贵州医科大学医学科学研究所
- 作品数：15 被引量：18H指数：3
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- 硫氧还蛋白互作蛋白在肾缺血再灌注肾小管细胞损伤中的作用及机制
- 2017年
- 目的探讨硫氧还蛋白互作蛋白在肾急性缺血再灌注肾小管上皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法体外建立肾缺血再灌注肾小管上皮细胞HK-2损伤的模型并下调TXNIP的表达,流式细胞术检测细胞内ROS水平和细胞凋亡;RT-qPCR法检测TXNIP mRNA的表达。Western Blot法检测TXNIP等相关蛋白的表达。结果与正常对照组比较,OGD/R组ROS水平和细胞凋亡率明显升高(P<0.01),GPX4蛋白表达明显降低(P<0.01);与OGD/R组比较,TXNIP siRNA组TXNIP蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.01),细胞内ROS水平和细胞凋亡率明显降低(P<0.01),GPX4蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论下调TXNIP可以抑制肾IRI引起的肾小管上皮细胞凋亡,可能机制是激活GPX4和减少ROS。
- 王岚熊英
- 关键词：缺血再灌注损伤硫氧还蛋白相互作用蛋白活性氧簇凋亡
- HUCMSCs荷载miR-26b治疗新生大鼠HIE的作用研究
- 2024年
- 目的通过移植高表达miR-26b的人脐带间充质干细胞(HUCMSCs)治疗新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE),并探讨miR-26b参与HUCMSCs治疗HIE的作用及潜在机制。方法从新生儿脐带分离培养HUCMSCs,采用重组腺病毒技术构建、扩增miR-26b,通过腺病毒感染使HUCMSCs荷载miR-26b。利用Boyden chamber和Dunn chamber检测HUCMSCs的趋化迁移效率和速率,RTCA细胞功能分析仪检测其增殖能力,ELISA法检测其分泌功能。取新生7日龄健康SD大鼠,雌雄不限,随机分为对照组、模型组、miR-26b-HUCMSCs治疗组和Ad-HUCMSCs治疗组,每组9只。其中模型组及治疗组建立HIE模型,建模成功24 h后分别将miR-26b-HUCMSCs和Ad-HUCMSCs移植入对应治疗组大鼠损伤侧侧脑室,48 h后通过神经行为学测试(翻正反射实验)来评估HUCMSCs治疗后的短期效果,之后每组取3只大鼠脑组织,经TTC染色观察其梗死情况,其余6只大鼠继续饲养至28 d,使用神经行为功能测试(水迷宫实验)来评估长期疗效。结果成功培养出形态为长梭形的贴壁细胞,经流式细胞术鉴定为HUCMSCs。与Ad-HUCMSCs治疗组比较,miR-26b-HUCMSCs治疗组的迁移、增殖能力明显增强,IL-6、HGF、VEGF等抗炎及组织修复因子的分泌量显著升高,IL-1分泌量减少(P<0.05),IL-2分泌量无统计学意义。移植48 h后TTC染色显示,对照组大鼠大脑未见梗死灶,模型组大鼠大脑梗死灶明显,与模型组大鼠比较,治疗组大鼠的脑梗死体积显著减少(P<0.05);与Ad-HUCMSCs治疗组比较,miR-26b-HUCMSCs治疗组脑梗死体积减少(P<0.05)。翻正反射实验和水迷宫实验结果显示,与模型组相比,Ad-HUCMSCs组和miR-26b-HUCMSCs组大鼠的翻正反射时间和到达平台时间均显著缩短(P<0.05)。结论miR-26b能促进HUCMSCs迁移、增殖,并调节其分泌免疫调节因子;HUCMSCs能显著减少HIE大鼠的脑梗死体积,对HIE大鼠的大脑具有保护作用;高表达miR-26b可促进HUCMSCs的归巢能力,并促进分泌功能、调�
- 许键炜吴莎姚发华姚发华姚发华董智慧王东艳卢俊厚熊英
- 关键词：缺氧缺血性脑病人脐带间充质干细胞脑保护
- 苗药腹水草对大鼠肝纤维化的治疗作用及其分子机制
- 2024年
- 目的探讨苗药腹水草(VLY)水提物调控转化生长因子-β/Smad蛋白(TGF-β/Smad)信号通路对大鼠肝纤维化的影响。方法取干燥VLY全植株加热回流提取物配置成100 g/L溶液,40只SD大鼠随机均分为对照组、模型组、秋水仙碱(阳性药)组(0.2 mg/kg)及VLY水提物低(400 mg/kg)、高(800 mg/kg)剂量组,后4组大鼠皮下注射CCl 4诱导肝纤维化模型;造模第7周开始,对照组和模型组大鼠灌胃生理盐水,其余各组大鼠灌胃相应药物,1次/d、连续4周,同期观察各组大鼠一般情况并测量体质量;各组大鼠末次给药1周后称体质量,取眼内眦血,检测血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)等肝功能指标及血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)、层黏连蛋白(LN)、透明质酸(HA)等肝纤维化指标;取血后处死各组大鼠,取肝脏称质量并计算脏器指数;取部分肝左叶组织、采用苏木精-伊红(HE)及苦味酸-酸性品红(VG)染色观察肝脏的组织学特征,采用免疫组织化学染色观察肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和TGF-β蛋白的表达,并进行灰度值分析。结果与对照组比较,模型组大鼠体质量增长缓慢,肝脏质量及肝指数升高(P<0.01),血清AST、ALT、ALP、TBIL水平增高(P<0.01),TP、ALB水平降低(P<0.05),HA、LN、PCⅢ及ColⅣ水平升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,秋水仙碱组及VLY低、高剂量组大鼠肝脏质量及肝指数降低(P<0.01),血清AST、ALT、TBIL、ALP水平降低(P<0.01),TP、ALB水平升高(P<0.05),HA、LN、PCⅢ及ColⅣ水平降低(P<0.05或P<0.01);HE染色显示,模型组大鼠肝组织严重受损,秋水仙碱组和VLY低、高剂量组大鼠肝脏炎症细胞浸润较模型组减轻;VG染色显示,模型组大鼠肝组织可见较多染成红色的胶原纤维,秋水仙碱组和VLY低、高剂量组大鼠肝脏内胶原纤维较模型组明显减少,VLY低、高剂�
- 许键炜伍徐娴伍徐娴冉渺金岑王岚秦臻
- 关键词：转化生长因子-Β肝纤维化肝损伤Α-平滑肌肌动蛋白
- 达格列净在ox-LDL诱导形成的THP-1源性泡沫细胞焦亡中的作用
- 2023年
- 目的探讨达格列净(DAPA)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导形成的人髓系白血病单核细胞(THP-1)源性泡沫细胞焦亡中的作用。方法通过ox-LDL诱导THP-1源性巨噬细胞构建THP-1源性泡沫细胞焦亡模型。设置实验分组为:空白对照(NC)组、ox-LDL组和药物干预(ox-LDL+DAPA)组;以油红O法检测巨噬细胞泡沫化水平;细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)检测DAPA对泡沫细胞活力的影响;Hoechst 33342/PI双染检测THP-1源性泡沫细胞焦亡;细胞免疫荧光双染检测DAPA对泡沫细胞焦亡中焦亡关键因子Caspase-1表达的影响;采用微量酶标法检测细胞培养基中乳酸脱氢酶(LDH)活性;采用qRT-PCR和Western blot分别检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、消皮素D(GSDMD)、白细胞介素(IL)-18、IL-1βmRNA和蛋白表达水平。结果CCK-8法检测结果提示DAPA的最佳干预浓度为10μmol/L;油红O染色结果示THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞焦亡模型构建成功;与NC组比较,ox-LDL组中NLRP3、Caspase-1、ASC、GSDMD、IL-18、IL-1β mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05),碘化丙啶(PI)阳性细胞数及LDH活性增加(P<0.05),Caspase-1的荧光强度增强,细胞胞质内的红色脂滴增多;予DAPA干预后,ox-LDL+DAPA组中前述焦亡相关因子的mRNA和蛋白表达水平均降低(均P<0.05),PI阳性细胞数及LDH活性降低(P<0.05),Caspase-1的荧光强度减弱,细胞胞质内的红色脂滴减少(P<0.05)。结论DAPA对ox-LDL诱导形成的THP-1源性泡沫细胞焦亡具有抑制作用。
- 龚才伟赵广建刘大男欧航君赵权威李辉
- 关键词：泡沫细胞氧化低密度脂蛋白
- miR-26b对不同分化状态神经干细胞系C17.2向肝细胞生长因子趋化迁移的影响观察被引量：3
- 2018年
- 目的观察微小RNA-26b(mi R-26b)对不同分化状态神经干细胞(NSCs)系C17. 2向肝细胞生长因子(HGF)趋化迁移的影响。方法 (1)HGF刺激下不同分化状态NSCs细胞mi R-26b检测取C17. 2细胞,置于含N2和F12的诱导分化培养基中诱导分化。将细胞分为A、B、C、D组,A、B、C组分别于诱导分化12、24、72 h三个时间点终止诱导分化,D组为诱导分化前的细胞。采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞mi R-26b。将诱导分化培养基更换为含25 ng/m L的HGF完全培养基,孵育5 h,每组均设相应对照,予无HGF的完全培养基孵育5 h。检测各组细胞mi R-26b。(2)抑制、过表达mi R-26b对C17. 2细胞向HGF的趋化迁移的影响取对数生长期C17. 2细胞,分为两组,分别转染mi R-26b mimic(促进mi R-26b表达)、mi R-26b NC(对照),将完全生长培养基更换为含N2和F12的诱导分化培养基,分别于诱导分化0、12、24、72 h时终止诱导分化,采用Transwell实验测算各分化时间细胞的迁移细胞率。取对数生长期C17. 2细胞,分为两组,分别转染mi R-26b inhibitor(抑制mi R-26b表达)、mi R-26b乱序对照(ConⅠ),将完全生长培养基更换为含N2和F12的诱导分化培养基,分别于诱导分化0、12、24、72 h时终止诱导分化,采用Transwell实验测算各分化时间细胞的迁移细胞率。结果 A、B、C、D组细胞mi R-26b相对表达量分别为1. 16±0. 07、1. 39±0. 11、2. 30±0. 11、1. 00±0. 03,与D组比较,B、C组胞mi R-26b相对表达量升高,P均<0. 05。A、B、C、D组HGF处理5 h时细胞mi R-26b相对表达量分别为2. 02±0. 43、2. 28±0. 35、2. 50±0. 41、2. 21±0. 23,A、B、C、D组未经处理细胞mi R-26b相对表达量分别为1. 21±0. 12、1. 47±0. 21、2. 30±0. 20、1. 00±0. 04,与未经处理者比较,HGF处理5 h时A、B、D组细胞mi R-26b相对表达量均升高,P均<0. 05。与转染NC者比较,分化0、12、24、72 h时转染mi R-26b mimic的细胞迁移率均升高(P均<0. 05)。与转染ConⅠ者比较,�
- 熊英汪显耀秦臻田羽王岚潘际刚许键炜
- 关键词：微小RNA神经干细胞肝细胞生长因子细胞趋化细胞迁移
- hUC-MSCs对缺氧缺血脑损伤新生大鼠脑组织的保护作用研究被引量：1
- 2021年
- 目的通过移植人脐带来源的间充质干细胞(hUC-MSCs)治疗缺氧缺血诱导的新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE),并探讨hUC-MSCs对神经细胞的保护作用及机制。方法采集足月健康新生儿脐带约10 cm,运用组织块贴壁法培养hUC-MSCs,通过感染重组携带绿色荧光蛋白的腺病毒标记细胞;取18只新生健康7d龄SD大鼠,随机均分为对照(假手术)、模型、治疗组,其中模型组及治疗组建立新生大鼠缺氧缺血脑损伤模型,建模成功24 h后将标记的hUC-MSCs注射入治疗组左侧(损伤侧)侧脑室,各组大鼠hUC-MSCs移植治疗48 h后,检测hUC-MSCs在HIE大鼠大脑内的定植并采用TTC染色观察梗死脑组织,RT-qPCR测定海马组织中Beclin-2、Caspase-3 mRNA水平的变化,Western blot检测海马区细胞Beclin-2、Caspase-3蛋白的表达。结果对照组大鼠大脑没有形成梗死体积,模型组大鼠大脑梗死体积明显,梗死体积比为(41.67±4.17)%;治疗组大鼠经hUC-MSCs移植治疗48 h后,大脑梗死体积减小[(16.65±3.43)%],与模型组比较,差异有统计学意义;HIE建模48 h后,内源性Beclin-2、Caspase-3的mRNA以及蛋白的表达上调。hUC-MSCs移植治疗48 h后,Beclin-2、Caspase-3的mRNA以及蛋白的表达下降。结论hUC-MSCs能减小缺氧缺血损伤大鼠大脑梗死体积,对损伤大鼠有保护作用;hUC-MSCs能够减少大鼠脑细胞凋亡,下调缺氧缺血脑损伤大鼠海马区细胞凋亡相关Beclin-2、Caspase-3的mRNA以及蛋白水平。
- 陈茂琼陈茂琼宋海良王岚王岚张丽娟熊英何志旭许键炜何志旭秦臻
- 鱼腥草抗前列腺癌潜在机制的研究进展被引量：2
- 2021年
- 据2020年世界癌症数据报告显示,前列腺癌的患病率居男性恶性肿瘤的第2位,死亡率的第5位。在我国由于不良的生活和饮食习惯的影响,前列腺癌的患病率仍在不断上升,但由于晚期前列腺癌可通过多种机制对雄激素去势治疗相关药物产生适应和耐受,晚期前列腺癌的治疗,往往难以取得有效的治疗效果。鱼腥草是三白草科蕺菜属植物,是国家卫生健康委员会正式确定为药食两用的品种之一。迄今为止的研究表明鱼腥草可通过多靶点、多环节、多途径对前列腺癌产生抑制增殖、诱导凋亡和细胞周期停滞、抑制迁移和侵袭等抗肿瘤生物活性作用,这些抗肿瘤活性可在乳腺癌、白血病、胃癌、结直肠癌等多种肿瘤细胞中观察到。这些抗肿瘤活性主要体现在抑制细胞周期蛋白(Cyclin)和细胞周期蛋白激酶的表达,调节凋亡相关蛋白的表达并激活凋亡相关通路,减少基质金属蛋白的分泌,抑制信号转导与转录激活因子3(STAT3)/锌指蛋白(Snail)/转录因子Twist(Twist)通路,拮抗生长因子受体、雄激素、炎症及氧化应激在前列腺癌发生和发展过程中的促进作用。另外研究显示鱼腥草也可以通过抑制蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,改善糖尿病,调节降血糖的相关通路并增强机体免疫力等方式实现对前列腺癌的发生和进展产生抑制。综上所述,鱼腥草可作为抗前列腺癌的潜在药物。
- 李威张峻豪许盛涵车邦威黄涛唐开发
- 关键词：鱼腥草前列腺癌细胞凋亡炎症免疫力
- hUC-MSC在成神经分化过程中的趋化迁移研究被引量：1
- 2021年
- 目的探究人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSC)向神经样细胞的分化,并对其分化的神经样细胞的趋化作用进行研究。方法检测hUC-MSC细胞表面的标记;无血清的诱导培养基[含2%二甲基亚砜(DMSO)和200μmol/L丁羟基茴香醚(BHA)]诱导其向神经细胞分化,并进行神经细胞特异性标志物神经上皮干细胞蛋白(nestin)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的免疫荧光染色检测,并对分化的成神经诱导过程中的形态变化进行鉴定。此外,不同分化状态的hUC-MSC,在加入500μL含有20 ng/mL浓度的基质细胞衍生因子(stromal Cell-derived Factor-1α,SDF-1α)的不含血清的L-DMEM培养基,利用倒置相差显微镜下拍照,统计迁移至室膜下方的细胞数。结果成功分离出hUC-MSC,行流式细胞仪检测结果显示MSC:CD71+、CD29+,而CD34-、CD45-符合MSC的生物学特征。对不同诱导时间的hUC-MSC免疫荧光结果的统计学分析,nestin的表达呈现出先增高后降低的趋势,NSE在诱导期和维持前期均为阴性,在整个过程中末期才开始表达,到维持48 h时有62.5%的细胞表达,维持72 h时有76.5%的细胞表达。不同成神经分化状态的hUC-MSC迁移能力不同,诱导30 h,细胞向SDF-1α的趋化迁移能力达到最强。结论hUC-MSC具有易分离并扩增培养的生物特性,能诱导分化成为成神经细胞,并且具有一定的迁移能力,该研究能为中枢神经系统细胞的移植提供理论基础。
- 李晨卞凯鹏熊英张丽娟匡梦岚王岚王恒许键炜
- 以创新性、探索性实验深化机能设计性实验教学改革被引量：5
- 2016年
- 通过学生自主设计性实验提高学生的综合科研素质,以学生为主体,培养学生的创新意识和分析解决问题的能力,是机能实验教学改革的重要尝试。面对当前设计性实验教学中存在的问题,结合我校实际尝试选拔优秀的实验设计,深入开展探索性、创新性实验,使学生的综合能力得到了系统培养,有效提升了设计性实验课程的教学效果。
- 熊英李玲王岚吴艳俊张金娟叶兰
- 关键词：机能实验学实验教学教学改革
- 颈内动脉破裂动脉瘤行支架辅助栓塞术后口服双抗治疗的时限研究
- 2023年
- 目的:探讨与研究不同口服双抗治疗时限对颈内动脉破裂动脉瘤行支架辅助栓塞术后患者的影响。方法:2017年2到2022年1月选择在我院及贵州省职工医院已行颈内动脉瘤支架辅助栓塞术的患者282例作为研究对象,根据患者服药时间将其分为三组,A组、B组、C组分别术后都口服双抗治疗,持续时间分别为3个月、6个月与1年。结果:三组的手术时间、手术出血量、支架种类对比无显著差异(P>0.05)。三组术后1年的改良Rankin量表(MRS),评分都明显高于术前,A组术后1年的MRS评分都明显高于B组与C组(P<0.05)。三组术后1年的血清肿瘤坏死因子(TNF-α)与白细胞介素(IL-6)含量都明显低于术前,A组术后1年的血清TNF-α与IL-6含量也明显低于B组与C组(P<0.05)。A组术后1年的血栓、再出血事件发生率分别为2.1%、1.1%,都明显低于B组与C组的19.1%、10.6%、18.1%、11.7%(P<0.05)。结论:颈内动脉破裂动脉瘤行支架辅助栓塞术具有很好的应用可行性,术后短期口服双抗治疗更能改善患者的预后,降低血栓、再出血事件的发生率。
- 刘骏驰刘旭柳明富刘大男向欣彭翰刘昊楠杨华
