刘勇
- 作品数：36 被引量：81H指数：5
- 供职机构：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中国综合性艾滋病研究项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程农业科学更多>>
- DNA疫苗、重组病毒载体复合型疫苗的临床前毒理学研究
- 2007年
- 霍艳刘勇王三龙刘颖闻镊耿彩荣苗玉发孙立李波邵一鸣王军志
- 关键词：DNA疫苗
- 塞姆利基森林病毒翻译增强序列对HIV Gag DNA疫苗抗原表达和免疫原性的调节被引量：2
- 2005年
- 目的研究塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)衣壳蛋白5′翻译增强区对基于该病毒复制子的HIVGagDNA疫苗抗原表达水平和免疫原性的影响。方法将SFV衣壳蛋白(capsid,C蛋白)基因的5′端102bp翻译增强区插入到SFV复制子DNA疫苗载体pCMVRep的SFV亚基因启动子下游,得到DNA疫苗载体pCMVRepC。将删除ATG的HIV1gag基因插入pCMVRepC,使gag编码区与翻译增强区融合,得到DNA疫苗质粒pCMVRepCgag。同时,构建携带未融合翻译增强序列的DNA疫苗质粒pCMVRepgag。Westernblot检测翻译增强序列对Gag表达水平的影响。用上述两种DNA疫苗分别免疫BALBc雌性小鼠,ELISA检测Gag特异的抗体反应,ELISPOT和细胞内因子染色技术检测细胞免疫应答。结果衣壳蛋白5′翻译增强区增强了Gag表达水平,对体液免疫应答没有显著影响,但显著增强了特异性细胞免疫应答水平。结论SFVC蛋白翻译增强区能显著提高SFV复制子DNA疫苗的抗原表达和抗原特异性细胞免疫反应。
- 张玉伟周克民李鼎锋李海山范文玲徐建青孙茂盛刘勇邵一鸣
- 关键词：DNA疫苗抗原表达免疫原性GAG特异性细胞免疫应答翻译
- 表达具有免疫激活功能的单链RNA的DNA疫苗载体及其用途
- 本发明公开了一种用于提高DNA疫苗免疫原性的表达载体，该载体包含可操纵地连接于启动子的编码具有免疫激活功能的单链RNA(ssRNA)的DNA序列。本发明还公开了一种重组质粒，其包含上述表达载体和插入所述表达载体中的编码抗...
- 邵一鸣张玉伟李鼎锋刘勇
- 文献传递
- 体内电穿孔对报告基因表达和HIV Gag DNA疫苗诱导的免疫反应的影响被引量：5
- 2006年
- 目的研究体内电穿孔递送途径在小鼠模型中对于报告基因表达水平及HIV Gag DNA疫苗所诱导的免疫反应的影响。方法构建荧光素酶(luciferase)表达质粒p1．0-luc,将其通过直接肌肉注射、肌注后以双针电极进行电穿孔、肌注后以钳式电极进行电穿孔等3种不同方法注射小鼠,72h后取注射部位的肌肉测定luciferase的表达情况。同时构建携带密码子优化的HIV-1B′/C重组亚型CN54株gag基因的DNA疫苗质粒p1．0-gag,在10μg、100μg两个剂量水平上通过以上3种不同的方法免疫BALB/c雌性小鼠,ELISA方法检测Gag特异的抗体反应,ELISPOT方法和细胞内因子染色(jntracellular cytokine staining,ICS)技术检测细胞免疫应答。结果通过体内电穿孔可以使luciferase在小鼠肌肉中的表达水平显著提高,最大提高幅度达到66倍。Gag DNA疫苗免疫结果显示,电穿孔可以显著提高Gag特异的体液免疫应答,其中使用双针电极的效果要显著好于钳式电极,前者所诱导的抗体滴度比不使用电穿孔组提高可达28倍。但体内电穿孔对于Gag特异的细胞免疫应答并没有显著影响。结论体内电穿孔(尤其是使用双针电极)可以大幅度提高报告基因在体内的表达水平和DNA疫苗诱导的抗原特异性体液免疫应答。
- 李鼎锋张玉伟李海山范文玲孙茂盛刘勇邵一鸣
- 关键词：DNA疫苗基因表达
- HIV-1 CN54 Gag P55和P24蛋白的高效表达、纯化和鉴定被引量：7
- 2004年
- 目的 探讨HIV 1中国株CN5 4GagP5 5和P2 4重组蛋白的高效表达并纯化 ,为研究HIV疫苗和诊断试剂创造条件。方法 分别将CN5 4GagP5 5和P2 4基因克隆至 pBV2 2 0和 pThioHisC载体 ,构建非融合表达载体 ;将重组质粒转化大肠杆菌BL2 1codonplus RIL ,对工程菌进行诱导表达。Western Blot检测目的蛋白 ,用DEAE SeparoseFF阴离子交换层析柱纯化目的蛋白 ;纯化的P5 5和P2 4抗原蛋白分别包被酶标板作ELISA检测。结果 P5 5以包涵体的形式表达 ,表达量占菌体总蛋白的 30 % ,P2 4实现了可溶性表达 ,表达量占总菌体总蛋白的4 0 % ;纯化后P5 5纯度达到 80 % ,P2 4纯度超过 90 %。Western Blot和ELISA检测均显示了良好的的灵敏度和特异性。结论 HIV 1CN5 4GagP5 5和P2 4抗原蛋白可在大肠杆菌中高效表达 ,纯化的抗原蛋白具有良好抗原性 。
- 王道毅刘勇郝彦玲马民强傅晶晶李海山王贻杰陈静娴邵一鸣
- 人纤溶酶原K5基因在毕赤酵母中的表达及其抗肿瘤活性被引量：4
- 2008年
- 目的在毕赤酵母中表达人纤溶酶原K5基因,并检测hK5蛋白的抗肿瘤活性。方法根据酵母遗传密码的偏爱性优化设计hK5基因,构建重组表达质粒p819-8α-hK5,经G418加压筛选和甲醇诱导表达,并对摇瓶发酵条件进行优化。表达的hK5蛋白经纯化后,通过荷H22肿瘤昆明小鼠模型检测其抗肿瘤活性。结果筛选到2株高表达hK5蛋白的转化子,摇瓶表达量超过150mg/L,纯化后的蛋白纯度大于95.0%,并能够显著抑制昆明小鼠H22肿瘤的生长。结论hK5基因能够在毕赤酵母中高效分泌表达,且表达的hK5蛋白具有良好的抗肿瘤活性。
- 袁力勇刘勇饶春明马雁冰史新昌王军志戴长柏
- 关键词：人纤溶酶原毕赤酵母抗肿瘤活性
- MicroRNA与病毒感染的新进展被引量：3
- 2008年
- MicroRNA又叫miRNA,是长约21～24个核苷酸的单链RNA,它能够通过与靶基因3'端非翻译区识别结合,抑制其mRNA的翻译,或降解靶mRNA.是降解还是抑制靶标mRNA主要取决于miRNA与之的互补程度.最近的研究证明,在宿主与病原体之间错综复杂的关系中,miRNA起到了重要的作用,并被认为与病毒感染和宿主抗病毒免疫有关.随着分子生物学的深入和对miRNA研究的发展,miRNA作为抗病毒基因治疗的候选药物具有良好的应用前景.
- 孙静刘勇郝彦玲邵一鸣
- 关键词：MICRORNA病毒感染宿主防御抗病毒治疗
- HIV-1 CN54 Pol P51抗原高效表达、纯化、复性及在抗体检测中的应用被引量：2
- 2010年
- 为获得可溶性高纯度HIV-1中国株CN54PolP51抗原,将携带CN54polp51基因的重组质粒pTHioHisA51转化大肠杆菌BL21codonplus-RIL,用IPTG进行诱导表达。用Chelating SepharoseFF-Ni亲和层析柱及DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱纯化目的蛋白,采用透析复性法得到可溶性抗原,Western blotting检测目的蛋白。用纯化的P51抗原蛋白标记辣根过氧化物酶及包被酶标板进行双抗原夹心法ELISA检测。结果显示P51以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的50%,经两步层析和透析复性,目的蛋白纯度大于95%。Western blotting和双抗原夹心法ELISA检测均显示了良好的灵敏度和特异性。本研究可以为HIV-1疫苗研究和开发检测试剂提供支持。
- 侯爵孙静徐智勇范文玲张怡轩刘勇郝彦玲
- 关键词：纯化复性抗体检测
- 重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体纯化条件的优化被引量：3
- 2009年
- 目的优化重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件。方法将表达Gp41的大肠杆菌菌体高压匀浆破碎、洗涤分离提取包涵体,以不同pH值的低浓度变性剂溶解包涵体,稀释复性并用离子交换层析纯化目的蛋白,纯化产物经West-ernblot进行鉴定。结果以50mmol/LTris buffer、2mol/L,pH11.5尿素溶解的包涵体蛋白得到很好的溶解,目的蛋白复性得率大于40%。经纯化后,目的蛋白的纯度大于90%,且具有良好的反应原性。结论优化了重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件,为HIV-1Gp41抗原纯化工艺的放大提供了依据。
- 孙静傅晶晶霍烛陈佩胡云章刘勇郝彦玲
- 关键词：HIV-1包涵体纯化
- HIV-1 GP120主要抗原性片段的制备及其在HIV诊断中的应用被引量：6
- 2006年
- 目的研制HIV中国流行株RL42GP120主要抗原性片段,以便进一步开发HIV抗体检测试剂。方法克隆RL42毒株GP120蛋白C-端250个氨基酸的编码序列,克隆入大肠杆菌表达载体pBV220进行表达。通过包涵体处理和离子交换层析纯化目的蛋白。将纯化后的蛋白用狭缝电转技术转印硝酸纤维素膜,利用HIV参考品血清检测其灵敏度和特异性。结果目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的10%左右。纯化后其纯度高于95%,HIV参考品血清检测显示出良好的灵敏度和特异性,检测8份阳性临床标本无一漏检,而7份阴性临床标本无交叉反应。结论已研制出具有良好灵敏度和特异性的HIV-1GP120主要抗原性片段。为开发HIV抗体检测试剂创造了条件。
- 郝彦玲张梦华黄云坚袁国亮陈佩朱旭辉傅晶晶刘勇邵一鸣
- 关键词：HIV-1GP120
