徐曙光
- 作品数：6 被引量：23H指数：3
- 供职机构：中国农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 鸡类囊胚获得及其生物学特性研究被引量：5
- 2005年
- 鸡胚是研究胚胎发育、组织分化、基因表达与调控良好的实验模型, 是动物功能基因组学研究的重要材料. 实验选取白来航蛋鸡所产新鲜种蛋, 采用纸环法收集胚盘, 机械打碎后进行悬浮培养, 获得了哺乳动物囊胚样结构, 命名为类囊胚. 体外培养12～24 h是类囊胚发育的高峰期, 其直径显著增加近1倍. FBS可促进类囊胚的发育, 而卵黄在12 h前对类囊胚发育没有明显影响, 但到24 h时可促进类囊胚的贴壁生长. 经碱性磷酸酶(AKP)染色初步显示类囊胚中含有大量碱性磷酸酶活性的胚胎干细胞, 胚胎干细胞特异性表面标志SSEA-1免疫荧光染色后呈阳性, 进一步肯定了类囊胚中ES细胞的存在, 最终从贴壁类囊胚中分化出神经样和成纤维样等多种类型细胞. 由此可以得出: 悬浮培养鸡胚盘细胞可以形成含有胚胎干细胞的、类似哺乳动物囊胚样的结构, 并能保持其内胚胎干细胞的特性和分化潜能.
- 李佳潘求真李俊英韩红兵孙书锋杨君徐曙光田亮连正兴杨宁李宁
- 关键词：基因表达与调控碱性磷酸酶活性鸡类细胞特异性组织分化ES细胞
- 用X期胚盘细胞制备嵌合体鸡和供体细胞迁移规律的研究
- 利用转基因技术对家禽进行遗传改良不仅可以改善禽肉、蛋的产量和品质，给社会带来巨大的经济效益;作为功能基因研究的模型，转基因鸡在发育生物学等基础研究领域同样具有潜在的研究价值。然而，由于禽类具有独特的生殖生理和繁殖方式，已...
- 徐曙光
- 关键词：胚盘转基因技术
- 文献传递
- 绿色荧光蛋白基因转染猪骨髓基质干细胞
- 目的采用电穿孔法将带有GFP的质粒(pGFP-NEO)转染MSCs,经过G418筛选阳性克隆,用荧光显微镜检测GFP的表达情况。结果以电压150V,20ms一次脉冲进行转染。转染 GFP质粒的MSCs能在含有6418的培...
- 潘求真孙书锋韩红兵张宝路李海田亮李佳徐曙光连正兴杨宁
- 关键词：绿色荧光蛋白基因转染骨髓基质干细胞
- 文献传递
- 体外培养山羊成纤维细胞系方法的建立被引量：11
- 2006年
- 用山羊组织块和0．25％的胰蛋白酶消化培养法获得正常传代细胞，对于出现的上皮样细胞和成纤维样细胞混合生长的问题，则根据两者贴壁紧实程度不同，用0．05％的胰酶-EDTA进行不同时间的消化，将其分离纯化。纯化的成纤维体细胞经数次传代培养后，进行冷冻一解冻检验表明仍具有正常的传代能力。各代体细胞的核型分析表明，在体外培养至20～30代成纤维细胞的细胞形态（为梭形细胞，高度汇合后呈火焰状）、细胞周期以及核型均为正常，符合体细胞克隆转基因的基本要求。
- 潘求真田亮徐曙光韩红兵李佳李海孙书锋连正兴杨宁李宁谭景和
- 关键词：山羊成纤维细胞体外培养
- 绿色荧光蛋白表达载体的改造和表达被引量：6
- 2007年
- 为获得增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的真核表达载体pEG-FP-N1-MSC,并观察其在猪成纤维细胞中的表达情况,用NheⅠ和AgeⅠ消除pEGFP-N1质粒上的多克隆位点(MSC),然后补平连接,获得增强型绿色荧光蛋白编码基因的真核表达载体pEGFP-N1-MSC质粒,将pEGFP-N1-MSC质粒转化DH5α感受态细胞,于Kanr+LB平板上筛选阳性克隆。重组子经NheⅠ和AgeⅠ双酶切鉴定,将该载体转染猪成纤维细胞,24 h后观察EGFP表达情况,48 h后添加G418进行筛选。结果表明:改造的pEGFP-N1-MSC真核表达载体,成功转染猪成纤维细胞,在倒置荧光显微镜下呈现绿色光,获得可产生绿色荧光的pEGFP-N1-MSC载体,为构建猪双正选择同源重组载体奠定了基础。
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- 关键词：绿色荧光蛋白
