杨会强
所属机构: 成都生物制品研究所有限责任公司 所在地区: 四川省 成都市 研究方向: 医药卫生 发文基金: 国家高技术研究发展计划
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曾献武 作品数:27 被引量:38 H指数:4 供职机构:成都生物制品研究所有限责任公司 研究主题:乙型脑炎病毒 E蛋白 登革病毒 神经毒力 嵌合病毒 刘杰 作品数:34 被引量:76 H指数:4 供职机构:四川大学计算机学院 研究主题:乙型脑炎病毒 狂犬病疫苗 神经毒力 VERO细胞 乙型脑炎减毒活疫苗 刘莉娜 作品数:14 被引量:15 H指数:2 供职机构:成都生物制品研究所有限责任公司 研究主题:E蛋白 乙型脑炎病毒 登革病毒 神经毒力 嵌合病毒 孙艳 作品数:17 被引量:29 H指数:3 供职机构:成都生物制品研究所有限责任公司 研究主题:狂犬病疫苗 VERO细胞 乙型脑炎减毒活疫苗 PM 病毒滴度 汪伟 作品数:13 被引量:16 H指数:3 供职机构:成都生物制品研究所有限责任公司 研究主题:嵌合病毒 乙型脑炎减毒活疫苗 登革病毒 乙脑 乙型脑炎病毒
生物制品中逆转录酶活性检查假阳性结果的原因分析及对策 被引量:2 2012年 目的对造成生物制品中逆转录酶活性检查假阳性结果的原因进行分析和讨论,并探讨相应的对策。方法查阅生物制品中逆转录酶活性检查方法的相关文献,并结合实际工作中的检定结果进行分析总结。结果多种因素可造成逆转录酶活性检查结果的假阳性,可针对这些原因采取相应的策略。结论逆转录酶活性检查方法的进一步完善,对于生物制品的质量控制具有十分重要的意义。 李竹石 杨会强 李玉华关键词:逆转录病毒 逆转录酶 寨卡病毒E蛋白第三结构域的可溶性表达及多克隆抗体的制备 被引量:1 2019年 目的原核表达并纯化寨卡病毒(Zika virus)E蛋白第三结构域(ZK-EⅢ)重组蛋白,并制备其多克隆抗体。方法 PCR扩增ZK-E Ⅲ序列,经双酶切后将其插入原核表达载体p ET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-ZKE Ⅲ,转化至大肠埃希菌(E. coli)Rosetta2(DE3),经IPTG诱导,表达的重组蛋白经亲和层析和阴离子交换层析纯化后,免疫家兔,制备ZK-E Ⅲ多克隆抗血清,进行Western blot鉴定后,ELISA法检测该抗血清效价。结果经PCR及测序鉴定证明原核表达质粒pET-ZKE Ⅲ构建正确,表达的重组蛋白相对分子质量约31 000,主要以可溶性形式存在,表达量占菌体总蛋白的60%;用纯化的重组蛋白免疫家兔后,获得的血清特异性良好,血清效价为1∶51 200。结论 ZKE Ⅲ蛋白在E. coli中以可溶性形式表达,制备的抗血清特异性好,效价高,具有用于寨卡病毒诊断和进行重组亚单位疫苗开发的潜力。 何婷 杨欢 范凤鸣 刘杰 牟建超 孙艳 陈智 代云见 曾献武 杨会强关键词:原核表达 多克隆抗体 乙型脑炎病毒E264位点回复突变对疫苗安全性的影响 被引量:1 2018年 目的通过反向遗传学技术,构建乙型脑炎病毒减毒疫苗株SA14-14-2囊膜蛋白(envelope protein,E蛋白)第264位氨基酸的回复突变株,并分析该位点突变对疫苗株小鼠毒力的影响。方法通过融合PCR扩增含基因组第1 769核苷酸位点回复突变的基因片段(T→G),替换SA14-14-2相应区域,使得编码E264位点的氨基酸位点由SA14-14-2的组氨酸(H)回复突变成强毒株SA14的谷氨酰胺(Q),将该回复突变株命名为r JEV264(H→Q),通过测定蚀斑大小和一步生长曲线,分析r JEV264的增殖特征;通过测定该突变株的昆明种小鼠脑内神经毒力、皮下感染入脑能力、腹腔感染入脑能力,分析E264位点回复突变后对小鼠毒力的影响。结果成功构建了回复突变株r JEV264,该突变株蚀斑大小与SA14-14-2相似,在PHK细胞上的增殖特征与SA14-14-2没有明显差异。r JEV264对小鼠有可检测的脑内神经毒力,毒力为5.51 lg PFU/LD50,但无论是皮下注射还是腹腔注射,都没有使小鼠发病。结论在分子水平证明了E264位点是影响乙脑减毒活疫苗安全性的关键位点之一,E264位点的回复突变增强了SA14-14-2的小鼠脑内神经毒力,但没有增强小鼠神经侵袭力。 刘莉娜 孙艳 范凤鸣 杨欢 牟建超 陈智 刘俐 刘杰 曾献武 杨会强关键词:乙型脑炎减毒活疫苗 回复突变 神经毒力 乙型脑炎减毒活疫苗(SA14-14-2株)的纯化 2015年 目的建立纯化乙型脑炎减毒活疫苗(SA14-14-2株)的方法。方法应用超滤浓缩和分子筛凝胶柱层析纯化乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)SA14-14-2病毒液,检测其病毒滴度、原代地鼠肾细胞残留蛋白含量、牛血清白蛋白残留量、庆大霉素残留量,并进行小鼠脑内致病力试验、乳鼠传代返祖试验、异常毒性试验,制备纯化冻干疫苗,进行热稳定性试验。结果纯化后的JEV病毒滴度高于7.0 lg PFU/ml,平均回收率为23%;牛血清白蛋白残留量、庆大霉素残留量及安全性试验均符合《中国药典》三部(2010版)相关规定,去除了约95%的原代地鼠肾细胞残留蛋白;制备的冻干疫苗及热稳定性试验中的病毒滴度均高于5.7 lg PFU/ml,且热稳定性试验中病毒滴度下降未超过1.0 lg,符合《中国药典》三部(2010版)规定。结论建立了乙型脑炎减毒活疫苗(SA14-14-2株)纯化工艺,但病毒回收率较低,不适宜规模化生产,对乙型脑炎病毒减毒活疫苗质量控制具有指导意义。 刘杰 孙艳 刘辉 康庄 毛川成 刘莉娜 陈智 牟建超 赵宇 刘俐 杨会强 李玉华关键词:乙型脑炎减毒活疫苗 SA14-14-2 纯化 乙型脑炎病毒E蛋白毒力关键位点的正向验证 被引量:3 2018年 目的将乙型脑炎野毒株SA14囊膜蛋白(envelope,E)氨基酸残基107位点(E107)和138位点(E138)突变为乙型脑炎减毒株SA14-14-2的相应位点,正向分析两个氨基酸位点突变在乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)减毒中的作用。方法通过融合PCR方法分别扩增含有E107(1296-T)、E138(1389-A)、E107+138(1296-T/1389-A)突变位点的PCR片段,KasⅠ和BglⅡ酶切后替换乙型脑炎强毒SA14的嵌合病毒SA14-14-2/SA14的相应区域,构建3个突变株病毒的全长克隆,转染BHK21细胞获得突变株病毒。测定并比较3个突变株和嵌合病毒SA14-14-2/SA14、疫苗株SA14-14-2的蚀斑大小及细胞增殖特征、小鼠脑内神经毒力、小鼠皮下感染入脑能力,分析E107、E138位点突变对JEV的减毒作用。结果测序结果表明成功构建了3株突变株病毒,其中E107单位点突变对小鼠脑内神经毒力和皮下感染入脑能力无显著改变,蚀斑形态和细胞增殖能力也无明显变化。E138单位点突变及E138和E107双位点突变使病毒脑内神经毒力和皮下感染入脑能力急剧降低,其中E138和E107双位点突变使病毒皮下感染入脑能力完全消失,并且E138单位点突变以及E138和E107双位点突变病毒蚀斑较疫苗株SA14-14-2和嵌合病毒SA14-14-2/SA14明显偏小,但增殖能力有明显升高。结论 E138位点突变对JEV SA14的减毒起关键作用;在E138位点突变的前提下,E107位点与E138位点有显著的协同作用。 范凤鸣 刘莉娜 孙艳 牟建超 陈智 杨欢 刘俐 刘杰 曾献武 杨会强关键词:乙型脑炎病毒 E蛋白 一种乙脑/黄热嵌合病毒及其制备方法和应用 本发明公开了一种乙脑/黄热嵌合病毒的cDNA克隆,其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。本发明还公开了乙脑/黄热嵌合病毒及其应用,以及一种预防黄热病的疫苗。本发明嵌合病毒Chimeri-JYF的毒性小,免疫保护作用好... 杨会强 汪伟 何婷 刘莉娜 赵宇 刘俐 曾献武登革病毒1型E蛋白的原核细胞表达及多克隆抗体的制备 被引量:1 2013年 目的构建登革病毒1型(DENV-1)E蛋白的原核细胞表达载体并进行原核细胞表达,并制备其多克隆抗体。方法利用聚合酶链反应(PCR)扩增DENV-1E蛋白序列,经酶切后将其插入原核细胞表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32-D1-E。重组质粒转化E.Coli Rosetta(DE3)感受态细胞,目的蛋白经异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,纯化后采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步分析蛋白表达情况,并用纯化后的表达蛋白免疫家兔,制备该蛋白的多克隆抗血清,用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)检测抗体的效价,Western blot检测抗体的特异性。结果成功构建了pET-32-D1-E原核细胞表达重组质粒,DENV-1E蛋白获得高效表达;纯化后的重组蛋白免疫家兔获得的特异性抗血清效价为1∶25 600,Western blot证实其特异性良好。结论成功构建了DENV-1E蛋白的原核细胞表达载体,并制备了可用于DENV快速检测的高效多克隆抗体。 汪伟 丁显平 杨会强 李竹石 谭帅 赵宇 刘莉娜 谭昌耀 曾献武关键词:登革病毒 原核细胞 盐生杜氏藻(6-4)光裂合酶基因在Pichia pastoris中的表达和功能研究 盐生杜氏藻(Dunaliella salina)是一种单细胞真核绿藻,它不仅能在高盐环境中生存,而且具有较强的抗紫外特性.该文在已克隆到盐生杜氏藻(6-4)光裂合酶基因(Ds64PHR)的基础上,应用巴斯德毕赤酵母(Pi... 杨会强关键词:巴斯德毕赤酵母 紫外线照射 蛋白表达 文献传递 酿酒酵母GPDH1基因表达载体pPIC3.5K-ScGPD的构建及其在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量:1 2004年 将酿酒酵母3 磷酸甘油脱氢酶基因GPDH1的编码序列构建到表达载体pPIC3.5K中,利用电转化法将构建好的表达载体转入巴斯德毕赤酵母中,利用含有G418的YPD平板筛选到两个阳性转化子,通过分子生物学及外源蛋白表达实验证明,酿酒酵母3 磷酸甘油脱氢酶基因GPDH1已经整合到巴斯德毕赤酵母的基因组上,并且得到了预期的表达. 杨会强 乔代蓉 马梵辛 李茜 徐辉 唐嵩 曹毅关键词:巴斯德毕赤酵母 3-磷酸甘油脱氢酶 一种疫苗保护剂、狂犬病疫苗及其制备方法 本发明提供了一种疫苗保护剂,它包含以下百分含量的成分:二糖50-80份、人血白蛋白20-30份、明胶10份、氨基酸1.5-1.65份。本发明还提供了一种狂犬病疫苗及其制备方法。本发明疫苗保护剂可有效增强狂犬病疫苗冻干剂的... 李玉华 吴永林 毛川成 刘杰 赵宇 吴曼萍 牟建超 刘蓉 杨会强 孙艳