丁慧荣
- 作品数：10 被引量：47H指数：4
- 供职机构：北京大学肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 人肺癌细胞原位移植瘤小鼠模型免疫细胞的多色流式细胞术检测方法的建立被引量：4
- 2023年
- 目的对肺癌原位接种的小鼠模型,设计并建立了11色的免疫细胞分类方法,对肿瘤微环境中的T细胞、巨噬细胞、自然杀伤(natural killer,NK)细胞进行更加细致的分型,从而获得有关影响肿瘤细胞进展的研究手段。方法建立11色的上皮细胞、T细胞、巨噬细胞和NK细胞的标志物荧光基团的搭配方案,对有免疫功能的小鼠血液样本进行鉴定。进一步原位接种PC-9细胞于裸鼠体内,通过该搭配方案分析鉴定M1型、M2型巨噬细胞,以及不同成熟程度的NK细胞。结果11色免疫细胞的搭配方案能够使各种标志物发挥到最大的荧光效应,减少荧光串色。对小鼠血液标本,通过流式细胞学分析可以得到准确的淋巴细胞、巨噬细胞和NK细胞的分类和分型。对原位移植瘤样本,能够更精准的区分肿瘤细胞和各种免疫细胞及细胞亚型。采用溶瘤病毒干预措施,发现干预后的免疫细胞各个分型之间差异有统计学意义。结论在原位移植瘤的模型中,该11色免疫细胞的流式荧光抗体搭配方案可以对肿瘤微环境中的多种免疫细胞进行精确分类,为研究不同免疫细胞和肿瘤细胞之间的相互作用提供了有效的手段,并可以应用于大量的肿瘤微环境研究中。
- 杨敏燕翔刘锡娟安国丁慧荣蔡英葛会争
- 关键词：免疫微环境免疫细胞溶瘤病毒
- 双功能试剂与螯合金属元素标记多肽新技术的建立
- 2016年
- 建立了双功能试剂2-[(4-异硫氰基苯基)甲基]-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(p-SCN-Bn-DOTA)与标准肽段反应的新方法,测定了反应产物与镧系金属Eu(Ⅲ)的螯合效率,探索了其作为靶向探针和蛋白定量标记试剂性能。考察了不同缓冲体系的浓度及pH值、p-SCN-Bn-DOTA量与肽段相对量、反应体系中有机相与水相比例,反应温度与反应时间对偶联效率的影响。实验结果显示:p-SCN-Bn-DOTA量为肽段的32倍,缓冲体系为0.2 mol/L TEAB(pH 8.5),60℃反应60 min,有机相与水相之比为4.4∶1(V/V)时标记效率高;在HCl/Na Ac缓冲体系(pH 4.0)中60℃反应60 min,金属离子鳌合反应效率高达94%。本研究建立了一种新的基于双功能试剂p-SCN-Bn-DOTA的标记方法,并成功用于RGD肽等的标记。
- 田慧芳徐庆春丁慧荣田志华张宏朱华王昕沈靖
- 关键词：多肽蛋白定量质谱
- GFP/DNA双标记法流式细胞仪分析荧光补偿调节方法的建立
- 2012年
- 用PI或Hoechst 33342标记表达GFP基因的BGH 823细胞DNA,流式检测分析时,需要做荧光补偿。以此为例,建立了线性(DNA含量)和对数(GFP表达量)放大信号之间的荧光补偿调节方法。结果表明,建立的补偿调节方法对于GFP/DNA双标记实验,完全适用和有效;它既实现了在同一散点图上同时呈现线性与对数放大,也提供了对数和线性2种不同荧光信号参数发生荧光重叠时进行补偿调节的方法。
- 丁慧荣刘锡娟田志华张宏
- 关键词：流式细胞术
- 索拉菲尼诱导的肝癌耐药细胞株的建立及基因表达分析被引量：4
- 2020年
- 目的:建立索拉菲尼诱导的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)耐药细胞株,筛选出耐药细胞株中的高表达基因,进一步探讨肝细胞癌中与索拉菲尼耐药的相关基因。方法:选取人肝癌细胞株PLC及Huh7,采用药物间歇诱导法分别建立索拉菲尼诱导的耐药细胞株,运用高通量测序技术(RNA-Seq)测定两株耐药细胞株中高表达基因,运用生物信息学数据库分析高表达基因与肝癌临床生物学指标相关性,筛选出肝癌耐药机制中可能参与的基因。结果:通过基因测序得到两株肝癌耐药细胞株中的高表达基因,在设定的限定条件下进行进一步筛选,限定条件为两株耐药细胞中共同表达的基因且表达差异倍数大于4倍,差异具有统计学意义(P<0.05),发现两株耐药细胞共同表达前12位基因符合限定条件,进一步运用Ualcan数据库分析12个基因与肝癌组织表达水平、分期、分级及生存的关系,筛选出符合条件的基因CBX4。结论:成功构建了索拉菲尼诱导的肝癌耐药细胞株,并筛选出与索拉菲尼耐药相关基因CBX4,为进一步耐药机制探讨提供依据。
- 马博田志华曲莉刘月香张宏丁慧荣
- 关键词：肝细胞癌
- 利妥昔单抗联合CHOP方案一线治疗延长补体C1qA276纯合子A基因型弥漫大B细胞淋巴瘤患者的生存期
- 目的:利妥昔单抗的作用机制至今尚未完全阐明.除了抗体依赖细胞介导细胞毒作用(ADCC)外,补体也在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者接受含利妥昔单抗方案的治疗中发挥重要作用.C1qA是补体系统重要组成部分,是利妥昔单抗...
- 金璿丁慧荣丁宁付志英宋玉琴朱军
- 关键词：生存期
- FACSAria流式细胞仪96孔微孔板单个细胞分选方法的优化和应用被引量：10
- 2010年
- 对FACSAria流式细胞仪96孔微孔板单个细胞分选方法进行优化和应用。通过对液流的调节,获得较稳定的分选设定值;在96孔微孔板盖上分选肉眼可见液滴,确定分选液滴在96孔微孔板每孔相对应的盖上的位置;分选结束后,计数单个细胞存在的细胞孔数;分选细胞培养7d后,记录单个细胞存在孔数及单克隆形成的数量。结果5个细胞形成的液滴即肉眼清晰可见;96微孔板有单个细胞的孔数为80～90个,单个细胞获得率为83.3%～93.7%,培养7d后,有活细胞存在的孔数为5～38孔,即单克隆形成率为6.3%～42.2%。分选前在96孔微孔板板盖上分选肉眼可见液滴的简单方法使得对液流位置的判断直观可见;流式细胞仪96孔微孔板单细胞分选是一种简单易行,准确有效地获得单个细胞和单克隆的方法。
- 刘锡娟丁慧荣张宏
- 关键词：流式细胞仪分选单个细胞
- FACSAria流式细胞仪无菌操作分选高纯度细胞亚群被引量：7
- 2014年
- BGC823细胞瞬时转染绿色荧光蛋白(GFP)质粒2 d后,用FACSAria流式细胞仪分选GFP阳性和阴性BGC823细胞亚群,检测其分选纯度并培养分选后细胞,观察其无菌生长状态;商品化FITC直标抗体孵育SMMC7721细胞后,FACSAria流式细胞仪分选FITC阳性和阴性细胞亚群。将所有分选的细胞进行培养检测无菌状态,并观察细胞生长情况。FACSAria流式细胞仪分选得到的GFP阳性细胞群的分选纯度达99.6%,GFP阴性细胞群的分选纯度达98.8%,同时激光共聚焦荧光显微镜显示分选后的GFP阳性细胞明显富集;分选后的BGC823细胞和SMMC7721细胞常规培养,细胞均无污染且生长状态良好。
- 刘锡娟丁慧荣田志华韩海勃张宏
- 关键词：流式细胞仪
- 体外存储过程中红细胞衰亡的研究
- 2022年
- 目的:研究体外存储对红细胞衰亡(eryptosis)的影响。方法:募集6名健康成年志愿献血者,分别采集400 mL抗凝全血,滤白后离心去除血浆,将红细胞(red blood cells,RBC)重悬于100 mL MAP红细胞保护液中,4℃保存。于储存期0、7、14、21、28和35 d分别抽取血样6 mL,利用流式细胞仪、全自动血细胞计数仪、血气分析仪等分别检测RBC膜磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)含量、红细胞平均体积(mean corpuscular volume,MCV)、细胞外离子浓度、细胞外葡萄糖(glucose,Glu)、乳酸(lactic acid,Lac)、总胆红素(total bilirubin,TBil)浓度及高铁血红蛋白分数(fraction of methemoglobin,FMetHb)。结果:随着存储时间延长,PS含量降低(r=-0.8356),MCV、细胞外Cl-浓度没有变化,细胞外TBil浓度(r=0.8035)、Lac浓度(r=0.9377)及FMetHb(r=0.9706)随存储时间延长不断增加,细胞内Na^(+)浓度(r=-0.9274)和Glu浓度(r=-0.9860)随存储时间延长降低。结论:体外存储并不引起RBC衰亡增加。
- 杨丽丽丁慧荣李姝李旭妍孙明玥苏燕
- 关键词：红细胞衰亡
- 用DAPI和Hoechst33342染色法检测DNA的流式细胞方法探讨被引量：23
- 2010年
- 目的:探索利用DAPI和Hoechst33342两种荧光染料检测DNA的流式细胞技术。方法:分别用DAPI、Hochest和PI3种荧光染料标记HT-29细胞,通过流式细胞仪检测其G0/G1期、S期和G2/M期的DNA含量,比较3种方法测定结果。用标准荧光微球和DNA质量控制试剂盒做测试质控。结果:质控实验显示,紫外激光的变异系数(CV)为2.4;DAPI和Hoechst33342标记的小鸡红细胞核(chicken erythrocyte nuclei,CEN)出现4个峰,第2、第3和第4峰所在道数的平均值与第1峰的比值为2、3、4,且第1峰的CV均为2.4。DAPI、Hoechst33342标记小牛胸腺细胞核(calf thymocyte nuclei,CTN)出现2个峰,G2/G1为1.97,且G0/G1峰的CV为2.4。DAPI、Hoechst33342和PI3种染料标记的HT-29细胞呈现完整的细胞周期峰,结果分别为CV值3.40、3.02和4.42,G0/G1期含量为60.86%、60.22%和60.81%,S期含量为28.85%、29.70%和29.82%,G2/M期含量为10.29%、9.09%和9.37%,3种标记法测定结果一致。结论:本文探索的DAPI和Hoechst33342标记法简单易行,可作为具备紫外激光器的流式细胞仪的首选DNA荧光染料。
- 刘锡娟丁慧荣张宏
- 关键词：流式细胞术DNA
- 胰腺癌中CD4+CD25+CD127low/-Treg的功能和临床意义
- 胰腺癌因发病率增长快、起病隐匿、病情进展快和死亡率高,成为新的“癌中之王”.免疫逃逸是其发病机制之一,明确Treg在其发生发展中的作用,有利于开展胰腺癌的免疫治疗、术后检测以及预后判断等.本文通过检测健康人群和胰腺癌患者...
- 张依田秀云刘锡娟丁慧荣关晓雅郝纯毅
- 关键词：胰腺癌病理机制预后因素
- 文献传递
