胡勇策
- 作品数：8 被引量：30H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牛体细胞核移植显微操作环节的优化被引量：7
- 2009年
- 本研究从牛卵母细胞去核方法(纺锤体观测仪法&Hoechst33342染色法)、供体细胞核引入去核卵细胞质的方法(卵细胞质注射法和电融合法)和重构胚胎电融合(3组参数)等3个环节对牛体细胞核移植的显微操作过程及相关参数进行了筛选优化。以核移植胚胎的卵裂率、囊胚发育率作为检测指标,对不同的方法所获得的克隆胚胎的卵分裂率与囊胚发育率进行比较,最后筛选获得1个优化的牛体细胞核移植操作程序,即采用Spindle view系统对牛卵母细胞进行去核操作,将供核体细胞注射到卵周隙,然后通过电融合法将供体核引入去核卵细胞质(电融合参数为1.9kV/cm,脉冲时程10μs,方波2次间隔2s)。以此核移植程序进行牛体细胞核移植实验,自获得克隆胚胎中筛选80枚优质囊胚移植到33头受体牛子宫内,最后2头母牛产下2头克隆牛犊,结果表明利用该优化的显微操作环节进行牛体细胞核移植可以获得体细胞克隆牛犊。
- 雷安民马晓玲高志敏胡勇策隋进强黄伟伟昝林森窦忠英
- 关键词：去核方法电融合
- 胚胎无血清体外培养体系的建立与克隆牛微卫星检测
- 本研究以牛卵母细胞为研究材料,在不同的体外培养体系中进行卵母细胞体外成熟培养,以探索研究影响卵母细胞体外成熟培养的因素,并建立牛卵母细胞无血清体外成熟培养体系,为以后如孤雌激活胚胎发育,体细胞核移植,转基因动物等相关研究...
- 胡勇策
- 关键词：无血清培养体细胞核移植微卫星DNA
- 文献传递
- 几种培养液对昆白系小鼠早期胚胎体外发育的影响被引量：2
- 2007年
- 为了完善小鼠早期胚胎体外培养体系,探讨以KSOM为基础液添加新生牛血清(NBS)、胎牛血清(FBS)及BSA和G1/G2对小鼠早期胚胎体外发育的影响。结果表明:①添加10%NBS的KSOM组和G1/G2培养液组的囊胚率分别为89.52%和87.08%,二者差异不显著;②添加10%FBS组囊胚率为10.26%,与①中两组差异极显著;③添加0.1%BSA和0.4%BSA组囊胚率为0%,与其他三组差异极显著。添加新生牛血清的KSOM与胚胎培养液G1/G2均有效克服昆白小鼠2-细胞阻滞,并能得到较高的囊胚率。
- 刘淑娟华进联葛秀国严兴荣胡勇策窦忠英
- 关键词：胚胎培养
- 牛Nanog基因克隆及其在皮肤成纤维细胞中的表达被引量：6
- 2008年
- 本研究克隆了牛Nanog基因,构建其真核表达载体,并转染皮肤成纤维细胞,获得能够用作核移植供核细胞的稳定转染细胞株。从6周龄的胎牛原始生殖嵴中提取总RNA,通过RT-PCR扩增Nanog基因,将其克隆到pMD-18T载体,再从酶切鉴定和测序正确的质粒上切下目的片段,定向克隆到pCDNA3-FLAG表达载体上,挑选序列正确的真核表达质粒pCDNA3-Nanog转染牛皮肤成纤维细胞,获得了稳定转染的细胞株。用RT-PCR和Western Blotting分别检测NanogmRNA和FLAG-Nanog融合蛋白的表达,用免疫染色法验证该细胞株是否具有干细胞特征。结果表明:(1)从胎牛原始生殖嵴中克隆了序列正确的Nanog全长编码序列;(2)所构建的pFLAG-Nanog重组质粒能够在皮肤成纤维细胞中高效表达;(3)所获稳定转染的细胞株能表达ES细胞表面抗原SSEA-4和多能性维持因子Nanog、Oct-4,表明其具有一定的多能性。为进一步研究Nanog基因功能,尤其是探讨它在家畜早期胚胎发育、生产转基因动物,以及胚胎干细胞建系中的作用奠定了基础。
- 郑喜邦云彦胡勇策李勇王华岩窦忠英
- 关键词：NANOG分子克隆真核表达
- 微量牛卵中H1 foo CDS序列的克隆及其mRNA向卵内显微注射被引量：8
- 2009年
- 本研究旨在优化从微量卵中克隆基因的条件,并构建牛H1foo基因真核表达载体。首先将微量（1~5个）卵母细胞裂解后,用改进的RT-PCR方法扩增内参β-actin基因以检测该方法扩增基因的效率,结果表明单卵扩增成功率为80%以上（10/12）,3个、5个卵扩增成功率均达100%。利用该体系从微量（5个）牛卵中克隆得到H1fooCDS全长序列,测序结果显示其与GenBank上公布序列同源性为100%。将牛H1fooCDS连接至pMD19-T载体上,经酶切、测序鉴定正确后定向亚克隆到真核表达载体pVenus上,鉴定正确后命名为pVenus-H1foo。利用脂质体2000将pVenus-H1foo转染Hela细胞,24 h后通过荧光显微镜观察、RT-PCR、Western Blotting分别检测表明其能够正确表达。将H1foo体外转录为mRNA后直接注射卵母细胞,其表达产物能准确定位于卵母细胞及极体的染色体上。结果,成功构建了牛H1foo真核表达载体pVenus-H1foo,为研究该基因在卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的作用奠定了基础。
- 云彦吴苏君隋进强胡勇策雷安民
- 关键词：RT-PCR体外转录
