何素芬
- 作品数：4 被引量：37H指数：2
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 基于Red同源重组和高效自杀性载体系统构建肠炎沙门菌突变株方法的比较
- 前言:采用Red同源重组和高效自杀性载体系统敲除肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis)SEF14菌毛sefD/sefA基因,并对两个系统进行比较。Red同源重组系统是将一段携带与靶基因两翼各有40～6...
- 朱春红孙晓庆何素芬朱国强
- 文献传递
- 禽致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛fimH基因缺失突变株的构建及部分生物学特性的分析被引量：11
- 2008年
- 基于禽大肠杆菌Ⅰ型菌毛黏附素fimH基因的已知序列,利用λ噬菌体的Red重组系统构建禽致病性大肠杆菌国内分离株A2(血清型02:K89)Ⅰ型菌毛黏附素.fimH基因缺失突变株A2△fimH∷Cat,在二次重组中利用携带能够表达FLP位点特异性重组酶的质粒pCP20(温度敏感性)以去除上述缺失突变株中抗性基因标志,结合PCR扩增和测序结果,证明.fimH基因缺失株A2ΔfimH的正确构建。通过fimH基因互补试验使A2ΔfimH缺失突变株恢复了与野生株具有相同的凝集活性。红细胞和酵母细胞凝集试验结果表明,野生株呈现良好的凝集效果,并能被0.5%甘露糖完全抑制,而A2△fimH缺失突变株未呈现任何凝集现象。体外生长试验结果表明,在同样的培养条件下,A2△fimH缺失突变株生长周期的各个阶段都要稍慢于野生株。禽致病性大肠杆菌国内分离株Ⅰ型菌毛黏附素fimH基因缺失突变株成功构建,为进一步深入研究禽大肠杆菌Ⅰ型菌毛与机体相互作用的分子机制,肠道外感染的致病机理及对国内禽大肠杆菌病的防控策略奠定了一定基础。
- 何素芬原志伟朱国强
- 关键词：RED重组系统生物学特性
- 禽致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛fimH基因缺失突变株的构建及相关生物学特性的分析比较研究
- 大肠杆菌Ⅰ型菌毛和其易感细胞表面大分子受体的相互作用,在不同宿主组织细胞定植中起着关键性作用,而 FimH 是Ⅰ型菌毛特异性粘附于易感细胞表面甘露糖受体所必需的。基于 FimH 在Ⅰ型菌毛中的关键作用,本研究成功构建禽致...
- 何素芬原志伟朱国强
- 关键词：野生株禽致病性大肠杆菌缺失突变株生物学特性
- 文献传递
- 基于Red同源重组和高效自杀性载体系统构建肠炎沙门氏菌突变株方法的比较被引量：26
- 2009年
- Red同源重组系统和高效自杀性载体系统都能对革兰氏阴性菌染色体直接进行修饰,本试验利用上述2种系统敲除不同来源肠炎沙门氏菌菌株SEF14菌毛操纵子亚单位sefD或sefA基因,并对构建肠炎沙门氏菌突变株方法进行比较。本研究成功构建了国际、国内标准株,鸡源和人源国内分离株sefD和sefA缺失株各4株。Red同源重组系统中能将PCR产物一步法直接转化肠炎沙门氏菌,通过同源重组序列发生同源重组交换,但对PCR产物和感受态细胞的质量要求很高,一次重组效率很低,而二次重组过程则相对简单、高效。自杀性载体系统若将构建好的含同源DNA片段的重组质粒转化宿主菌,其一次重组效率高,二次重组也只需蔗糖筛选传代丢失抗性质粒。Red同源重组系统将在染色体中残留FRT位点;而自杀性载体系统在染色体中可不留任何痕迹。所以2个系统都能对不同源肠炎沙门氏菌染色体进行直接修饰,而且易删除抗性选择标志,与传统的高效自杀性载体系统比较,Red同源重组系统更方便快捷,省时省力。
- 朱春红孙晓庆何素芬朱国强
- 关键词：肠炎沙门氏菌同源重组
