许小洁
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：山东农业大学植物保护学院更多>>
- 发文基金：现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金更多>>
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- 甘蔗花叶病毒辅助成分-蛋白酶基因原核表达及抗血清制备被引量：1
- 2019年
- 利用RT-PCR克隆甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus, SCMV) DWK1分离物辅助成分-蛋白酶(helper component-proteinase,HC-Pro)基因,酶切后连接原核表达载体pEHISTEV,得到重组质粒pEHISTEV-SCMV-HC-Pro。将重组质粒转化大肠杆菌菌株Rosetta,经IPTG诱导后,表达出57 kD的融合蛋白。切胶回收融合蛋白,多点注射法免疫新西兰长耳兔,制备SCMV HC-Pro抗血清。间接ELISA结果表明,该血清效价为1∶8 192。感染DWK1的玉米叶片病汁液稀释128倍时,该血清仍然能够有效检测出HC-Pro。Western-blot检测结果表明,该血清可特异性检测SCMV第Ⅰ组分离物DWK1和第Ⅳ组分离物DWK2,与同属的烟草脉带花叶病毒(TVBMV)和马铃薯Y病毒(PVY)均无反应。本研究为准确、快速检测SCMV HC-Pro并进一步研究其功能和作用机制奠定了基础。
- 许小洁于伟鹏杨广玲韩士玲何梦君杨旭李向东
- 关键词：甘蔗花叶病毒原核表达抗血清
- 甘蔗花叶病毒衣壳蛋白的原核表达及抗血清制备被引量：1
- 2018年
- 将甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)第Ⅰ组分离物DWK1和第Ⅳ组分离物DWK2的衣壳蛋白(coat protein,CP)基因分别克隆到原核表达载体pEHISTEV,得到重组质粒pEHISTEV-SCMV-Ⅰ-CP和pEHISTEV-SCMV-Ⅳ-CP。将两个重组质粒转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导,均表达出分子量为38 kD的融合蛋白。切胶回收融合蛋白,免疫新西兰长耳兔5次,获得了SCMV-ⅠCP和SCMV-ⅣCP的多克隆抗体。间接ELISA结果表明,两种血清的效价均达到1∶8192。Western Blot结果表明,利用SCMV-ⅠCP制备的抗血清与DWK1反应更强,而利用SCMV-ⅣCP制备的抗血清与DWK2反应更强。本研究为SCMV检测及CP功能研究奠定了基础。
- 许小洁张继武徐德坤殷复伟田延平田延平
- 关键词：甘蔗花叶病毒衣壳蛋白原核表达抗血清
- 甘蔗花叶病毒第Ⅳ组分离物RT-PCR检测体系的建立及应用被引量：3
- 2017年
- 甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)是引起我国玉米矮化叶病的主要病毒。根据其基因组序列,SCMV可以分为4个组,其中第Ⅳ组分离物属于新出现的强毒株系。为了快速检测SCMV尤其是Ⅳ组分离物的发生情况,我们针对SCMV Ⅰ-Ⅳ组及Ⅳ组分离物设计了6对引物,从中筛选出特异性最强的2对引物(Ⅰ-Ⅳ-2F/Ⅰ-Ⅳ-2R和Ⅳ-1F/Ⅳ-1R),进行PCR体系的优化。优化后的PCR体系为:退火温度51℃,d NTP终浓度为0.1 mM,引物终浓度为0.20μM,Taq DNA聚合酶终浓度为0.015 U·μL^(-1)。利用该体系,引物对Ⅰ-Ⅳ-2F/Ⅰ-Ⅳ-2R和Ⅳ-1F/Ⅳ-1R均能够从50 ng感病叶片或0.05 ng病毒RNA中检测出SCMV。通过优化两对引物浓度比例建立了能同时检测SCMV所有分离物及第四组分离物的双重PCR体系。利用该体系从山东、河南及云南均检测出SCMV第Ⅳ组分离物的发生。本研究为SCMV尤其是SCMV第Ⅳ组分离物的快速检测提供了技术支持。
- 闫志勇程德杰房乐许小洁田延平贾曦李向东
- 关键词：甘蔗花叶病毒反转录-聚合酶链式反应
