搜索到85篇“ LANOSTEROL“的相关文章
大肠杆菌羊毛甾醇合成途径的构建与优化
2023年
三萜类化合物是一类具有高附加值的次生代谢产物,羊毛甾醇是其生物合成的重要骨架化合物。为了在大肠杆菌中构建羊毛甾醇合成途径,将酵母来源的鲨烯合酶,荚膜甲基球菌来源的鲨烯环氧酶和氧化鲨烯环化酶分别克隆到载体pET28a(+)和pCDF-DUET-1中,共转入大肠杆菌BL21(DE3)底盘细胞,获得了羊毛甾醇生产菌株BT-tSSE-DXOSC。通过过表达甲基赤藓糖醇磷酸(2-C-methyl-D-erythrito-4-phosphate, MEP)途径关键酶1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶和法尼基焦磷酸合酶,增加了前体供应,使羊毛甾醇产量达2.39 mg/L,较优化前提高了2.1倍。通过发酵条件优化,确定了最优pH为7.5,诱导剂IPTG浓度0.5 mmol/L,诱导温度30℃,获得羊毛甾醇产量为5.12 mg/L,较初始条件提高了1.1倍。该研究首次构建了产羊毛甾醇的大肠杆菌工程菌株,为以羊毛甾醇为中间体的三萜类物质生物合成及相关代谢途径的研究搭建了平台。
胡苗苗陆震鸣罗志珊李心阳徐国强李会史劲松许正宏
关键词:大肠杆菌三萜类化合物
油酸对灵芝液态深层发酵合成羊毛甾醇代谢流分布的影响
2023年
通过代谢通量方法在3L搅拌式发酵罐上研究了油酸对灵芝液态深层发酵代谢终产物羊毛甾醇代谢流分布的影响。结果表明,在灵芝的液态深层发酵过程中,添加油酸使合成羊毛甾醇的代谢通量提高45.29%;副产物麦角甾醇的含量由3.84 mg/g降低至0.02 mg/g;羊毛甾醇合成途径(LP)、三羧酸循环(TCA)、磷酸戊糖途径(PP)和糖酵解途径(EMP)的代谢通量比对照组分别提高了29.09%、14.52%、12.22%和2.11%。因此,添加油酸能够加强灵芝液态深层发酵过程中的整体代谢流分布,减少副产物麦角甾醇的积累,提高羊毛甾醇的代谢流量。该研究为下一步灵芝液态深层发酵中灵芝三萜得率的提高奠定研究基础。
冯杰刘艳芳颜梦秋唐传红周帅张劲松
关键词:灵芝液态深层发酵油酸代谢流分析麦角甾醇
Inhibitory effect of lanosterol on cataractous lens of cynomolgus monkeys using a subconjunctival drug release system Keke被引量:2
2022年
Background:To evaluate the effect of lanosterol on cataractous lens of cynomolgus monkeys using a subconjunctival drug release system.Methods:Nine elder cynomolgus monkeys were used,consisting of three monkeys without cataract as controls,three monkeys with naturally occurring cortical cataract,and three monkeys with nuclear cataract as intervention groups.Nanoparticulated thermogel with lanosterol and fluorescein was administered by subconjunctival injection in the monkeys with cataract.Fluorescence changes of injected thermogel and cataract progression were observed.Lanosterol concentration in aqueous humor,solubility changes in lens proteins,and oxidative stress levels were analyzed in the lenses of the control and intervention groups.Results:Injected thermogel showed decreased fluorescence during follow up.Lanosterol concentration in aqueous humor increased in the first 2 weeks and then gradually decreased,which was in accordance with the changes in cortical lens clarity.However,lenses with nuclear opacification showed little change.In the cortical region of lenses with cortical cataract,solubility ofα-crystallin was significantly increased after administration of lanosterol,as well as the reduction of oxidative stress.Conclusions:We demonstrated the effect of lanosterol on cataract progression based on in vivo models of primates.Lanosterol showed a short-term and reliable reversal effect on reducing cataract severity in cortical cataract in the early stages,possibly due to the increase in the solubility of lens proteins and changes in the oxidative stress status.Lanosterol administration using subconjunctival drug release system could be a promising nonsurgical approach for future clinical studies of cataract prevention and treatment.
ZhangWenwen HeYu DuYugui ZhouXiaokang WuJie ZhuXiangjia ZhuKang ZhangYi Lu
关键词:LANOSTEROLCATARACTLENSMONKEYS
羊毛固醇合成酶抑制剂对KCs细胞分化和凋亡的影响
2022年
目的探究单独应用羊毛固醇合成酶抑制剂(RO)或联合胆固醇(CH)刺激皮肤角质形成细胞(KCs)后对其分化及凋亡的影响。方法RO单独或联合CH于KCs共培养不同时间后,加入Ca^(2+)(1.8 mmol/L)处理1d,Western blot法分析KCs的分化相关蛋白角皮蛋白(INV)和兜甲蛋白的表达;RO单独或联合CH与KCs共培养不同时间后,流式细胞术检测KCs细胞凋亡变化和Western blot法验证凋亡蛋白Bax和Bcl-2表达。结果RO下调KCs,Ca^(2+)诱导的分化标志蛋白INV的表达,对Loricrin表达抑制作用较弱,而CH没有表现出对RO的拮抗效应;RO诱导KCs细胞凋亡并呈时间依赖性,CH能够拮抗RO对KCs的诱导凋亡作用;RO单独应用时细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达均受到抑制,联合CH应用能部分拮抗RO对Bcl-2表达抑制作用,对Bax的表达抑制无显著影响;RO能时间依赖性降低Bcl-2/Bax的比值,CH能部分减弱RO对Bcl-2/Bax比值的影响。结论RO可能通过下调Loricrin、Bcl-2的表达,进而抑制KCs分化和诱导KCs细胞凋亡。
刘莉顾亚男李名聪黄依璇张胜权
关键词:胆固醇角质形成细胞细胞分化
HPLC法测定羊毛甾醇含量研究被引量:1
2021年
目的:建立羊毛甾醇的含量测定方法。方法:实验采用InfinityLab Poroshell 120 Ec-C_(18)(4.6×150 mm,5μm)色谱柱;以甲醇为流动相,流速为1.0 mL·min^(-1);检测波长为210 nm;进样量为10μL;柱温35℃。结果:羊毛甾醇峰与其他杂质峰可达到完全分离,检测限为0.008 mg·mL^(-1);浓度在0.04849~0.1131 mg·mL^(-1)范围内与峰面积线性关系良好(相关系数为:1.0000);重复性良好,RSD为1.2%;改用GL Sciences Intertsil ODS-SP C_(18)(4.6×150 mm,5μm)色谱柱测定对照品峰面积RSD为0.30%。结论:本研究建立的方法快速简便,灵敏度高,专属性强,重现性好,可用于羊毛甾醇原料的含量测定。
钱绍安梁云臧广喜陈钧邓瑞云
关键词:高效液相色谱法
暴马桑黄羊毛甾醇14α-脱甲基酶基因的克隆、序列分析及原核表达被引量:3
2021年
为深入了解暴马桑黄三萜合成途径的调控机理,基于前期测得的转录组数据,同时结合基因组数据(GenBank登录号为LNZH00000000.2),筛选得到暴马桑黄羊毛甾醇14α-脱甲基酶(lanosterol 14-alpha-demethylase,LSD)基因序列,并设计特异引物。以暴马桑黄菌丝体总RNA反转录得到的cDNA为模板,采用PCR技术克隆得到LSD基因cDNA序列全长,命名为SbLSD1(登录号为MN640689)。序列分析结果表明,SbLSD1基因cDNA序列全长1 746 bp,编码581个氨基酸,分子量为65.96 ku,没有信号肽,在53~75位氨基酸序列之间含有一个跨膜螺旋结构,属于P450超家族成员。系统发育分析表明,暴马桑黄LSD1蛋白和灵芝LSD蛋白同源性最高。将SbLSD1基因cDNA序列构建到原核表达载体pET-32a上,获得重组质粒pET-32a-SbLSD1,然后将其转入Escherichia coliBL21中进行SbLSD1蛋白诱导表达。SDS-PAGE结果显示,SbLSD1基因成功表达出蛋白,并在63~75 ku出现与预期大小一致的蛋白条带。通过对SbLSD1基因的克隆及表达分析,为进一步研究该基因在暴马桑黄三萜生物合成过程中的功能奠定基础。
刘增才王世新孙婷婷曲晓磊邹莉
关键词:基因克隆生物信息学分析原核表达
牛樟芝羊毛甾醇合成酶基因AcLSS的克隆和表达分析被引量:2
2021年
为探究牛樟芝羊毛甾醇合成酶的合成机制,对牛樟芝的一个羊毛甾醇合成酶基因进行克隆,将其命名为AcLSS,然后利用生物信息学软件对其理化性质进行预测,并对其表达情况进行初步分析。结果表明:AcLSS基因的开放阅读框为2205 bp,编码734个氨基酸;该基因含有8个内含子,9个外显子;AcLSS蛋白存在由14个氨基酸“KGAWPFSTKTQGYT”和6个氨基酸“VSDCTG”组成的保守特征序列,并且包含一个16个氨基酸组成的OSC保守结合域“KACNFLISKQRSDGGW”。分子系统进化分析显示,AcLSS蛋白与绣球菌(XP_027617410.1)的LSS蛋白亲缘关系最近;表达谱分析显示,碳源添加物中以甘露醇的诱导表达力最高、氮源添加物中以番茄浸粉的诱导表达力最佳。
郑元罗娅娜罗玛妮娅张璋王毅
关键词:基因克隆生物信息学
羊毛固醇合成酶抑制剂RO对KCs细胞增殖的影响被引量:2
2021年
目的研究羊毛固醇合成酶抑制剂(RO)单独或联合胆固醇(CH)使用对皮肤角质形成细胞(KCs)细胞增殖及细胞周期的影响。方法 RO不同剂量作用KCs一定时间,采用MTS比色法检测KCs细胞增殖的变化;使用一定浓度的RO单独或联合CH作用KCs不同时间,使用MTS比色法和流式细胞仪检测记录KCs细胞增殖和细胞周期的变化;单独使用相同浓度RO或联合CH经过不同时间刺激KCs后通过蛋白质免疫印迹法对细胞周期蛋白CyclinB1、CyclinE表达水平进行分析。结果 RO抑制KCs细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性;联合使用CH降低RO对KCs的增殖抑制作用;RO可时间依赖性增加KCs细胞周期在G1期比例,联合使用CH缓慢增加KCs周期在G1期比例;RO可时间依赖性降低细胞周期调控蛋白CyclinB1、CyclinE的表达,联合使用CH部分拮抗RO下调CyclinE,并具有时间效应,而CyclinB1的表达没有受到明显的影响。结论 RO可能通过影响CyclinB1、CyclinE的表达使KCs细胞周期G1期阻滞进而抑制KCs增殖。
刘莉顾亚男周宏李名聪罗欣张胜权
关键词:CH细胞增殖细胞周期蛋白
羊毛甾醇对X射线照射后大鼠晶状体混浊形成的影响及机制被引量:1
2020年
目的探讨羊毛甾醇对X射线照射后大鼠晶状体混浊形成的影响及机制。方法制作大鼠晶状体体外培养模型,经X射线照射0、2、4、8 Gy后培养7 d,分为0 Gy组、2 Gy组、4 Gy组、8 Gy组,同时设立8 Gy-DMSO组和8 Gy-羊毛甾醇(DMSO预溶)组,观察和定量分析晶状体混浊发生发展情况,并用BCA法测定0 Gy组、8 Gy组、8Gy-DMSO组和8 Gy-羊毛甾醇组各时点晶状体上皮细胞(LEC)中可溶性蛋白含量;体外培养的SRA01/04 LEC接受0、2、4、8 Gy X射线照射,照射后实验组立即加入40μmol/L羊毛甾醇(DMSO预溶),对照组加入等量的DMSO,培养72 h后BCA法测量总可溶性蛋白含量。结果0 Gy组体外培养至第7天晶状体仅发生轻度混浊。随X射线照射剂量增加,晶状体混浊出现时间越早,程度越重。与8 Gy组、8 Gy-DMSO组相比,羊毛甾醇组晶状体混浊时间延迟,晶状体可溶性蛋白减少量降低,但至第7天时晶状体混浊程度差异无统计学意义(P均>0.05)。人LEC在照射后3 d可溶性蛋白含量随照射剂量增加降低(P均<0.05);相同照射剂量下0Gy时对照组与羊毛甾醇组无统计学差异,其他剂量时羊毛甾醇组可溶性蛋白含量高于对照组(P均<0.05)。结论羊毛甾醇可抑制X射线照射诱导的大鼠晶状体混浊的形成,其机制可能通过降低晶状体可溶性蛋白的丢失实现。
石圆圆仇长宇聂闯宫玉波李雨心罗灵
关键词:白内障晶状体上皮细胞晶状体蛋白X射线
暴马桑黄SbLSD基因克隆及差异表达分析被引量:5
2020年
【目的】暴马桑黄是一种重要的药用资源,三萜是其发挥药用功效的主要成分,但是目前获取大量三萜仍然非常困难。通过对暴马桑黄三萜合成途径中的羊毛甾醇14α-脱甲基酶(lanosterol 14-alpha-demethylase,LSD)基因进行克隆及差异表达分析,以期深入了解暴马桑黄三萜合成的调控机理,进而提高三萜产量。【方法】采用PCR扩增得到LSD基因cDNA序列全长,利用生物信息学软件对该基因编码的氨基酸序列进行分析;采取同源重组方法构建原核表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达,SDS-PAGE检测;qRT-PCR技术分析LSD基因在暴马桑黄不同发育阶段转录水平差异。【结果】暴马桑黄LSD基因cDNA全长1662 bp,编码553个氨基酸,相对分子量为62.26 kDa,命名为SbLSD(登录号为MN864180);跨膜区和亚细胞定位预测显示SbLSD蛋白是在内质网和高尔基体发挥作用的跨膜蛋白;系统进化树结果表明暴马桑黄和灵芝的LSD蛋白同源性最高,符合物种经典分类;SDS-PAGE结果证实在62.26 kDa附近出现目的蛋白条带,说明所获得的基因可以成功表达出蛋白;从荧光定量分析结果中可以看出SbLSD基因转录水平在不同发育阶段有差异性,并且在子实体阶段该基因转录水平最高,与羊毛甾醇合成的基因变化规律相吻合。【结论】通过对SbLSD基因的分子鉴定解析,为进一步揭示该基因在暴马桑黄三萜合成途径中的功能奠定基础。
刘增才王世新孙婷婷曲晓磊邹莉
关键词:基因克隆生物信息学分析

相关作者

巫瑞波
作品数:18被引量:4H指数:2
供职机构:中山大学
研究主题:酶催化 稠环 MD DFT 倍半萜类
郑学忠
作品数:20被引量:122H指数:8
供职机构:广西中医药研究所
研究主题:化学成分 化学成分研究 前胡 地枫皮 中药
黄平
作品数:37被引量:239H指数:12
供职机构:广西中医药研究院
研究主题:化学成分研究 化学成分 中药 水半夏 药材
杨敏
作品数:6被引量:62H指数:4
供职机构:广西中医药研究所
研究主题:两面针 伪品 生药鉴别 地枫皮 及其伪品
赖茂祥
作品数:131被引量:803H指数:15
供职机构:广西中医药研究院
研究主题:两面针 挥发油 化学成分 苦丁茶 化学成分研究