗传毒性阳性和阴性的物质对构建的GSHC系统进行验证。在此基础上,以MS/PBAT为研究材料,对使用4%乙酸、20%乙醇、50%乙醇和95%乙醇作为食品模拟物进行迁移实验获得的多组分迁移物开展遗传毒性评价,并采用鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验)对遗传毒性阳性迁移物进行验证。结果在GSHC筛选体系下,遗传毒性阳性物质甲基磺酸甲酯(MMS)、丝裂霉素C(MMC)和环磷酰胺(CTX)和遗传毒性阴性物质DMSO,均得到了预期结果。GSHC筛选体系下的MA/PBAT的4%乙酸、50%乙醇和95%乙醇3种阳性迁移物的Ames实验结果为阴性。结论GSHC方法可用于多组分迁移物的遗传毒性评价。需要进一步确定GSHC的生物检测限(LOBD),并与成熟的体外测试法进行对比分析。 李敏 吴超 林珺 吴炜亮 隋海霞 杨杏芬关键词:食品接触材料 转基因玉米中外源基因表达红色荧光蛋白致敏性研究 2023年 红色荧光蛋白(red fluorescent protein, RFP)作为一种标记蛋白,可以被光激发产生荧光,将荧光蛋白与目的蛋白融合,在组织或细胞中表达,借助成像技术来进行观察,就可以确定带着荧光蛋白标签的蛋白质定位在细胞内或组织内某一区域,从而更加清晰的追踪这一蛋白质的亚细胞活动规律。1999年红色荧光蛋白首次被报道,因其激发和发射波长更长,在细胞内成像时背景低,已被广泛应用于生命科学、植物育种、石油勘探等各个领域[1-4]。 张力 李敏 张大龙 别松涛 钱智勇关键词:转基因玉米 红色荧光蛋白 过敏性 生物信息学 热稳定性 不同粒径纳米硒化铅对大鼠胚胎神经干细胞的氧化损伤作用 被引量:3 2018年 目的探讨不同粒径纳米硒化铅(Pb Se)对大鼠胚胎神经干细胞(NSCs)的氧化损伤作用。方法将处于对数生长期的NSCs暴露于终浓度分别为0(对照)、6.25、12.5、25、50、75、100、200μg/ml两种粒径(8、25 nm)的纳米Pb Se悬液24 h,采用MTT法检测细胞存活率,采用乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞膜损伤情况。将处于对数生长期的NSCs暴露于终浓度分别为0(对照)、60、80、100μg/ml两种粒径的纳米Pb Se悬液24 h,检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物还原酶(GSH-Px)活力及谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量,采用ELISA法检测细胞培养液中8-羟基-2'-脱氧鸟嘌呤核苷(8-OH-d G)的含量。结果与对照组相比,不同浓度的两种粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞的存活率均降低,差异有统计学意义(P<0.05);且随着两种粒径纳米Pb Se暴露浓度的升高,NSCs细胞的存活率均呈下降趋势。当纳米Pb Se暴露浓度≥50μg/ml时,8 nm粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞的存活率均低于25 nm粒径纳米Pb Se暴露组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,不同浓度两种粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞培养液中的LDH活力均升高,差异有统计学意义(P<0.05);且随着两种粒径纳米Pb Se暴露浓度的升高,NSCs细胞培养液中的LDH活力均呈上升趋势。在相同浓度下,8 nm粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞培养液中LDH的活力均高于25 nm粒径纳米Pb Se暴露组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,不同浓度两种粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞上清液中SOD、GSH-Px活力和GSH含量均降低,而MDA含量均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着两种粒径纳米Pb Se暴露浓度的升高,NSCs细胞上清液中SOD、GSH-Px活力和GSH含量均呈下降趋势,而MDA含量均呈上升趋势。与相同浓度25 nm粒径纳米Pb Se暴露组比较,各浓度8 nm粒径纳米Pb Se暴露组NSCs细胞上清液中SOD、GSH-Px活力和GSH含量均降低,而MDA含量均升高 李敏 钱智勇 管彤 何宁 张大龙 王晓军槟榔多糖多酚对大鼠的亚慢性毒性研究 被引量:3 2022年 目的:研究槟榔多糖多酚对大鼠的亚慢性毒性作用,为槟榔的开发利用提供毒理学依据。方法:SPF级Wistar大鼠100只,雌雄各半,随机分为4组:0.28和0.83 g/kg槟榔多糖多酚组,每组20只,染毒90 d后处死;2.50 g/kg槟榔多糖多酚组和对照组,每组30只,其中20只在染毒90 d后处死,10只在染毒90 d后停止给予受试物,进入恢复期继续正常饲养28 d。染毒期间按10 mL/kg连续灌胃90 d,每天1次,对照组给予等体积蒸馏水。每周称量大鼠体质量和进食量,计算食物利用率,分别于染毒期和恢复期结束后检测血常规、血生化、尿液指标,大鼠麻醉后解剖进行大体观察、计算主要脏器的脏器系数并进行组织病理学检查。结果:2.50 g/kg槟榔多糖多酚组大鼠染毒期体质量总增量低于对照组,除雄性大鼠第1周食物利用率低于对照组(P<0.05)外,其余各周大鼠的食物利用率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.50 g/kg槟榔多糖多酚组雌雄大鼠各有5只于灌胃第3周出现精神欠佳、被毛不顺、胃肠胀气、活动减少等症状,于90 d染毒期间各死亡2只,于濒死前解剖肉眼可见胃肠胀气、胃肠壁变薄呈透明状,但主要脏器组织病理学检查未见明显异常。其他剂量组大鼠在90 d染毒期及恢复期与对照组比较未见明显异常,血常规、血生化、尿液个别指标与对照组比较虽有统计学差异,但均在本实验室正常检测值范围内,无生物学意义。主要脏器系数和组织病理学检查未见明显异常。考虑大鼠的死亡可能为大剂量槟榔多糖多酚引起胃肠胀气严重导致进食及消化受阻所致。在本试验条件下,槟榔多糖多酚灌胃Wistar大鼠90 d,未观察到有害作用剂量(NOAEL)为0.83 g/kg。结论:2.50 g/kg槟榔多糖多酚灌胃90 d可引起Wistar大鼠精神萎靡、胃肠胀气、进食及消化受阻,此症状虽可逆,但剂量过高可致死亡,因此槟榔多糖多酚的开发利用需控制在安� 李敏 何宁 张大龙 管彤 钱智勇关键词:亚慢性毒性 2-(2H-1,2,3-苯并三氮唑-2-基)-4-甲基-6-(2-甲基丙烯-2-基)苯酚的生殖和发育毒性试验研究 2018年 目的对2-(2H-1,2,3-苯并三氮唑-2-基)-4-甲基-6-(2-甲基丙烯-2-基)苯酚(1)的生殖发育毒性进行研究,为进一步风险评价提供依据。方法采用《化学品测试方法》(国家环保总局)中生殖和发育毒性筛选试验方法对化学物1进行生殖发育毒性试验研究。SPF级健康昆明种小鼠120只(雌、雄各60只),动物适应性饲养5 d后进行试验,按照0、146、292、584 mg/kg剂量经口灌胃染毒2周后,雄、雌(1:1)单笼交配,雌鼠阴栓阳性日为妊娠0 d,持续染毒至产后4 d;雄鼠交配后持续染毒2周。称量记录体重、进食量、身长、尾长、性别比,计算繁殖指数;称量生殖器官重量并进行病理组织学检查。结果584 mg/kg剂量组雄性小鼠第5、6周体重、第6周进食量均低于对照组;雌性小鼠子宫重量和子宫/体重比值均低于对照组,差异具有统计学意义(P〈0.05);仔鼠第0天体重、身长、尾长均低于对照组,差异具有统计学意义(P〈0.05)。292 mg/kg剂量组雄性小鼠睾丸重量低于对照组,差异具有统计学意义(P〈0.05)。雌性小鼠妊娠后第2周进食量低于对照组,差异具有统计学意义(P〈0.05)。146 mg/kg剂量组雌性小鼠妊娠第2周进食量低于对照组,差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论化学物1对昆明种小鼠生殖发育毒性的NOAEL雌雄均为146 mg/kg。 管彤 何宁 李敏 张大龙 赵春红 钱智勇关键词:生殖发育毒性 BlueScreen HC在食品接触材料多组分迁移物遗传毒性检测中的适用性 2024年 目的探讨基于人生长阻滞和DNA损伤诱导45α(GADD45α)基因的遗传毒性高通量筛选体系BlueScreen HC(BSHC)在食品接触材料多组分迁移物遗传毒性检测中的适用性。方法将人GADD45α基因开放阅读框上游2000 bp序列作为启动子,采用分子克隆构建入嘌呤霉素和高斯荧光素酶(Gluc)双标记的慢病毒质粒pEZX-LvPG04中,并用慢病毒感染人淋巴母细胞TK6,获得稳转细胞系TK6-Gluc。以甲基磺酸甲酯(MMS,终浓度0,1.56,3.13,6.25,12.5,25.0和50.0 mg·L^(-1))为非代谢活化条件下的阳性物质,环磷酰胺(CTX,终浓度0,0.78,1.56,3.13,6.25,12.5和25.0 mg·L^(-1))为代谢活化条件下的阳性物质,二甲基亚砜(DMSO,终浓度0,0.35,0.69,1.38,2.75,5.5和11.0 g·L^(-1))为阴性物质,分别在非活化和活化条件下验证构建的BSHC。将改性淀粉/聚对苯二甲酸-己二酸丁二醇酯(MS/PBAT)作为研究对象,采用体积分数4%乙酸及10%,20%,50%和95%乙醇作为食品模拟物,40℃、浸泡24 h获得5份MS/PBAT多组分迁移物,并用DMSO作为溶剂复溶得到5份多组分迁移溶液作为受试物。以终浓度为0,0.38,0.76,1.53,3.05,6.10和12.20 g·L^(-1)的不同受试物在活化和非活化2种条件下处理TK6-Gluc细胞。非活化条件下作用48 h;活化条件下,在添加体积分数1%大鼠肝S9代谢活化系统的同时,作用3 h后更换新鲜培养基,继续培养至48 h。处理结束后,采用CCK-8法检测细胞活性,同时采用Secrete-Pair^(TM)Gaussia Luciferase Assay试剂盒检测培养基中Gluc化学发光强度。另外,采用终浓度为3.05和12.20 g·L^(-1)的不同受试物对鼠伤寒沙门氏菌TA98和TA100进行微量波动Ames试验以及对体外培养的中国仓鼠肺细胞CHL进行体外哺乳细胞染色体畸变试验,检测受试物的致突变和染色体畸变作用,与BSHC遗传毒性结果进行对比分析。结果采用BSHC法,将相对细胞活性80%定义为生长抑制的最低有效浓度阈值,实验组相对细胞活性低于溶剂对照组的80 李敏 林珺 吴炜亮 隋海霞 杨杏芬关键词:食品接触材料 槟榔多糖多酚对大鼠致畸试验研究 被引量:2 2021年 目的对槟榔多糖多酚的致畸作用进行探索性研究,为其风险评价、应用和人类健康提供依据。方法采用GB15193.14—2015《食品安全国家标准》中致畸试验方法对槟榔多糖多酚进行致畸试验研究。Wistar大鼠210只,雄、雌(1∶1)单笼交配,雌鼠阴栓阳性(或阴道涂片检出精子)日为妊娠0 d,随机分到各组。按照0、0.28、0.83和2.50 g/kg剂量经口灌胃染毒(孕期第6~15 d的器官形成期),于妊娠第20 d解剖孕鼠。称量、记录孕鼠体质量、仔鼠体质量及身长;检查胎鼠外观、骨骼、内脏及身体发育指标。结果 2.5 g/kg剂量组孕鼠体质量(12、15、18 d)、总增重、净增重及子宫重量(连胎重)、活胎百分率均低于对照组,窝平均吸收胎数及窝平均死胎数均高于对照组(均P<0.05)。胎鼠体质量及身长均低于对照组,且差异均有统计学意义(均P<0.05)。0.83 g/kg剂量组孕鼠体质量(15 d)低于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论槟榔多糖多酚作为食用产品的主要原材料在摄入量低于0.28 g/kg时未见明显的胚胎毒性及致畸作用。 管彤 朱晓瑜 何宁 李敏 张大龙 谢松强 许启太 钱智勇关键词:致畸 δ-生育三烯酚诱导人结肠癌细胞SW620副凋亡作用研究 2016年 目的探讨δ-生育三烯酚诱导人结肠癌细胞SW620副凋亡作用及其机制。方法以MTr试验观察0~30μmol/L δ-生育三烯酚对人结肠癌细胞SW620及人胃黏膜上皮细胞GES-1细胞增殖作用的影响,观察1.0μmol/L放线菌酮(CHX)对15μmol/L δ-生育三烯酚诱导人结肠癌细胞SW620副凋亡的抑制作用。以Westernblot检测0~20μmol/L δ-生育三烯酚对人结肠癌细胞SW620中增殖与凋亡关键信号通路Notch 1及Jagged1蛋白表达的影响。以透射电镜检测15μmol/L δ-生育三烯酚对人结肠癌细胞SW620副凋亡的形态学特征的影响。结果与溶剂对照组相比,用不同剂量的δ-生育三烯酚(终浓度为5、10、15、20、25、30μmol/L)分别作用于SW620及GES-1细胞24h,SW620细胞存活率下降(P〈0.05),而GES-1细胞存活率未见明显下降(P〉0.05)。提前给予1.0μmol/LCHX处理的细胞,经15μmol/L生育三烯酚诱导SW620凋亡作用24h后,SW620存活率较单独加入生育三烯酚作用的细胞存活率增高(P〈0.05)。1.0μmol/L CHX和15μmol/L δ-生育三烯酚共同作用于SW620细胞24h后,Notchl、Jaggedl蛋白表达量与对照组相比分别上升41.8%、41.9%。透射电镜下15μmol/L δ-生育三烯酚作用24h后,SW620细胞在形态学上呈现副凋亡特征,1.0μmol/L CHX能抑制生育三烯酚诱导SW620的副凋亡作用。结论6一生育三烯酚能诱导SW620细胞paraptosis样副凋亡,并且这一过程可以被CHX抑制。 何宁 张书婧 周殿明 刘英华 李敏 张大龙 赵淼 张静姝番茄红素对乙醇氧化损伤模型小鼠抗氧化功能的影响 被引量:8 2018年 目的探讨番茄红素对乙醇氧化损伤模型小鼠抗氧化功能的影响。方法将50只健康成年SPF级雌性昆明小鼠随机分为5组,分别为对照(玉米油)组、模型组及低(0.13 g/kg·bw)、中(0.27 g/kg·bw)、高(0.53 g/kg·bw)剂量番茄红素干预组,每组10只。采用经口灌胃方式进行干预,干预容量为10 ml/kg,1次/d,连续灌胃30 d;末次灌胃后,模型组和各剂量番茄红素干预组禁食16 h(过夜),一次性灌胃干预4.8 g/kg·bw乙醇,干预容量为12 ml/kg。6 h后处死小鼠,分离肝并制备10%肝匀浆,测定丙二醛(MDA)、蛋白质羰基(PC)、还原性谷胱甘肽(GSH)及超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果与对照组比较,模型组小鼠肝组织中GSH和SOD的水平均较低,而MDA和PC的水平均较高,差异均有统计学意义(P<0.05);各剂量番茄红素干预组小鼠肝组织中MDA、PC、GSH和SOD的水平均无明显改变。与模型组比较,中剂量番茄红素干预组小鼠肝组织中GSH和SOD的水平均较高,而MDA的水平较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论番茄红素对乙醇氧化损伤模型小鼠具有拮抗作用。 李倩 张静 张大龙 李敏 钱智勇关键词:抗氧化作用 小鼠 番茄红素 环境化合物神经发育毒性的综合预测方法 目的本研究综合运用多种计算毒理学方法,建立可快速准确预测化合物神经发育毒性的方法,为环境化合物神经发育毒性的评估奠定基础。材料和方法本项目采用定性构效关系模型、生物信息学及交叉参照的预测方法对环境化合物的神经发育毒性进行... 张露 李敏 钱智勇关键词:生物信息学预测