国家自然科学基金(30400321)
- 作品数：4 被引量：24H指数：2
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- 猪圆环病毒2型BF株感染性分子克隆系列突变株的构建被引量：2
- 2007年
- 王芳盖新娜郭鑫杨汉春
- 关键词：猪圆环病毒2型断奶后多系统衰弱综合征突变株F株PMWS
- 稳定表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白P815细胞系的建立被引量：2
- 2008年
- 应用脂质体介导的基因转染方法,将表达猪圆环病毒2型(porcine circovirus,PCV2)衣壳蛋白的重组质粒pcDNA3.1-orf2转染P815细胞,筛选G418抗性单克隆细胞,并经PCR、RT-PCR和间接免疫荧光鉴定,随后对目的蛋白表达稳定性进行了检测。结果表明PCV2orf2基因已经整合进P815细胞基因组DNA中,ORF2编码的衣壳蛋白在获得的阳性P815细胞中稳定表达,建立了稳定表达PCV2衣壳蛋白的P815细胞系。该细胞系的建立为PCV2新型疫苗的研究提供了必要的实验材料,同时也可为其他病毒疫苗的研究提供有价值的参考。
- 宋勤叶杨汉春郭鑫盖新娜
- 关键词：CTL杀伤活性
- 猪圆环病毒2型ORF2重组蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：8
- 2007年
- 利用已构建的基因工程重组菌BL21(DE3)表达猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2编码的结构蛋白,经切胶纯化后作为免疫原。采取抗原量依次递增的免疫方式免疫8周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选,有限稀释法进行亚克隆3次,最终获得4株稳定分泌抗PCV2 ORF2重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为D2A1、H4G2、B10H10和G1G2。经ELISA检测,其腹水效价分别达到1∶2.048×107、1∶2.56×106、1∶1.28×106、1∶2.56×106。亚型鉴定4株单克隆抗体均属IgG2a亚型,其轻链均为κ链。Western blot鉴定表明获得的4株单克隆抗体均能特异性的识别43 kD的重组PCV2 ORF2蛋白。在间接免疫荧光试验中,单抗D2A1株的反应为阴性,H4G2、B10H10和G1G2反应为阳性,表明后3株单抗能够识别天然的PCV2 ORF2蛋白表位。本试验为进一步研究PCV2ORF2基因的功能及建立快速准确的诊断PCV2的方法奠定了基础。
- 魏巍杨汉春郭鑫陈艳红查振林
- 关键词：猪圆环病毒2型融合蛋白单克隆抗体
- 北京地区规模化猪场猪圆环病毒2型感染的血清学调查与分析被引量：12
- 2007年
- 赵荣茂杨汉春郭鑫陈艳红查振林
- 关键词：断奶仔猪多系统衰竭综合征血清学调查规模化猪场致病病原PCV2
