柴若楠
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 供职机构：北京军区总医院更多>>
- 发文基金：烧伤与复合伤国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 1人TLR4胞外区基因重组腺病毒载体的构建与鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的构建并鉴定人TLR4胞外区基因重组腺病毒载体。方法以pUCm-TLR4质粒为模板,运用PCR技术扩增TLR4胞外区目的基因片段,片段回收后经酶切连接穿梭质粒pAdTrack-CMV上,获得重组腺病毒质粒pAdTrack-CMV-TLR4.通过KpnⅠ和HindⅢ双酶切,测序鉴定后,将鉴定正确的质粒经PmeI酶切线性化后,转化到含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态细菌BJ5183中,进行同源重组,卡那抗性筛选阳性克隆,提取质粒,用脂质体介导转染293细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR技术,Western blot等方法鉴定重组腺病毒,并进行病毒滴度测定。结果人TLR4胞外区基因重组腺病毒载体构建正确,病毒滴度为3.2×109pfu/mL。结论成功构建了人TLR4胞外区基因重组腺病毒载体,为下一步实验奠定基础。
- 刘静李强孙守勋李玲柴若楠蒲晓允
- 关键词：腺病毒载体胞外区
