王春霞
- 作品数：6 被引量：24H指数：3
- 供职机构：兰州大学基础医学院医学生物化学与分子生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划甘肃省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Livin mRNA反义寡核苷酸对人肝癌细胞株HepG-2体外增殖及凋亡的影响
- 2009年
- 目的探讨LivinmRNA反义寡核苷酸(ASODN)进行肿瘤基因治疗的可行性。方法设计合成嵌合骨架型ASODN及其对照错义寡核苷酸(MSODN),脂质体转染到HepG-2细胞(观察1组和观察2组),同时设未转染者为对照组。采用MTT法检测HepG-2细胞增殖抑制率(IR),电镜、流式细胞仪与吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)细胞染色法检测细胞凋亡水平和形态学变化。结果ASODN在终浓度200nmol/L作用72h时,观察1组HepG-2细胞IR及细胞凋亡数明显高于其他两组。结论以Livin为靶点的ASODN能够促使肿瘤细胞凋亡,具有靶特异性和低毒性,有可能成为抗肿瘤药物开发的新工具。
- 王春霞杨林西韩亚萍路艳刘玲玲
- 关键词：反义寡核苷酸凋亡抑制蛋白肝肿瘤肝癌
- 慢性髓细胞性白血病K562细胞适体的筛选与鉴定被引量：10
- 2009年
- 目的:筛选并鉴定出慢性髓细胞性白血病(CML)K562细胞的寡核苷酸适体.方法:体外合成长度为88个碱基的随机单链DNA(ssDNA)文库,采用生物素-链霉亲和素磁珠法制备次级文库,以正常人血液中提取的中性粒细胞为反筛细胞,利用指数富集的配基系统进化(SELEX)技术筛选出与CMLK562细胞特异结合的适体.将筛选得到的适体回收纯化后连接pGEM-T质粒载体,经蓝白筛选后,随机挑选24个克隆子进行序列测定.采用荧光标记引物法检测ssDNA文库与K562细胞的亲和力,并用Clustal 2.05和DNA sis V2.5软件对适体序列进行一级结构同源性分析和二级结构预测.结果:经过13轮循环筛选,CML K562细胞适体的A值从0.12上升到1.25,至第13轮A值无明显增高.一级结构分析无同源序列,但可分为6个家族,其中5个家族各自具有保守序列,家族6无保守序列.二级结构分析表明,适体形成的茎环、凸环结构可能是与K562细胞特异性结合的结构基础.结论:利用SELEX技术成功筛选出高亲和性的CML K562细胞适体.
- 刘玲玲韩跃武祝凯华李真真韩亚萍路艳王春霞
- 关键词：白血病髓样K562细胞SELEX适体
- Livin mRNA反义寡核苷酸对人肝癌细胞株HepG-2体外增殖及凋亡的影响
- 目的:
观察结合于Livin mRNA的BIR结构域上的反义寡核苷酸/(antisenseoligodexynucleotide,ASODN/)对Livin基因的抑制效应,及对人类肝癌细胞株HepG-2体外增...
- 王春霞
- 关键词：自由能反义核酸LIVINHEPG-2细胞增殖
- 文献传递
- 抗白念珠菌人源性单链抗体库的构建及筛选被引量：4
- 2009年
- 目的构建多样性良好的抗白念珠菌人源性单链抗体库,筛选抗白念珠菌特异性的噬菌体抗体。方法从20份人外周血淋巴细胞(包括正常成年人5份、新生儿5份和白念珠菌感染恢复期患者10份)中提取总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增人抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,以重叠延伸PCR法将VH和VL拼接成scFv基因,克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,构建人源抗白念珠菌天然噬菌体抗体库,并从中筛选阳性克隆抗体。结果构建的人源性抗白念珠菌天然噬菌体抗体库库容为2.8×109,多样性良好。共筛选出18个阳性克隆。结论已成功构建了1个多样性良好的抗白念珠菌人源性噬菌体抗体库,为筛选有效治疗白念珠菌和耐药性白念珠菌感染的药物提供了条件。
- 路艳韩跃武韩亚萍刘玲玲王春霞李真真
- 关键词：白念珠菌单链抗体
- 人源性胃癌单链抗体库的构建被引量：1
- 2009年
- 目的:构建人源天然库容量大、多样性好的核糖体展示单链抗体(scFv)库。方法:采集人新鲜外周血分离淋巴细胞,提取总RNA,用RT-PCR扩增人抗体VH和VL基因,同时扩增作为间隔区的人抗体CK基因;采用重叠延伸PCR(简称SOEPCR)技术连接VH-VL-CK基因,同时引入T7启动子和核糖体结合位点序列,体外构建核糖体展示scFv库模板,连接T-Vector转化E.coliDH5α大肠杆菌,蓝白筛选,挑取阳性克隆测序以鉴定scFv组装。结果:成功构建了库容量达3.1×1013的人源性胃癌核糖体展示scFv库。结论:构建的大容量人源性胃癌核糖体展示抗体库可以成为进一步筛选多种特异性人源抗体的实验平台,为开发治疗性人源抗体奠定了很好的实验基础。
- 韩亚萍韩跃武路艳王春霞刘玲玲李真真
- 关键词：核糖体展示技术胃癌
- SELEX法体外筛选胃癌细胞适配子方法的建立被引量：11
- 2009年
- 目的:建立SELEX技术筛选胃癌细胞SGC-7901适配子的方法,并初步鉴定获得的SGC-7901细胞适配子。方法:体外合成全长88bp中间含52bp随机序列的ssDNA文库,通过优化PCR扩增条件,利用地高辛-抗地高辛抗体-碱性磷酸酶系统测定亲和力,经SELEX反复筛选获得胃癌SGC-7901细胞的特异性适配子。将最后一轮筛选产物克隆、测序并用相关软件分析适配子序列的一级结构和二级结构。结果:经12轮SELEX筛选,ssDNA文库与SGC-7901细胞的亲和力由0.16上升至1.14,表明特异性适配子得到逐步富集。22个克隆子测序,有4个序列完全一致,二级结构预测茎环可能是适配子与胃癌细胞作用的结构基础。结论:成功建立了SELEX技术体外筛选胃癌细胞SGC-7901高亲和性适配子的方法。
- 李真真韩跃武刘玲玲韩亚萍路艳王春霞
- 关键词：胃癌细胞SELEX适配子
