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hNET基因重组腺病毒载体构建和体外表达被引量：4: 2008年; 目的以复制缺陷的腺病毒为载体,用细菌内同源重组法构建含有人的去甲肾上腺素转运子(human neurotransmitter transporter,hNET)基因的腺病毒载体。方法利用限制性内切酶KpnⅠ+XbaⅠ从pCMV5质粒中切下目的基因hNET,亚克隆至经同样酶切的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV,形成重组穿梭质粒pAdtrack-CMV-hNET,PmeⅠ酶切线性化后,与pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得含目的基因的重组体质粒Ad-hNET,PacⅠ酶切后用脂质体Lipofectamine2000转染HEK293细胞,包装成重组体腺病毒。采用PCR技术和Western Blotting对重组体腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒pAdTrack-CMV中带有绿色荧光蛋白报告基因检测表达,经过扩增和纯化,测定病毒滴度。结果测序结果证明hNET序列的正确,PCR、PacⅠ酶切电泳和Western Blotting证实腺病毒重组质粒Ad-hNET构建成功。扩增纯化后测定重组病毒Ad-hNET的滴度为1.2×1010pfu/mL。结论成功构建了能表达hNET基因的重组腺病毒载体,为肿瘤的靶向治疗提供前期的研究工作。; 贾志云欧晓红魏海燕邓候富黄蕤王金蓉张仕琼; 关键词：腺病毒载体同源重组

腺病毒介导的DPC4基因转染对胰腺癌细胞的影响被引量：6: 2004年; 目的　探讨以腺病毒 (Ad5 )为载体转染 DPC4基因在胰腺癌基因治疗中的作用。方法　应用构建的DPC4 - Ad5进行体内体外转染 ,分别观察 DPC4 - Ad5对胰腺癌细胞 (HS76 6 T,Pc- 3)及裸鼠皮下种植胰腺癌的影响。用流式细胞仪检测目的基因表达 ,并检测细胞周期。结果　 DPC4 - Ad5对胰腺癌细胞的生长抑制率在第 4天可达30 %。Pc- 3- DPC4 - Ad5 (PD)组细胞生长最慢 ,HS76 6 T(H)和 HS76 6 T- Ad5 (HA)组生长最快 ,与 Pc- 3(P)、Pc- 3- Ad5(PA)、HS76 6 T(H)、HS76 6 T- DPC4 - Ad5 (HD)组相比均有显著性差异 (P<0 .0 5 )。PD组和 HD组细胞增殖受抑 ,与对照组相比有显著性差异 (P<0 .0 5 )。转染后 ,细胞周期出现阻滞 ,G1 期细胞明显增加 ,Pc- 3由 5 8% (P组 )增至80 % (PD组 ) ,S期细胞则由 2 6 %降至 11.7% ;HS76 6 TG1 期细胞则由 5 8% (H组 )左右增至 6 8% (HD组 ) ,S期细胞则由 31%减少至 2 1% ;两组相比有显著性差异 (P<0 .0 5 )。但凋亡未见明显增加。目的基因表达检测也表明 ,转染DPC4 - Ad5后 ,细胞的荧光强度明显高于未转染者。两种细胞株的裸鼠种植瘤经 DPC4 - Ad5治疗后 ,HS76 6 T空载体 (对照 ,HA)组体积为 (136 3.90± 4 87.6 5 ) mm3,HS76 6 T治疗 (HD)组为 (4 2 5 .90± 32 4 .6 8) mm3,Pc-; 冯燮林张肇达田聆魏于全; 关键词：胰腺癌腺病毒基因治疗免疫组织化学细胞周期

肾脏病临床循证病案: 循证医学在国内方兴未艾，特别是在心血管系统、神经系统等领域发展较快，而在肾病领域中尚需广泛开展。为此，本文结合实际临床工作中所遇见的病例，介绍如何进行在肾病领域进行循证诊断与治疗。; 樊均明李孜; 关键词：肾脏病循证医学病例分析

人血管内皮生长因子受体2胞外段在毕赤氏巴斯德酵母中的表达(英文): 2006年; 目的探讨在毕赤氏巴斯德酵母(PICHIA PASTORIS)中高效表达有真核蛋白结构的人血管内皮生长因子受体2胞外段(HEVEGFR-2)的可行性。方法从重组质粒PORF-HEVEGFR-2经PCR获全长HEVEGFR-2 DNA,构建重组毕赤氏巴斯德酵母分泌性表达载体,电转化PICHIA PASTORIS X-33。用抗药性表型和甲醇诱导筛选出重组HEVEGFR-2蛋白表达阳性的转化子(X-33.HEVEGFR-2)。结果SDS-PAGE显示。获分子量约108 KDA的重组HEVEGFR-2蛋白。约占X-33-HEVEGFR-2分泌性表达蛋白总量的45%。该重组蛋白在表达上清中的质量浓度达80 MG/L。其HEVEGFR-2部分分子量约106 KDA。WESTERNBLOT证实,该蛋白能特异地与大鼠抗小鼠VEGFR-2单克隆抗体结合。结论毕赤氏巴斯德酵母能高效表达有真核蛋白结构的人血管内皮生长因子受体2胞外段蛋白全段。; 左秋田聆侯健梅王永生文艳君李炯魏于全; 关键词：基因表达

家族性及散发性精神分裂症患者脑表面积的差异及其与COMT基因多态性的相关性被引量：1: 2015年; 目的分析精神分裂症（sehizophTenia，SZ）的脑表面积损伤情况及其与儿茶酚胺氧位甲基转移酶（catechnol-O-methyltransferase，COMT）基因的相关性，并探索家族性精神分裂症（familial patients with schizophrenia，FPS）和散发性精神分裂症（sporadic patients with schizophrenia，SPS）两亚型之间受损模式的差异。方法纳入98例首发及未治疗的SZ患者（58例SPS、40例FPS），78名正常对照。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态分析对受试者进行COMT基因分型。采集3．0T磁共振图像，应用Freesuffer软件分析sP和对照脑表面积的差异及其与COMT基因型的相关性。比较FPS、SPS和对照等3组的脑表面积。对多重比较结果进行Monte Carlo（P〈0．05）校正。结果SZ患者左前额叶和右枕叶脑区表面积减少，两组脑表面积与COMT基因型均无相关性。SPS患者左前额叶表面积低于FPS患者和对照；SPS患者右侧枕叶表面积低于对照。FPS与对照相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论SZ患者存在脑表面积损害，但与COMT基因型不相关。SPS患者受损大于FPS患者，提示两种SZ可能具有不同的发病机制。; 李寅飞邓伟王强李名立李娜雷威雷威李喆马小红刘协和; 关键词：精神分裂症家族史基因多态性儿茶酚胺氧位甲基转移酶

ctB和ure I双基因融合表达及其免疫特性分析被引量：9: 2006年; 目的构建霍乱毒素B亚单位(CtB)和幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(UreI)融合的原核表达质粒pET32a(+)ctB/ureI,并初步研究融合蛋白CtB/UreI的表达特性和免疫特性。方法PCR从pUC18ctB中克隆ctB基因,定向在pET32a(+)/ureI的ureI基因5′端插入ctB基因,构建ctB和ureI双基因原核表达质粒pET32a(+)ctB/ureI,转该质粒于E.coliBL-21(DE3),经酶切和序列分析鉴定工程菌。IPTG诱导表达,HP-His亲和层析纯化,SDS-PAGE和Gel-ProAnalizer4分析,重组蛋白免疫BALB/c小鼠。用Westernblot和ELISA分析重组蛋白的免疫特性。结果工程菌含完整的ctB和ureI基因,与相对应基因的序列同源性分别为100%。在22℃,1mmol/LIPTG诱导4h后,重组蛋白的表达占菌体总蛋白12%,亲和层析纯化后蛋白纯度为94.3%。Westernblot表明重组蛋白分别能与相应的抗体反应,该蛋白免疫小鼠后能产生相应的IgG抗体。结论成功构建了能表达CtB/UreI蛋白的大肠杆菌表达菌株。对融合蛋白表达和纯化后,初步证明了该重组蛋白有CtB和UreI的双特异反应原性和免疫原性,为研究新型幽门螺杆菌疫苗奠定了坚实的基础。; 王保宁杨晓芳施桥发李明远陈翠萍曹康李虹; 关键词：幽门螺杆菌霍乱毒素B亚单位免疫特性

磷酸二酯酶4抑制剂对丙烯醛诱导的大鼠气道黏蛋白分泌的影响被引量：1: 2008年; 目的探讨磷酸二酯酶4（PDFA）抑制剂YM976对丙烯醛诱导的大鼠气道黏蛋白高分泌的影响及其作用机制。方法将48只SD大鼠随机平均分为6组，其中4组以雾化吸人丙烯醛的方法制备气道黏液高分泌模型并分为不予YM976干预的丙烯醛模型组和制模期间给予低、中或高剂量YM976干预组；另2组中，1组为正常对照组；1组为YM976对照组。取各组大鼠肺组织，以阿辛蓝一过碘酸雪夫（AB—PAS）染色检测黏蛋白的表达，免疫组织化学染色和蛋白质印迹法检测黏蛋白Muc5ac蛋白表达，反转录PCR检测Muc5ac mRNA表达，并取支气管肺泡灌洗液（BALF），以酶联免疫吸附试验（ELISA）检测BALF上清液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、细胞因子诱导的中性粒细胞趋化物1（CINC-1）浓度。结果丙烯醛模型组和低、中、高剂量YM976干预组大鼠肺组织AB-PAS阳染面积（分别为23．65±2．86、22．63±2．12、16．34±1．72、5．03±0．72）、Muc5ac免疫组织化学染色积分吸光度值（分别为0．54±0．05、0．49±0．06、0．32±0．04、0．22±0．04）、Muc5ae蛋白表达积分吸光度值（分别为1．177±0．190、0．806±0．180、0．303±0．061、0．134±0．035）、Muc5ac mRNA表达积分吸光度值（分别为0．246±0．021、0．223±0．020、0．161±0．012、0．097±0．011）以及BALF中TNF-α浓度[分别为（96．77±2．31）、（87．65±2．75）、（73．56±2．62）、（52．23±2．79）μg/L]、CINC-1浓度[分别为（145．75±4．43）、（139．73±5．51）、（95．34±5．13）、（65．74±5．62）μg/L]均明显高于正常对照组[分别为4．38±0．32、0．12±0．02、0．058±0．024、0．061±0．006、（18．23±2．32）μg/L、（33．56±3．43）μg/L，均P〈0．05]，但中、高剂量YM976干预组均明显低于丙烯醛模型组（均P〈0．05）。结论PDE4抑制剂YM976可能通过抑制炎症趋化因子TNF-α、CINC-1的释放而抑制丙烯�; 王洵李继琼陈磊王海霞孙贝贝汪涛徐丹; 关键词：呼吸道黏膜黏蛋白类磷酸二酯酶抑制剂丙烯醛

地佐辛用于心房颤动射频消融术中疗效的观察被引量：1: 2015年; 目的观察地佐辛用于心房颤动射频消融术中的疗效。方法 2013年4月-7月随机选取心血管内科拟行心房颤动射频消融术患者45例,根据随机双盲原则分为地佐辛组（D组）、吗啡组（M组）。常规术前探视,记录患者生命体征以及术前疼痛评分、舒适度评分。两组患者于手术开始前30 min静脉分别给予地佐辛5 mg或吗啡5 mg镇痛,术中监测血压、心率、血氧饱和度、心电图和疼痛评分、舒适度评分,根据患者疼痛情况分次静脉给予对应组别用药2~3 mg,术毕记录手术时间,术后2、6、24 h随访患者,评估患者疼痛状况以及不良反应。结果两组患者在手术时间、术中疼痛评级指数、术中疼痛视觉模拟评分差异有统计学意义（P〈0.05）,术中及术后不良反应发生率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论地佐辛用于心房颤动射频消融术中镇痛效果优于吗啡,但仍然存在术后恶心、呕吐等不良反应,鉴于目前全身麻醉尚未能完全推行的情况下,地佐辛用于心房颤动消融术中镇痛可作为一种较理想的替代方案。; 李方舟魏小琼郑明霞曾义崔凯军; 关键词：地佐辛心房颤动射频消融疗效

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四川大学人类疾病生物治疗国家重点实验室

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