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利用显微注射技术冷冻保存牙鲆胚胎被引量：2: 2008年; 在鱼类胚胎的冷冻保存中,需要抗冻剂有效地渗入胚胎,才能对胚胎起到保护作用。本研究采用显微注射技术将抗冻剂直接注射到牙鲆（Paralichthys olivaceus）胚胎内,以实现牙鲆胚胎的玻璃化低温冷冻保存。研究中,首先对抗冻剂种类进行了选择,将抗冻剂的毒性由大到小依次排列为：乙二醇（EG）、甘油（Gly）、二甲基亚砜（DMSO）、甲醇（MeOH）、1,2丙二醇（PG）、PM21（PG∶MeOH=2∶1）;对胚胎发育时期和注射剂量进行了筛选。实验结果显示,注射600pL（1pL=10-6mL）抗冻剂PM21后,牙鲆的心跳期胚胎成活率显著高于尾芽期胚胎（P〈0.05）,成活率为（64.04±2.05）%;对卵黄囊、卵膜与卵黄膜间隙作为注射部位进行了选择,发现采用卵黄囊内注射的胚胎成活率高于＂五步平衡法＂,并显著高于通过卵黄膜间隙注射（P〈0.05）,其成活率为（44.24±7.88）%。结果表明,注射600pL35%PM21至牙鲆心跳期胚胎卵黄囊内,平衡10min,然后进行玻璃化冷冻保存,取得了68.2%~79.4%透明胚胎,能够对牙鲆胚胎提供很好的保护。说明显微注射方法可以成功地将抗冻剂注射入牙鲆胚胎,并在牙鲆胚胎的冷冻及胚胎的完整性方面发挥有效的保护作用。; 丁浩田永胜武鹏飞刘洋陈松林; 关键词：牙鲆胚胎显微注射玻璃化冷冻保存

表达绿色荧光蛋白基因的花鲈胚胎干细胞株的建立及其体外分化被引量：2: 2006年; 以带有绿色荧光标记的基因（pCMV-EGFP）为报告基因，用Genejammer、Genejuice和Metafeetene三种脂质体介导花鲈胚胎干细胞（IJES1）的基因转移。实验发现，Genejammer介导的细胞转化效率最高，高达27．3％，其余分别为12．1％和5．3％。转移绿色荧光蛋白（GFP）基因的IJES1细胞经过药物筛选和单克隆化培养，获得了表达GFP基因的阳性克隆细胞株，经PCR对GFP阳性细胞株的基因组DNA及提取的RNA扩增，获得了目的祭带，证实了GFP基因已经整合到LIES1细胞的基因组中，并获得了正常的表达。通过体外诱导，GFP阳性细胞能够分化为神经细胞、肌肉细胞、成纤维细胞等，用悬滴法培养获得了GFP阳性细胞的拟胚体，证实了经过长期的药物筛选后，LJES1细胞仍然保持着发育的多能性。这一研究，为进一步利用海水鱼类胚胎干细胞进行遗传操作及基因工程的研究提供了方法上的探索。; 叶寒青陈松林刘洋刘洋; 关键词：脂质体绿色荧光蛋白胚胎干细胞体外分化

花鲈胚胎干细胞移植及嵌合体的构建被引量：4: 2006年; 旨在通过花鲈胚胎干细胞（LJESl）移植构建嵌合体，证实LJES1细胞的体内分化能力和发育全能性。采用脂质体介导法将线性化pCMV-EGFP质粒导入到长期培养的LJES1细胞内，细胞绿色荧光蛋白（GFP）的表达率为5％～10％，以此为供体，通过显微注射方法把20—50个LJES1细胞移植到花鲈囊胚中，共移植囊胚478枚，获得了20枚表达GFP的嵌合体胚胎，其中的15枚胚胎发育成鱼苗。荧光显微观察和PCR检测显示了LJES1细胞可在宿主胚胎内片状嵌合和单细胞分散嵌合，嵌合部位可分布于胚体的三个胚层；同时也证明GFP是一种优良的遗传标记。本实验结果为证实LJES1细胞的发育全能性提供了有力证据。; 沙珍霞刘洋陈松林叶寒清田永胜孟亮唐启升; 关键词：细胞移植显微注射嵌合体

大菱鲆脾脏cDNA文库构建、EST序列分析与免疫抗病相关基因的筛选被引量：6: 2009年; 以大菱鲆脾脏为材料,构建cDNA文库,通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析,共获得3 656个大菱鲆脾脏表达序列标签(EST)。经与GenBank数据库的序列比对后发现,1 891个EST代表了149个已知基因,其余1 765个EST为未知序列。这149个基因大致可分为6类:9个为细胞结构类(6.0%);26个为代谢类(17.5%);45个为细胞防御/免疫类(30.2%);43个为基因/蛋白质表达类(28.9%);16个为细胞信号转导/细胞交流类(10.7%);10个无法明确分类(6.7%)。鉴定的与免疫抗病相关重要基因主要有:CC/CXC趋化因子;主要组织相容性复合体(MHC)class I;αC3补体;天然杀伤细胞增强因子(NKEF);胸腺素β-4/β-12;干扰素诱导蛋白G ig1;白介素8受体;STAT4;热激蛋白70/90等。; 孟亮陈松林刘洋; 关键词：大菱鲆 CDNA文库表达序列标签免疫相关基因

花鲈胚胎干细胞移植及嵌合体的构建: 本文采用脂质体介导法将线性化pCMV-EGFP质粒导入到长期培养的LJES1细胞内,细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达率为5～10﹪,以此为供体,通过显微注射方法把20～50个LJES1细胞移植到花鲈囊胚中,共移植囊胚47...; 沙珍霞刘洋陈松林叶寒清田永胜孟亮唐启升; 关键词：细胞移植; 文献传递

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刘洋