刘子瑜
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：江苏科技大学生物与化学工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 在昆虫表达系统中表达N-糖基化修饰的人胰岛素原基因
- 本研究主要是在已有研究的基础上，运用分子生物学及糖生物学手段相结合的方法，对人胰岛素原进行糖基化修饰改造。具体方法是先将人的胰岛素基因添加糖基化修饰的特征序列，然后进行序列测定。将修饰的人insulin定向克隆到pFas...
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- 关键词：人胰岛素原昆虫细胞糖基化
- 昆虫与哺乳动物蛋白质N-糖基化修饰异同的比较及其潜在的应用意义被引量：2
- 2011年
- 基于过去多年来所积累的关于昆虫蛋白质糖基化修饰的研究成果,对昆虫与哺乳动物的蛋白质N-糖基化修饰途径与分子机制的异同进行了比较分析,同时进一步讨论如何在人们前期研究的基础上,对昆虫杆状病毒表达系统的蛋白质糖基化修饰途径做些改造性工作,以期能够直接利用该昆虫杆状病毒表达系统生产人源化糖蛋白。
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- 关键词：昆虫哺乳动物杆状病毒
- 诱导表达极早期基因ie-1反义序列抑制杆状病毒复制的试验
- 2012年
- 在昆虫杆状病毒的级联复制中,极早期基因ie-1所编码的IE-1蛋白具有重要功能,其中极晚期多角体蛋白基因启动子polh受其调控激活。通过建立具有启动子polh及ie-1长194 bp的反义序列(ie-1-r)的转录载体,使杆状病毒在宿主细胞进行自身复制时受到抑制。试验结果表明,当转入重组转录载体polh/ie-1-r的宿主细胞受携带荧光素酶(luciferase)基因的杆状病毒感染时,能够被诱导激活细胞内多角体蛋白基因启动子转录其携带的ie-1的反义序列RNA,从而部分抑制病毒本身的复制,宿主细胞在病毒感染第4～5天,其荧光素含量与对照RLU(relative light unit)相比下降约1×108个单位,抑制病毒的效果在时间上呈现一定的滞后性。试验结果提示:构建类似的病毒诱导表达系统,通过早期基因激活晚期基因,晚期基因转录抑制早期基因表达的策略,可以对病毒复制进行抑制。
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- 关键词：病毒复制
- 人胰岛素原的N-糖基化修饰及在昆虫细胞中的表达
- 2013年
- 人胰岛素为非糖基化修饰的蛋白质类激素,在生物体内的半衰期非常短。利用蛋白质经N-糖基化修饰后可以增强生物活性并延长其生物半衰期的特点,对人胰岛素原基因进行DNA重组改造,在其B链的N端添加保守性的N-糖基化位点后,克隆入ph/sp质粒,并转化至E.coli AcDH10Bac细胞,获得重组杆状病毒质粒Bacmid-Ig,然后转染Sf21细胞,获得含有N-糖基化位点的人胰岛素原基因(Ig)的重组杆状病毒。用Western blotting方法在感染此重组病毒的Sf21细胞中检测到分子质量约20 kD的经过N-糖基化修饰的人胰岛素原蛋白,并且在添加衣霉素的细胞表达产物中检测到该蛋白质的分子质量变小。研究结果表明,人胰岛素原在昆虫细胞中获得了表达并且被糖基化修饰。
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- 关键词：人胰岛素原昆虫细胞重组杆状病毒
