陈伟
- 作品数：98 被引量：302H指数：9
- 供职机构：贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室更多>>
- 发文基金：贵州省科技厅重大专项国家科技支撑计划贵州省科技厅农业攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学自动化与计算机技术文化科学更多>>
- 关岭牛MyoDⅠ基因启动子报告质粒的构建及活性验证被引量：10
- 2013年
- 为了克隆关岭牛MyoDⅠ基因启动子并验证其启动活性,根据GenBank中牛的MyoDⅠ基因序列设计PCR引物,用PCR技术扩增牛MyoDⅠ基因的启动子,构建重组克隆载体pUCmT-MyoDⅠ;并通过PCR扩增、限制性酶切、测序及生物信息学分析对阳性克隆进行鉴定;构建报告质粒pGL3-MyoDⅠ,并将其转染小鼠C2C12、3T3-L1细胞系,检测其24h后的双荧光素酶活性。实验结果获得了关岭牛MyoDⅠ基因启动子,其序列长度为993bp,并成功构建了MyoDⅠ启动子报告质粒;双荧光素酶活性检测表明pGL3-MyoDⅠ在小鼠C2C12细胞中的表达是pGL3空载体40.65倍,在小鼠3T3-L1细胞中的表达是空载体的1.13倍,MyoDⅠ启动子在小鼠C2C12细胞中的表达高于3T3-L1细胞(**p<0.01)。结果表明关岭牛MyoDⅠ基因启动子具有启动活性,在小鼠骨骼肌细胞中特异性表达。
- 李飞许厚强陈伟陈祥刘敏桓聪聪
- 关键词：启动子荧光素酶C2C123T3-L1
- 贵州地方黄牛IGF-1基因多态性及生物信息学分析被引量：2
- 2020年
- 为分析黄牛IGF-1基因多态性,筛选出对贵州本地黄牛生长性状有显著影响的SNPs位点,本研究以贵州关岭牛、思南牛、威宁牛和黎平牛为试验对象,构建DNA混池,PCR扩增IGF-1基因所有外显子及部分内含子,采用直接测序法检测IGF-1基因多态性,利用生物信息学软件对IGF-1基因进行分析。结果表明:在贵州4个地方牛群体种中,共筛选出3个SNPS,分别为Intron2-A5123G、Exon3-G56419A、Intron3-C56464A,Exon3-G56419A属于同义突变。其中2个SNPS(Intron2-A5123G,Intron3-C56464A)为4个牛种所共有,而Exon3-G56419A突变仅存在黎平牛中。生物信息学分析表明,牛IGF-1编码蛋白为分泌蛋白,含有信号肽序列,相对分子质量为16937.68,理论等电点为9.36,且突变前后IGF-1基因m RNA二级结构发生改变,自由能升高,稳定性降低。研究结果显示,4个牛种IGF-1基因具有较高的遗传多样性,可为贵州地方牛种的保种选育提供参考。
- 吴雨陈祥陈伟陈伟段志强黄明捷
- 关键词：IGF-1基因多态性生物信息学
- 中草药功能性饲料添加剂对仔猪腹泻的治愈效果被引量：9
- 2018年
- 为筛选治疗仔猪腹泻的理想中草药功能性饲料添加剂组方,从而部分或者全部替代抗生素在养猪生产中的使用,进行了不同中草药组方与常规西药(恩诺沙星)治疗腹泻仔猪的对比饲养试验。结果表明:中草药组方B(黄柏32g,黄连28g,丁香12g,秦皮8g,金银花11g,甘草9g)和组方C(白术20g,茯苓24g,山楂18g,秦皮10g,藿香8g,板蓝根9g,甘草8g)对断奶仔猪腹泻的治愈率分别为92.30%和89.47%,高于西药治疗效果(治愈率83.33%);B、C组方对哺乳仔猪腹泻治愈率分别为96.87%和90.32%,明显优于西药组治疗效果(73.08%)。适宜的中草药组方对仔猪腹泻的治愈效果优于西药(抗生素),因此可用中草药组方部分或全部替代抗生素在养猪生产中使用。
- 杨沛方覃海陈祥陈伟
- 关键词：中草药仔猪腹泻
- 小鼠胚胎显微操作针的制作方法被引量：3
- 2015年
- 显微操作针是显微操作的必备工具,其制作的好坏直接影响到操作的成败。介绍了利用拉针仪、断针仪、磨针仪制备用于小鼠胚胎移植显微操作的移卵针(moving pipettes)、注射针(injection pipettes)和持卵针(holding pipettes)的制作方法,以供实验参考。
- 倪萌萌许厚强赵佳福陈伟桓聪聪周迪
- 关键词：显微操作注射针制作方法
- 牛MSTN启动子与MEF2C转录因子相互作用的研究被引量：2
- 2019年
- 旨在解析牛MSTN启动子与MEF2C之间的相互调控作用,进一步探讨MSTN基因在肉牛肌肉生长发育方面的调控机制。首先,通过PCR扩增关岭牛MSTN启动子序列2 267 bp和MEF2C基因CDS区1 425 bp。其次,构建pGL3-Basic-MSTN和pcDNA3.1(+)-MEF2C双荧光素酶报告载体,采用脂质体法共转染至小鼠C2C12成肌细胞,24 h后检测其双荧光素酶活性。最后,通过PCR扩增MSTN启动子核心片段MSTN-P1,重新构建以MSTN-P1片段替代(CMV)区的重组表达载体pEGFP-N3-MSTN-P1-MEF2C,将其分别转染至小鼠C2C12成肌细胞和大鼠下颌腺上皮细胞,24 h后观察绿色荧光蛋白发光情况,48 h后提取细胞总RNA,利用qRT-PCR检测MEF2C基因在不同细胞中的表达情况。结果显示,在小鼠C2C12成肌细胞中,共转染pcDNA3.1(+)-MEF2C试验组较pGL3-Basic-MSTN试验组能显著增强MSTN启动子的活性(P<0.05),较pGL3-Basic对照组能极显著增强MSTN启动子的活性(P<0.01);MSTN启动子核心片段MSTN-P1能驱动MEF2C基因在小鼠C2C12成肌细胞中的表达量极显著上调(P<0.01),且能驱动MEF2C基因在大鼠下颌腺上皮细胞中的表达量显著上调(P<0.05)。结果表明,在转录水平,MSTN启动子与MEF2C可能同时参与了牛肌肉生长和分化的调控。
- 杨涛许厚强许厚强陈伟陈伟周迪
- 关岭牛MyoD基因家族对MyoD1启动子活性的影响被引量：5
- 2016年
- 【目的】生肌决定因子(myogenic determination gene,MyoD)家族是肌肉生成过程中参与分子调控作用的一个重要家族。该家族包括MyoD1,Myf5,Myo G和Myf6,只表达在成熟的骨骼肌细胞和其前期细胞中;在其他的非肌细胞中,MyoD基因家族会被抑制。该家族中,MyoD1负责早期胚胎成肌祖细胞的激活并参与胚后骨骼肌的生长、发育和修复等的调节,以维持个体骨骼肌的相对稳定,是启动和维持骨骼肌细胞分化和生长的重要因素,具有尤为重要的作用,已成为研究热点。目前MyoD1在多态性和关联性分析等方面的研究较多,表达调控方面主要是研究小鼠、鸡和猪肌细胞生成机理;在牛上对它的研究主要在转录后和翻译水平的表达,但对MyoD1在转录调控方面的作用机制还不明确。文章研究关岭牛MyoD基因家族对MyoD1启动子活性的影响,为探讨牛MyoD1的表达调控机制奠定基础。【方法】通过设计特异性引物克隆关岭牛MyoD基因家族CDS区和MyoD1启动子片段P1和P2;同时利用双酶切的方法分别将CDS区和克隆的启动子序列连入pcDNA3.1(+)和p GL3-Basic基本骨架,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-Myf5、pcDNA3.1(+)-Myf6、pcDNA3.1(+)-MyoD、pcDNA3.1(+)-Myo G和含萤火虫荧光素酶报告基因的报告载体p GL3-P1、p GL3-P2。重组质粒经酶切和测序鉴定后,利用共转染的方法将真核表达载体和报告载体转染小鼠C2C12细胞,30 h后裂解细胞并检测细胞裂解液的双荧光素酶活性。最后根据荧光素酶的相对活性来分析MyoD基因家族对MyoD1启动子活性的影响。【结果】克隆得到的关岭牛MyoD基因家族CDS区和MyoD1启动子序列测序正确,载体pcDNA3.1(+)-Myf5、pcDNA3.1(+)-Myf6、pcDNA3.1(+)-MyoD、pcDNA3.1(+)-Myo G、p GL3-P1和p GL3-P2经酶切和测序鉴定,证实载体构建成功;与相应剂量的对照组相比,转染pcDNA3.1(+)-Myf5、pcDNA3.1(+)-Myf6、pcDNA3.1(+)-MyoD后,p GL3-P1的相对荧光素酶活性明显增�
- 张雯许厚强陈伟陈祥赵佳福桓聪聪夏丹周迪
- 关键词：转录因子启动子报告基因
- 贵州地方山羊FSHR mRNA转录水平相对定量研究
- 引言 促卵泡素(FSH)是由动物脑垂体分泌的一种糖蛋白,起着调控动物卵泡生长、发育、优势化及成熟的作用.FS信息作用的发挥,需要经过卵泡上的相应受体即FS受体(FSHR)介导,才能传递到靶细胞内.有关FSHR受体表达已有...
- 龙威海丁玫冯文武许厚强陈伟陈祥
- 日粮能量对贵州从江香猪生长性能和血液生化指标的影响被引量：3
- 2017年
- 为了研究日粮能量水平对贵州从江香猪生长性能和血液生化指标的影响,试验在满足蛋白质、氨基酸等营养水平的前提下,选取10头年龄、体重接近的从江香猪,随机分为高能量(14.35 MJ/kg)组和低能量(12.26 MJ/kg)组,测定生长性能和血液生化指标。结果表明:日粮能量对从江香猪生长性能的影响不显著(P﹥0.05);但对血液生化指标有较大影响,低能量组从江香猪血液中的丙氨酸氨基转移酶活性及尿素、钠含量均显著低于高能量组(P<0.05);低能量组天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、肌酸激酶、肌酸激酶MB型同工酶、α-羟丁酸脱氢酶、乳酸脱氢酶活性及尿酸、钙、镁、磷含量均极显著低于高能量组(P<0.01);低能量组白蛋白、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B含量等指标均极显著高于高能量组(P<0.01)。说明在满足其他营养条件下,降低日粮能量水平不会降低断奶仔猪蛋白质合成和代谢,还可能提高断奶仔猪的免疫性能,对脂肪代谢也有一定影响。
- 肖伟喻昌毅许厚强孙成娟周迪陈伟
- 关键词：从江香猪日粮生化指标
- 生长激素基因的克隆和表达及其对贵州地方黄牛骨骼肌细胞增殖的影响被引量：2
- 2021年
- 本研究旨在探究生长激素(Growth hormone,GH)对贵州地方黄牛骨骼肌细胞增殖的表达调控,探明超表达GH基因对骨骼肌细胞增殖的影响。首先利用反转录PCR扩增黄牛GH基因的蛋白质编码区(Coding sequence,CDS),将其克隆至pUCM-T载体,并连接转化构建超表达载体pEGFP-N3-GH。同时使用实时荧光定量PCR检测GH基因在贵州地方黄牛骨骼肌相关组织(腰大肌与背最长肌)中的表达情况,然后培养牛原代骨骼肌细胞并进行鉴定,并将GH基因超表达载体导入细胞以研究GH基因对牛骨骼肌细胞增殖以及骨骼肌生长发育相关因子胰岛素样生长因子-1(Insulinlikegrowthfactor1,IGF-1)与胰岛素样生长因子-2(Insulinlikegrowth factor 2,IGF-2)基因表达的影响。实时荧光定量PCR结果显示,GH基因在贵州地方黄牛腰大肌中的表达量均高于背最长肌,其中在关岭牛和威宁牛腰大肌中的表达量显著高于背最长肌(P<0.05)。细胞转染及增殖结果表明,相比于pEGFP-N3,pEGFP-N3-GH能极显著提高GH与IGF-1、IGF-2基因在骨骼肌细胞中的表达量,且在被检测的4个时期(6 h、12 h、24 h、48 h),超表达GH基因组也能够极显著地提高骨骼肌细胞的增殖速率(P<0.01)。结果提示,GH基因可促进贵州地方黄牛骨骼肌细胞的增殖,对其具有正向的调控作用,这为进一步探究GH基因对贵州地方黄牛生长发育的影响机制奠定基础。
- 陈祥周志楠吴雨宋汝谋陈伟
- 关键词：GH基因骨骼肌细胞
- GHR基因敲除香猪的鉴定及生长指标测定被引量：3
- 2016年
- 为获得纯合的GHR基因敲除香猪的种群,本研究以贵州从江香猪为母本,中国农业大学提供的GHR基因敲除猪(GHR(+/-))为父本杂交选育F1代,筛选出F1代阳性杂合子猪和阴性猪,再用F1代阳性杂合子猪进行扩繁得到F2代。测定F1代和F2代猪的生长指标,同时检测F1代和F2代阳性猪。实验结果表明F1代GHR基因敲除阳性猪(GHR+/+)和阴性猪(GHR+/-)生长指标差异均不显著(p>0.05)。F2代GHR基因敲除猪在3月龄时体长、体重存在显著差异(p<0.05),F2代4月龄阳性猪与阴性猪各项指标均差异显著(p<0.05)。测序结果显示F1阳性杂合子猪共11头,阴性猪15头;F2阳性纯合子猪共8头,阴性猪9头。
- 陈伟许厚强喻昌毅陈明飞肖伟张鸣杨洋
- 关键词：体重
