于亮
- 作品数：9 被引量：37H指数：4
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- 4-羟基壬烯醛诱导支气管上皮细胞凋亡被引量：2
- 2006年
- 目的探讨4-羟基壬烯醛(4-HNE)对支气管上皮细胞(16-HBE)凋亡的诱导作用及其机制。方法将支气管上皮细胞(16-HBE)分为空白对照组、10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L4-HNE作用4h组,观察4-HNE作用4h后的细胞凋亡情况。Western印迹方法检测磷酸化(p-)SAPK-JNK和caspase-3蛋白表达的情况。结果细胞经30μmol/L、50μmol/L4-HNE作用后,姬姆萨染色可见明显细胞凋亡改变。对照组、10μmol/L、30μmol/L、50μmol/L4-HNE组的AnnexinV-PI染色凋亡细胞数分别为1.94±1.03,2.03±1.04,43.36±1.3,65.92±3.45。30μmol/L和50μmol/L4-HNE组与对照组及10μmol/L4-HNE组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。各组p-SAPK-JNK蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。30μmol/L、50μmol/L4-HNE刺激组caspase-3的表达较对照组和10μmol/L4-HNE组差异有统计学意义(P<0.01)。结论30、50μmol/L4-HNE可通过caspase-3的激活引起支气管上皮细胞的凋亡。
- 于亮冉丕鑫
- 关键词：4-羟基壬烯醛凋亡支气管上皮细胞
- 红霉素对4-羟基壬烯醛引起的支气管上皮细胞白细胞介素-8和谷氨酰半胱氨酸合成酶变化的影响被引量：5
- 2009年
- 目的探讨红霉素对4-羟基壬烯醛（4-HNE）引起的支气管上皮细胞（16-HBE细胞）前炎因子白细胞介素-8（IL-8）和谷氨酰半胱氨酸合成酶（1-GCS）升高的影响。方法将16-HBE细胞分为4-HNE组（10μmol／L）和健康对照组，每组样本量为4个培养皿，4-HNE刺激细胞0．5,2、4、8及12h后，检测磷酸化c—Jun氨基末端激酶（JNK）、p38丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）、细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）-1及转录激活蛋白-1（AP-1）活性的变化，观察细胞外信号调节激酶活化激酶-1（MEK-1）抑制剂PD98059对4-HNE引起的AP-1结合活性的影响；观察两组IL-8、γ-GCS和IL-8 mRNA、γ-GCS mRNA表达水平的变化；观察PD98059和红霉素对4-HNE引起的IL-8、1-GCS和1-GCS mRNA表达及红霉素对4-HNE引起的AP-1结合活性的影响。结果（1）4-HNE组在0．5,2、4、8及12h各时间段ERK-1分别为110．4±1．6、106．1±2．1、104．4±3．4、96．3±9．6和86．3±2．9，对照组分别为114．6±2．4、110．2±2．0、112．8±2．4、113．1±2．0和115．4±3．8，两组比较差异有统计学意义（均P〈0．05）；4-HNE组各时间段AP-1结合活性表达分别为90．6±2．0、85．7±2．2、78．2±2．6、70．6±1．8和64．9±4．8，对照组分别为98．6±2．1、98．7±3．4、100．1±3．8、101．3±4．2和97．4±3．6，两组比较差异有统计学意义（均P〈0．05）；PD98059可降低4-HNE引起的AP-1结合活性。（2）4-HNE组IL-8水平在2、4、8及12h分别为（87±4）、（98±4）、（102±6）及（117±6）μg/L，对照组分别为（64±4）、（65±6）、（65±5）及（64±7）μg／L，两组比较差异有统计学意义（均P〈0．05）；4-HNE组γ—GCS水平在4、8及12h分别为5．43±0．23、5．41±0．27及5．54±0．53，对照组分别为4．78±0．26、4．03±0．34及3．22±0．31，两组比较差异有统计学意义（均P〈0．05）。4-HNE组比对照组IL-8 mRNA及γ-GCSmRNA表达水�
- 于亮冉丕鑫
- 关键词：白细胞介素类红霉素4-羟基壬烯醛
- 阻断MEK1上调支气管上皮细胞谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达
- 2007年
- 目的探讨MEK1信号通路与支气管上皮细胞（16-HBE）谷氨酰半胱氨酸合成酶（1-GCS）表达的关系。方法应用MEK1抑制剂PD9805950μmol／L分别孵育16-HBE2、8、16及24h。用Western印迹方法和荧光定量PCR检测细胞γ-GCS重链蛋白和mRNA的表达。用显色方法检测细胞内谷胱甘肽（GSH）的含量。用Western印迹方法检测细胞c-jun的水平。结果经PD98059孵育4、8、16及24h后，γ-GCS重链蛋白和mRNA的表达和细胞内GSH的含量较对照组均增加。各时间段c-jun表达较各对照组减少。结论在支气管上皮细胞中MEKI抑制剂PD98059对16-HBE的γ-GCS和GSH有明显的上调作用。阻断激活蛋白-1（AP-1）途径不能减少γ-GCS和GSH的合成。
- 于亮冉丕鑫
- 关键词：Γ谷氨酰半胱氨酸合成酶谷胱甘肽信号传导激活蛋白1
- 红霉素对支气管上皮细胞谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨红霉素对支气管上皮细胞16-HBE谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)和谷胱甘肽(GSH)的影响。方法:应用红霉素5μg/ml分别孵育细胞16-HBE细胞2 h,8 h,16 h,24 h。分别应用显色法,Western blot和荧光定量PCR方法检测细胞内GSH,γ-GCS重链蛋白和mRNA的表达。结果:经红霉素孵育后,16、24 h后,细胞内GSH、γ-GCS重链蛋白和mRNA的表达较对照组增加。结论:红霉素对支气管上皮细胞谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)和GSH的合成有上调作用。
- 于亮李冰冉丕鑫
- 关键词：谷胱甘肽红霉素
- 红霉素干预对烟雾暴露大鼠肺部炎症的影响被引量：3
- 2005年
- 何志义彭公永于亮钟南山冉丕鑫
- 关键词：红霉素肺部炎症
- 香烟对气道上皮细胞表达4-羟基壬烯醛的影响以及银杏内酯B的干预作用被引量：7
- 2006年
- 目的探讨香烟烟雾浓缩物(CSC)对人类支气管上皮细胞系(16-HBE)表达4-羟基壬烯醛(4-HNE)的影响以及银杏内酯 B 的干预作用;并观察4-HNE 对中性粒细胞的趋化作用。方法采用免疫细胞化学和 Western blot 方法。(1)不同浓度(1、10μg/ml CSC)CSC 刺激16-HBE 细胞4h后4-HNE 加成蛋白的表达水平,设正常对照组(无血清培养基代替 CSC);(2)10μg/ml CSC 刺激不同时间(1、4、8、12、24、30h)后,16-HBE 中4-HNE 加成蛋白的水平,设正常对照组(无血清培养基代替 CSC);(3)用100μmol/L 银杏内酯 B 孵育16-HBE 后,CSC 刺激1、4、8、12h,检测4-HNE 加成蛋白表达的变化,设正常对照组(无银杏内酯 B 孵育);(4)以趋化实验检测0.1、1、10μmol/L 4-HNE 对兔中性粒细胞的趋化作用。结果(1)1、10μg/ml CSC 刺激4h 后,16-HBE 细胞表达4-HNE 加成蛋白水平(免疫化学为2.12±0.38、2.69±0.42,Western blot 为100.2±6.3、72.3±6.1)均较正常对照组显著增加(免疫化学为1.25±0.37,Western blot 为122.4±4.2,P 均<0.01)。(2)10μg/ml CSC 刺激1、4、8、12、24、30h后,16-HBE 细胞表达4-HNE 加成蛋白(免疫化学为2.67±0.46、2.69±0.42、2.71±0.48、2.72±0.56、2.93±0.11、2.92±0.20,Western blot 为73.2±8.3,72.3±6.4,72.6±9.2,71.5±8.1,54.4±3.6,56.7±4.4)较正常对照组(免疫化学为1.25±0.35,Western blot 为122.4±4.1)显著增加(P 均<0.01),刺激24h 和30h,细胞内4-HNE 加成蛋白较其他时间点增加。(3)50、100μmol/L 银杏内酯 B 孵育后再以 CSC 刺激时,16-HBE 细胞内4-HNE 加成蛋白表达水平(Westernblot 为84.6±4.4、101.2±4.4)明显低于未以内酯 B 孵育组,但高于正常对照组(Western blot 为72.5±6.4,P 均<0.01)。(4)0.1、1、10μmol/L 4-HNE 对兔中性粒细胞趋化数目(92±12、104±16、131±12)较正常对照组(72±12)均显著增加,10 μmol/L 4-HNE 趋化数目显著高于0.1和1μmol/L4-HNE,差异均有统计学意义(P 均<0.01)。结论香烟所引起肺中性粒细胞趋化的结果可能与其促
- 于亮冉丕鑫
- 关键词：4-羟基壬烯醛银杏内酯B中性粒细胞
- 大蒜素对大鼠肺泡上皮细胞γ谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的影响被引量：5
- 2006年
- 目的观察大鼠肺泡上皮细胞(CCL149细胞系)谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γGCS)等表达变化,了解大蒜素对CCL149细胞抗氧化能力的影响。方法在以四甲基偶氮唑盐(MTT)法确定大蒜素适当作用浓度的基础上,用不同浓度大蒜素(0、0.1、1.0、5.0μg/ml)作用CCL149不同时间(6、12、24、48h),用分光光度法检测细胞内GSH、MDA的变化;用Westernblot法检测细胞内γGCS蛋白的表达,分析不同处理剂量、不同处理时间大蒜素对细胞内GSH、MDA及γGCS的影响。结果(1)大蒜素浓度≤5μg/ml不影响细胞活力。(2)大蒜素0.1、1.0、5.0μg/ml组在处理6h后细胞内GSH含量[6h组GSH含量分别为(16.45±0.69)、(16.81±0.79)、(17.80±1.10)mg/g蛋白]较对照组[(13.38±1.16)mg/g蛋白]显著增加(t=3.92～4.78,P均<0.05),MDA含量[(1.07±0.02)、(1.02±0.06)、(1.00±0.05)nmol/mg蛋白]较对照组[(1.23±0.05)nmol/mg蛋白]下降(t=5.75～6.34,P均<0.05)。细胞内GSH水平升高至24h达顶峰,48h有所下降,仍较对照组高,相同时间点不同大蒜素浓度组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。(3)大蒜素0.1、1.0、5.0μg/ml组在刺激6、12、24h细胞内γGCS蛋白表达(24h为0.693±0.027、0.646±0.081、0.667±0.077)较对照组(0.531±0.007)显著增强(t=2.82～9.92,P<0.05),各观察指标未呈现剂量依赖性。结论大蒜素能增强大鼠肺泡上皮细胞的抗氧化作用,可能与其促进γGCS的表达有关。
- 熊丽红于亮李冰冉丕鑫
- 关键词：谷胱甘肽丙二醛大蒜素大鼠肺泡上皮细胞
- 红霉素对过氧化氢刺激的支气管上皮细胞表达白细胞介素-8与谷胱甘肽的影响被引量：17
- 2005年
- 目的探讨红霉素对过氧化氢(H2O2)诱导的支气管上皮细胞表达炎症介质白细胞介素8(IL8)及抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)的影响和可能的作用机制。方法培养16HBE株的人支气管上皮细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察过氧化氢及红霉素对细胞生长的影响。将传代后的细胞按24、36、48h3个时间段分组,每个组再分为对照组、H2O2组、红霉素+H2O2组。通过酶联免疫吸附实验检测细胞上清中IL8的浓度;通过凝胶迁移率阻滞实验(EMSA)来检测转录因子核因子κB(NFκB)和激活蛋白1(AP1)的活性;通过酶联免疫检测仪检测细胞内GSH、谷氨酰半胱氨酸合成酶(γGCS)的含量;应用Western印迹检测谷氨酰半胱氨酸合成酶重链亚单位(γGCSHS)蛋白表达。结果红霉素(5μg/ml)预孵育36、48h后可以抑制H2O2(0.01mmol/L)诱导的HBE上清中IL8的含量;红霉素(5μg/ml)预孵育36、48h后可以下调H2O2(0.01mmol/L)诱导的支气管上皮细胞转录因子NFkB、AP1的活性;红霉素(5μg/ml)预孵育48h抑制H2O2(0.01mmol/L)诱导的HBE细胞GSH和γGCS的含量(3.46±0.41)以及γGCSHS蛋白表达、γGCSHS启动子区域AP1转录活性。结论红霉素通过下调NFκB、AP1的活性而抑制H2O2诱导的炎症介质IL8的释放,进而影响GSH及γGCS的合成调控。
- 何志义邹朝霞于亮钟南山冉丕鑫钟小宁
- 关键词：过氧化氢细胞表达红霉素转录因子NF-KB四甲基偶氮唑蓝
- 4-羟基壬烯醛引起支气管上皮细胞白细胞介素-8升高的机制及银杏内酯B的拮抗作用被引量：2
- 2008年
- 目的探讨4-羟基壬烯醛（4-HNE）引起人支气管上皮细胞（16HBE）前炎因子白细胞介素-8（IL-8）升高的机制，以及银杏内酯B对其的拮抗作用。方法实验分组为4-HNE（10μmol／L）组、银杏内酯B（100μmol／L）孵育＋4-HNE（10μmol／L）组和正常对照组3组，在刺激支气管上皮细胞0．5、2、4、8、12h后，检测细胞IL-8和IL-8mRNA的表达水平、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（JNK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）1／2、转录激活蛋白-1（AP-1）的活性；观察MAP激酶（MEK）1抑制剂PD98059阻断ERK1信号转导途径后，对4-HNE引起的AP-1结合活性和IL-8生成的影响。检测上述3个实验组AP-1的结合活性。应用方差分析和t检验进行统计学处理。结果4-HNE组、银杏内酯B孵育＋4-HNE组、正常对照组刺激细胞4h后，细胞上清IL-8值分别为（98．3±4．2）、（88．2±5．3）和（65．3±6．2）μg／L；刺激12h后细胞上清IL-8值分别为（116．5±5．6）、（102．8±4．7）和（63．7±6．6）μg／L。4-HNE组0．5、2、4、8、12h的磷酸化ERKl水平高于对照组（t值为2．83—14．03，P均〈0．05）；4-HNE、银杏内酯B孵育＋4-HNE组、PD98059＋4-HNE组及正常对照组的AP-1结合活性差异有统计学意义（F值为21．49-194．16，P均〈0．01）。PD98059孵育2h，4-HNE作用2、4、8、12h后，IL-8表达和AP-1结合活性明显低于未用PD98059孵育4-HNE刺激组。银杏内酯B＋4-HNE组AP-1结合活性低于4-HNE组。结论4-HNE可以通过ERK1途径增强AP-1转录活性，促进支气管上皮细胞IL-8表达。而银杏内酯B可通过抑制AP-1活性，减少4-HNE引起的支气管上皮细胞IL-8的合成。
- 于亮熊丽红冉丕鑫
- 关键词：银杏内酯类白细胞介素84-羟基壬烯醛转录激活蛋白-1
