刘锡娟
- 作品数：6 被引量：44H指数：4
- 供职机构：北京大学肿瘤医院更多>>
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- 用DAPI和Hoechst33342染色法检测DNA的流式细胞方法探讨被引量：23
- 2010年
- 目的:探索利用DAPI和Hoechst33342两种荧光染料检测DNA的流式细胞技术。方法:分别用DAPI、Hochest和PI3种荧光染料标记HT-29细胞,通过流式细胞仪检测其G0/G1期、S期和G2/M期的DNA含量,比较3种方法测定结果。用标准荧光微球和DNA质量控制试剂盒做测试质控。结果:质控实验显示,紫外激光的变异系数(CV)为2.4;DAPI和Hoechst33342标记的小鸡红细胞核(chicken erythrocyte nuclei,CEN)出现4个峰,第2、第3和第4峰所在道数的平均值与第1峰的比值为2、3、4,且第1峰的CV均为2.4。DAPI、Hoechst33342标记小牛胸腺细胞核(calf thymocyte nuclei,CTN)出现2个峰,G2/G1为1.97,且G0/G1峰的CV为2.4。DAPI、Hoechst33342和PI3种染料标记的HT-29细胞呈现完整的细胞周期峰,结果分别为CV值3.40、3.02和4.42,G0/G1期含量为60.86%、60.22%和60.81%,S期含量为28.85%、29.70%和29.82%,G2/M期含量为10.29%、9.09%和9.37%,3种标记法测定结果一致。结论:本文探索的DAPI和Hoechst33342标记法简单易行,可作为具备紫外激光器的流式细胞仪的首选DNA荧光染料。
- 刘锡娟丁慧荣张宏
- 关键词：流式细胞术DNA
- 胰腺癌中CD4+CD25+CD127low/-Treg的功能和临床意义
- 胰腺癌因发病率增长快、起病隐匿、病情进展快和死亡率高,成为新的“癌中之王”.免疫逃逸是其发病机制之一,明确Treg在其发生发展中的作用,有利于开展胰腺癌的免疫治疗、术后检测以及预后判断等.本文通过检测健康人群和胰腺癌患者...
- 张依田秀云刘锡娟丁慧荣关晓雅郝纯毅
- 关键词：胰腺癌病理机制预后因素
- 文献传递
- 人肺癌细胞原位移植瘤小鼠模型免疫细胞的多色流式细胞术检测方法的建立被引量：5
- 2023年
- 目的对肺癌原位接种的小鼠模型,设计并建立了11色的免疫细胞分类方法,对肿瘤微环境中的T细胞、巨噬细胞、自然杀伤(natural killer,NK)细胞进行更加细致的分型,从而获得有关影响肿瘤细胞进展的研究手段。方法建立11色的上皮细胞、T细胞、巨噬细胞和NK细胞的标志物荧光基团的搭配方案,对有免疫功能的小鼠血液样本进行鉴定。进一步原位接种PC-9细胞于裸鼠体内,通过该搭配方案分析鉴定M1型、M2型巨噬细胞,以及不同成熟程度的NK细胞。结果11色免疫细胞的搭配方案能够使各种标志物发挥到最大的荧光效应,减少荧光串色。对小鼠血液标本,通过流式细胞学分析可以得到准确的淋巴细胞、巨噬细胞和NK细胞的分类和分型。对原位移植瘤样本,能够更精准的区分肿瘤细胞和各种免疫细胞及细胞亚型。采用溶瘤病毒干预措施,发现干预后的免疫细胞各个分型之间差异有统计学意义。结论在原位移植瘤的模型中,该11色免疫细胞的流式荧光抗体搭配方案可以对肿瘤微环境中的多种免疫细胞进行精确分类,为研究不同免疫细胞和肿瘤细胞之间的相互作用提供了有效的手段,并可以应用于大量的肿瘤微环境研究中。
- 杨敏燕翔刘锡娟安国丁慧荣蔡英葛会争
- 关键词：免疫微环境免疫细胞溶瘤病毒
- GFP/DNA双标记法流式细胞仪分析荧光补偿调节方法的建立
- 2012年
- 用PI或Hoechst 33342标记表达GFP基因的BGH 823细胞DNA,流式检测分析时,需要做荧光补偿。以此为例,建立了线性(DNA含量)和对数(GFP表达量)放大信号之间的荧光补偿调节方法。结果表明,建立的补偿调节方法对于GFP/DNA双标记实验,完全适用和有效;它既实现了在同一散点图上同时呈现线性与对数放大,也提供了对数和线性2种不同荧光信号参数发生荧光重叠时进行补偿调节的方法。
- 丁慧荣刘锡娟田志华张宏
- 关键词：流式细胞术
- FACSAria流式细胞仪96孔微孔板单个细胞分选方法的优化和应用被引量：10
- 2010年
- 对FACSAria流式细胞仪96孔微孔板单个细胞分选方法进行优化和应用。通过对液流的调节,获得较稳定的分选设定值;在96孔微孔板盖上分选肉眼可见液滴,确定分选液滴在96孔微孔板每孔相对应的盖上的位置;分选结束后,计数单个细胞存在的细胞孔数;分选细胞培养7d后,记录单个细胞存在孔数及单克隆形成的数量。结果5个细胞形成的液滴即肉眼清晰可见;96微孔板有单个细胞的孔数为80～90个,单个细胞获得率为83.3%～93.7%,培养7d后,有活细胞存在的孔数为5～38孔,即单克隆形成率为6.3%～42.2%。分选前在96孔微孔板板盖上分选肉眼可见液滴的简单方法使得对液流位置的判断直观可见;流式细胞仪96孔微孔板单细胞分选是一种简单易行,准确有效地获得单个细胞和单克隆的方法。
- 刘锡娟丁慧荣张宏
- 关键词：流式细胞仪分选单个细胞
- FACSAria流式细胞仪无菌操作分选高纯度细胞亚群被引量：7
- 2014年
- BGC823细胞瞬时转染绿色荧光蛋白(GFP)质粒2 d后,用FACSAria流式细胞仪分选GFP阳性和阴性BGC823细胞亚群,检测其分选纯度并培养分选后细胞,观察其无菌生长状态;商品化FITC直标抗体孵育SMMC7721细胞后,FACSAria流式细胞仪分选FITC阳性和阴性细胞亚群。将所有分选的细胞进行培养检测无菌状态,并观察细胞生长情况。FACSAria流式细胞仪分选得到的GFP阳性细胞群的分选纯度达99.6%,GFP阴性细胞群的分选纯度达98.8%,同时激光共聚焦荧光显微镜显示分选后的GFP阳性细胞明显富集;分选后的BGC823细胞和SMMC7721细胞常规培养,细胞均无污染且生长状态良好。
- 刘锡娟丁慧荣田志华韩海勃张宏
- 关键词：流式细胞仪
