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慢性髓细胞性白血病K562细胞适体的筛选与鉴定被引量：10: 2009年; 目的:筛选并鉴定出慢性髓细胞性白血病(CML)K562细胞的寡核苷酸适体.方法:体外合成长度为88个碱基的随机单链DNA(ssDNA)文库,采用生物素-链霉亲和素磁珠法制备次级文库,以正常人血液中提取的中性粒细胞为反筛细胞,利用指数富集的配基系统进化(SELEX)技术筛选出与CMLK562细胞特异结合的适体.将筛选得到的适体回收纯化后连接pGEM-T质粒载体,经蓝白筛选后,随机挑选24个克隆子进行序列测定.采用荧光标记引物法检测ssDNA文库与K562细胞的亲和力,并用Clustal 2.05和DNA sis V2.5软件对适体序列进行一级结构同源性分析和二级结构预测.结果:经过13轮循环筛选,CML K562细胞适体的A值从0.12上升到1.25,至第13轮A值无明显增高.一级结构分析无同源序列,但可分为6个家族,其中5个家族各自具有保守序列,家族6无保守序列.二级结构分析表明,适体形成的茎环、凸环结构可能是与K562细胞特异性结合的结构基础.结论:利用SELEX技术成功筛选出高亲和性的CML K562细胞适体.; 刘玲玲韩跃武祝凯华李真真韩亚萍路艳王春霞; 关键词：白血病髓样 K562细胞 SELEX 适体

抗白念珠菌人源性单链抗体库的构建及筛选被引量：4: 2009年; 目的构建多样性良好的抗白念珠菌人源性单链抗体库,筛选抗白念珠菌特异性的噬菌体抗体。方法从20份人外周血淋巴细胞(包括正常成年人5份、新生儿5份和白念珠菌感染恢复期患者10份)中提取总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增人抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,以重叠延伸PCR法将VH和VL拼接成scFv基因,克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,构建人源抗白念珠菌天然噬菌体抗体库,并从中筛选阳性克隆抗体。结果构建的人源性抗白念珠菌天然噬菌体抗体库库容为2.8×109,多样性良好。共筛选出18个阳性克隆。结论已成功构建了1个多样性良好的抗白念珠菌人源性噬菌体抗体库,为筛选有效治疗白念珠菌和耐药性白念珠菌感染的药物提供了条件。; 路艳韩跃武韩亚萍刘玲玲王春霞李真真; 关键词：白念珠菌单链抗体

黄芪甲苷对异丙肾上腺素所致心肌梗死的保护作用及Cx43表达的影响: 目的观察黄芪甲苷(Astragaloside Ⅳ, AST IV)对大剂量异丙肾上腺素(Isoproterenol, ISO)诱导的大鼠心肌梗死的保护作用及对组织缝隙连接蛋白43(Connexin43, Cx43)表达的...; 李真真; 关键词：黄芪甲苷异丙肾上腺素心肌梗死缝隙连接蛋白43; 文献传递

人源性胃癌单链抗体库的构建被引量：1: 2009年; 目的:构建人源天然库容量大、多样性好的核糖体展示单链抗体(scFv)库。方法:采集人新鲜外周血分离淋巴细胞,提取总RNA,用RT-PCR扩增人抗体VH和VL基因,同时扩增作为间隔区的人抗体CK基因;采用重叠延伸PCR(简称SOEPCR)技术连接VH-VL-CK基因,同时引入T7启动子和核糖体结合位点序列,体外构建核糖体展示scFv库模板,连接T-Vector转化E.coliDH5α大肠杆菌,蓝白筛选,挑取阳性克隆测序以鉴定scFv组装。结果:成功构建了库容量达3.1×1013的人源性胃癌核糖体展示scFv库。结论:构建的大容量人源性胃癌核糖体展示抗体库可以成为进一步筛选多种特异性人源抗体的实验平台,为开发治疗性人源抗体奠定了很好的实验基础。; 韩亚萍韩跃武路艳王春霞刘玲玲李真真; 关键词：核糖体展示技术胃癌

SELEX法体外筛选胃癌细胞SGC-7901适配子方法的建立: 目的:　　建立SELEX技术体外筛选胃癌细胞SGC-7901适配子的方法,以获得能与SGC-7901细胞特异性结合的适配子。测定适配子与胃癌细胞的结合活性,以确定其亲和性及特异性,为应用于胃癌的临床诊断和治疗奠定基础...; 李真真; 关键词：胃癌细胞 SELEX 适配子磁珠; 文献传递

SELEX法体外筛选胃癌细胞适配子方法的建立被引量：11: 2009年; 目的:建立SELEX技术筛选胃癌细胞SGC-7901适配子的方法,并初步鉴定获得的SGC-7901细胞适配子。方法:体外合成全长88bp中间含52bp随机序列的ssDNA文库,通过优化PCR扩增条件,利用地高辛-抗地高辛抗体-碱性磷酸酶系统测定亲和力,经SELEX反复筛选获得胃癌SGC-7901细胞的特异性适配子。将最后一轮筛选产物克隆、测序并用相关软件分析适配子序列的一级结构和二级结构。结果:经12轮SELEX筛选,ssDNA文库与SGC-7901细胞的亲和力由0.16上升至1.14,表明特异性适配子得到逐步富集。22个克隆子测序,有4个序列完全一致,二级结构预测茎环可能是适配子与胃癌细胞作用的结构基础。结论:成功建立了SELEX技术体外筛选胃癌细胞SGC-7901高亲和性适配子的方法。; 李真真韩跃武刘玲玲韩亚萍路艳王春霞; 关键词：胃癌细胞 SELEX 适配子

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李真真