许汪
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学理学更多>>
- 基于Tet-On 3G的IFITM3诱导表达MDCK细胞系的建立及功能分析被引量：1
- 2017年
- 利用Tet-On 3G系统构建了含人IFITM3基因的真核表达质粒pTRE3G-IFITM3,并将其与调控质粒pLVX-Tet3G共转染犬肾细胞(MDCK),转染后48 h用G418和嘌呤霉素进行筛选,用多西环素(Dox)对获得的细胞系进行诱导表达鉴定,并进行Dox敏感性分析、IFITM3^+细胞百分数及定位分析.用含萤光素酶(Luciferase)报告基因的禽流感病毒H5/H7蛋白或VSV G蛋白包裹的假型慢病毒颗粒进行感染实验,检测萤光素酶活性.结果表明,筛选获得了携带人IFITM3的MDCK诱导表达细胞系,且IFITM3表达量与Dox剂量和诱导时间相关;确定Dox工作浓度为2.5μg/mL,诱导12 h时IFITM3^+细胞数达75%以上,且IFITM3在晚期内体/溶酶体存在分布;假型病毒感染及萤光素酶活性分析表明,IFITM3可显著抑制禽流感病毒H5,H7和VSV G蛋白介导的病毒进入,为深入探究其具体的抑制机制奠定了基础.
- 曹婷婷杜寿文许汪邢彬赵飞王茂鹏朱羿龙白杰英田宇飞刘立明赵翠青周义发李昌金宁一
- 重组PCV3 Cap蛋白植物乳杆菌的构建与表达验证被引量：6
- 2019年
- 构建3型猪圆环病毒(PCV3)Cap蛋白的重组植物乳杆菌并进行验证。通过PCR方法扩增含1320信号肽和DCpep优化的PCV3 Cap基因(PCV3D),使用无缝克隆技术连接到pSIP411载体中,电转入克隆宿主乳球菌NZ3900中,提取测序结果正确的重组表达质粒NZ3900:pSIP411-PCV3D再次电转入植物乳杆菌Lp12,制备重组菌并验证其表达。结果显示:成功扩增出目的条带为789 bp的经过修饰和优化的PCV3 Cap基因(PCV3D)片段,重组表达质粒电转入植物乳杆菌Lp12,成功构建重组植物乳杆菌Lp12:pSIP411-PCV3D。Western blot、流式细胞术等方法检测重组蛋白表达,获得阳性结果,阳性率为47.9%;免疫荧光进一步表明重组蛋白能够在细胞中表达。本试验成功构建了1株表达PCV3 Cap蛋白的植物乳杆菌,为PCV3口服候选疫苗的开发研究提供依据。
- 付婷婷李昌王茂鹏许汪韩继成马彬尧秦爱建金宁一
- 关键词：CAP蛋白植物乳杆菌
- 基于Tet-On 3G的诱导表达IFITM3细胞株的建立及其功能分析
- 引言干扰素诱导跨膜蛋白(IFITMs)属于宿主限制因子的一种,可对大多数囊膜病毒及极少部分无囊膜病毒复制有抑制作用。IFITM3作为其家族成员之一,因具有广泛的抗病毒谱而被广泛的研究。本实验利用Tet-On 3G系统构建...
- 曹婷婷杜寿文许汪尹逊哲李昌金宁一
- 文献传递
- 山羊痘病毒GTPV-AV41的TK基因缺失株构建
- 朱羿龙杜寿文王茂鹏赵飞白冰曹婷婷邸洋许汪邢彬李昌金宁一
- 牛干扰素诱导跨膜蛋白3对口蹄疫病毒感染的抑制作用
- 引言口蹄疫(Foot and Mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus,FMDV)引起的一种偶蹄动物所患的烈性传染病。该病传播途径多、流行范围广和传染性...
- 赵飞谭鹏杜寿文曹婷婷许汪邢彬王茂鹏朱羿龙尹逊哲李昌金宁一
- 文献传递
- 牛干扰素诱导跨膜蛋白3对口蹄疫病毒感染的抑制作用被引量：3
- 2016年
- 为了研究牛干扰素诱导跨膜蛋白3(bIFITM3)对O型口蹄疫病毒(FMDV)的抑制作用,本试验将表达bIFITM3的重组质粒pLV-bIFITM3和表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的对照质粒pLV-EGFP分别转染BHK-21细胞,通过嘌呤霉素抗性筛选获得能够稳定表达外源基因的细胞系。用O型FMDV感染稳定细胞系,通过观察细胞病变、噬斑分析和实时荧光定量PCR方法评价bIFITM3对O型FMDV感染的抑制作用。结果表明,成功筛选获得稳定表达bIFITM3与EGFP的BHK-21细胞系,bIFITM3表达后显著抑制FMDV感染BHK-21细胞,且抑制作用在病毒感染循环的早期阶段就已显现。本试验证明bIFITM3在FMDV感染中具有抗病毒作用,为口蹄疫的防控研究提供新的思路和理论依据。
- 赵飞杜寿文谭鹏曹婷婷许汪邢彬王茂鹏朱羿龙刘立明赵翠青李昌金宁一
- 关键词：口蹄疫病毒BHK-21细胞
- 猪肺巨噬细胞源IFN-λ1的分子克隆、表达与活性分析被引量：2
- 2018年
- Ⅲ型干扰素（interferonlambda，IFN-λ）在机体抗病毒固有免疫、适应性免疫、黏膜免疫及抗肿瘤免疫等方面发挥重要作用。本研究利用RT—PCR技术从猪肺巨噬细胞CRL2845中扩增获得猪IFN—x1基因（pIFN—λ1），并进行遗传进化分析和信号肽预测；将含信号肽的pIFNX1基因分别克隆至真核表达载体pcDNA3．1中，通过常规的质粒转化、阳性茵落筛选、质粒提取及酶切鉴定，获得重组质粒pcDNA-plFNλ1；利用脂质体转染CRL2845细胞，转染48h后通过qRTPCR、Westernblot、间接免疫荧光方法分析pIFNX1表达及胞内定位；收集转染细胞总RNA，通过qRT—PCR方法分析OAS1、ISG15、PKR、WITM3等干扰素刺激基因的表达，并利用舍报告基因的痘病毒VTT—EGFP感染瞬时表达pIFN—λ1的CRL2845细胞，通过流式细胞术分析pIFN—λ1抗痘病毒效果。结果显示，成功在猪肺巨噬细胞中扩增获得pIFN—λ1基因，并在CRL2845细胞内成功表达；瞬时表达后选择性诱导OAS1、ISG15的表达，并可抑制约38％的痘苗病毒感染CRL2845细胞。结果表明，瞬时表达pIFN—λ1能选择性诱导部分干扰素刺激基因的表达，且具有抗病毒活性，为深入研究猪IFN-λ1在宿主抗病毒免疫和黏膜免疫中的作用机理及其应用奠定基础。
- 许汪许汪杜寿文曹婷婷白杰英白杰英田明尧王茂鹏赵飞朱羿龙孙文超刘立明赵翠青李昌
- 关键词：抗病毒活性
