郝明飞
- 作品数：8 被引量：29H指数：3
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项国家现代农业产业技术体系建设项目山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸭坦布苏病毒包膜蛋白的原核表达和间接ELISA抗体检测方法的建立
- 自2010年4月以来,我国山东、江苏、浙江等地很多鸭场暴发了一种以产蛋严重下降为主要特征的传染病,后证实该病是由黄病毒科黄病毒属蚊媒病毒科恩塔亚病毒群中的鸭坦布苏病毒(DTMUV)所引起。DTMUV的病毒粒子直径40～5...
- 郝明飞张琳胡北侠许传田杨少华崔言顺张秀美
- 文献传递
- 4个传染性囊病野毒株的致病性试验
- 2010年
- 唐德宏吴永启郝明飞张帅孙见丁源孙淑红
- 关键词：传染性囊病病毒致病性试验野毒株接触性养禽业
- 鸭坦布苏病毒巢式PCR检测方法及其重组E蛋白间接ELISA诊断方法的研究
- 2010年4月以来，我国东南部分地区饲养的种鸭和蛋鸭爆发了鸭坦布苏病毒病，以产蛋急剧下降为特点，给养鸭业造成了巨大的损失，因此有必要建立一种快速、敏感、特异的诊断方法。分子生物学技术的发展为黄病毒属病毒的快速诊断带来了新...
- 郝明飞
- 关键词：巢式PCR检测包膜蛋白间接ELISA诊断
- 文献传递
- 禽四种病毒多重PCR诊断技术的建立和应用被引量：10
- 2011年
- 根据禽呼肠孤病毒(ARV)、禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的基因保守区设计了4对特异性引物,建立了针对四种病毒的多重PCR检测体系,并对该体系进行了条件优化及特异性、敏感性试验。该体系扩增的四种病毒基因片断大小分别为199bp(ARV)、264bp(AIV)、362bp(NDV)和459bp(IBV),且特异性、敏感性良好,能够检出1pg AIV和10pg ARV、NDV、IBV的RNA。临床应用结果证明,该体系具有很高的实用价值和应用前景。
- 张琳胡北侠杨少华许传田陈正涛郝明飞张秀美
- 关键词：多重PCR禽呼肠孤病毒禽流感病毒新城疫病毒鸡传染性支气管炎病毒
- 鸭病毒性肝炎病毒、禽流感病毒和新城疫病毒三重PCR诊断方法的建立及应用被引量：7
- 2012年
- 根据GenBank中已登录的鸭病毒性肝炎病毒(DHV)、禽流感病毒(AIV)和新城疫病毒(NDV)的基因序列,设计了3对特异性引物,建立了DHV、AIV和NDV的多重PCR鉴别诊断技术,并对体系进行了优化和特异性、敏感性试验。结果表明,该体系所扩增的3种病毒基因片段大小分别为174bp(DHV)、264bp(AIV)和362bp(NDV),且特异性、敏感性良好,能够分别检出1pg AIV、10pg DHV和10pg NDV的病毒RNA。对鸭临床样品的检测结果表明,该方法与病毒分离鉴定符合率90%以上,可用于临床样品的快速检测。
- 郝明飞张秀美胡北侠张琳许传田杨少华李建亮陈正涛崔言顺
- 关键词：多重PCR鸭病毒性肝炎病毒禽流感病毒新城疫病毒
- 鸭坦布苏病毒巢式PCR检测方式及其重组E蛋白间接ELISA诊断方法的研究
- 2010年4月以来，我国东南部分地区饲养的种鸭和蛋鸭爆发了鸭坦布苏病毒病，以产蛋急剧下降为特点，给养鸭业造成了巨大的损失，因此有必要建立一种快速、敏感、特异的诊断方法。分子生物学技术的发展为黄病毒属病毒的快速诊断带来了新...
- 郝明飞
- 关键词：巢式PCR包膜蛋白间接ELISA
- 文献传递
- 鸭坦布苏病毒包膜蛋白的原核表达和间接ELISA抗体检测方法的建立被引量：9
- 2012年
- 为建立特异性和敏感性高的检测鸭坦布苏病毒感染的方法,采用原核表达系统对鸭坦布苏病毒(DTMUV)E基因进行了克隆与表达,SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白大小为54.3ku。Western blot结果表明,经亲和层析法纯化后的重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应。以纯化的重组E蛋白作为包被抗原,初步建立了检测E蛋白抗体的间接ELISA方法。对ELISA各种反应条件进行了优化,确定了最适工作条件。优化后确定的抗原最适包被浓度为7μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶320,酶标抗体最适稀释度为1∶1 000。在优化条件下,阴性和阳性临界值判定标准为0.324 4。本研究建立的快速检测DT-MUV抗体的间接ELISA方法为该病的检测和流行病学调查提供了技术手段。
- 郝明飞张琳胡北侠崔言顺张秀美
- 关键词：包膜蛋白原核表达间接酶联免疫吸附试验
- 猪链球菌2型重组suilysin的高效表达及其生物学特性被引量：1
- 2013年
- 根据猪链球菌2型(SS2)HA9801株溶血素(suilysin,SLY)基因全长序列设计引物,扩增SLY基因,与原核表达载体pET-28a连接,转入大肠杆菌Transetta(DE3)中诱导表达,收集表达菌体,超声破壁、镍柱纯化获得可溶性rSLY蛋白,电泳鉴定后测定rSLY的溶血活性及其溶血谱,系统研究温度、酸碱度、离子强度等理化因素对rSLY溶血活性的影响。结果表明,本试验建立的rSLY原核表达体系能高效可溶性表达具有溶血活性的rSLY,纯度达电泳纯,相对分子质量为54 000左右,100mL菌液诱导后能纯化出约8mg电泳纯的rSLY。rSLY具有高溶血活性,溶血比活为4 057HU/mg。rSLY对多种动物的红细胞有溶血作用,其中对猪、兔和豚鼠的作用最强。rSLY在4℃保存时溶血活性最稳定,保存48h后溶血活性不降低。在pH 6～7和离子强度为500mmol/L时溶血活性最高。本试验获得了高表达、可溶性、高溶血活性的rSLY,首次系统研究了不同理化因素对rSLY生物学活性的影响,为SLY致病机理深入研究及SS2亚单位疫苗和诊断试剂的研制奠定了基础。
- 陈正涛颜世敢张秀美张琳杨少华许传田胡北侠郝明飞李建亮崔言顺
- 关键词：猪链球菌2型溶血素原核表达溶血活性
