梁凌宇
- 作品数：15 被引量：32H指数：3
- 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：甘肃省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位表达条件的优化及其佐剂作用被引量：2
- 2008年
- 目的优化重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的表达条件,并检测其黏膜佐剂作用。方法通过向LB培养基中添加葡萄糖(终浓度为0.5%)、低温培养诱导等方法诱导LTB的表达;采用阳离子交换法对目的蛋白进行纯化;以LTB作为佐剂进行免疫试验。结果可溶性重组大肠杆菌不耐热肠毒素(LTB)的表达量明显提高,纯化后蛋白含量达95%以上,经纯化的LTB作为三价流感裂解疫苗或gD抗原的佐剂免疫BALB/c小鼠,可提高小鼠血清及黏膜的抗体水平,且其效果与铝化剂及福氏佐剂相当或更高。结论优化了LTB的表达条件,且表达的LTB具有较强的黏膜免疫佐剂作用。
- 雷清黄思扬应莲芳梁凌宇马亚茹蒋琳
- 关键词：黏膜免疫纯化佐剂
- 重组人睫状神经营养因子突变体的构建、表达及生物活性分析被引量：6
- 2007年
- 目的:通过对原始CNTF的突变改造,降低表达蛋白的免疫原性,同时增加其稳定性,以期能用于临床治疗肥胖症。方法:以原始CNTF为模板,去掉N端的12个氨基酸、C端的14个氨基酸,并将C端末2个氨基酸点突变为极性较强的赖氨酸,在大肠杆菌中表达,获得CNTF-T突变体。结果:基因序列分析与原设计吻合,目的蛋白表达量占全菌体的35%左右,表达蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性、DEAE-FF纯化,纯度可达95%以上,小鼠体内生物活性测定,能明显抑制小鼠体重增长,且CNTF-T的生物活性比原始序列CNTF的活性高。结论:突变的CNTF-T有望成为新一代的生物减肥制剂应用于临床。
- 应莲芳雷清梁凌宇高雪峰蒋琳
- 关键词：突变体生物活性减肥
- 人β-NGF真核表达载体的构建及其表达产物的生物活性被引量：7
- 2005年
- 目的在CHO细胞中共表达二氢叶酸还原酶(DHFR)基因及人神经生长因子β亚基(-βhNGF)基因,并对表达产物进行鉴定和生物活性分析。方法克隆DHFR和-βhNGF基因,测序,酶切,连接到真核表达载体pBudCE4.1中,构建人NGF基因重组表达质粒pBudCE4.1/DHFR/-βhNGF,经电转染法导入二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-DHFR-)中,经添加Zeocin抗生素和撤除H、T(次黄嘌呤、胸腺嘧啶脱氧核苷)双筛选,获得了DHFR+细胞克隆。经MTX加压筛选高表达-βhNGF的CHO细胞株。SDS-PAGE、ELISA和Western blot对表达产物进行鉴定,并利用鸡胚背根神经节法检测表达蛋白的生物活性。结果人神经生长因子在CHO细胞中得到较高表达,表达量达0.3μg/ml,且表达产物具有良好的生物活性。结论为大规模工业化生产重组人神经生长因子奠定了基础。
- 陈勇蒋琳杨军李萍梁凌宇沈心亮谢云飞
- 关键词：真核表达载体基因表达生物活性二氢叶酸还原酶
- 重组人睫状神经营养因子的聚乙二醇化修饰被引量：2
- 2014年
- 目的:研究重组人睫状神经营养因子(rhCNTF)突变体的聚乙二醇(PEG)化修饰,对rhCNTF的PEG化产物进行初步分离纯化及相关生物活性检测。方法:采用分子生物学技术经点突变得到rhCNTF的突变体CN10,通过实验设计研究CN10的最佳PEG化条件;采用分子筛层析方式对偶联产物进行初步纯化,最后用ELISA和小鼠体重增长抑制法检测PEG化后的CN10蛋白的生物活性。结果:能运用mPEG-MAL对CN10进行定点修饰,PEG化后用Superdex200能够分离CN10;PEG化后的CN10每2 d腹腔注射1次,对小鼠体重的增长抑制率可达50%,与rhCNTF每天注射2次的体重增长抑制作用相当。结论:CN10蛋白在PEG化修饰后,其减重效应持续时间明显延长。
- 梁凌宇雷清高雪峰杨军应莲芳蒋琳
- 关键词：人睫状神经营养因子纯化
- 重组人戊型肝炎疫苗细菌内毒素检查方法的建立被引量：3
- 2006年
- 确立重组人戊型肝炎疫苗原液的细菌内毒素检查方法。供试品参照《中华人民共和国药典》(2005年版三部)热原检查法进行热原检查,结果符合规定。该供试品同时参照《中华人民共和国药典》(2005年版三部)细菌内毒素检查法要求进行试验。供试品溶液在40μg/m l浓度下,确定内毒素限值为40EU/m l。供试品在该内毒素限值下干扰试验有效,且细菌内毒素检查法符合规定。该疫苗用内毒素检查法代替热原检查法,方法可行。
- 应莲芳杨军马超梁凌宇刘鹏
- 关键词：细菌内毒素检查方法
- 重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的表达优化及佐剂活性研究
- 为了提高重组LTB的蛋白表达量，该实验将表达宿主BL21(DE3)更换为BL21 Star(DE3)、向培养基中补加终浓度0.5％的葡萄糖、低温培养诱导等方法，使LTB获得较高水平表达，且目的蛋白为可溶性。在提高表达量的...
- 雷清黄思扬应莲芳梁凌宇蒋琳
- 关键词：重组大肠杆菌蛋白表达粘膜佐剂生物制品
- 文献传递
- RP-HPLC法检测CN_(10)蛋白的PEG化修饰率及含量被引量：3
- 2015年
- 目的建立一种简单有效的测定CN10蛋白PEG化修饰率的方法 ,用于PEG化修饰工艺中的质量控制。方法采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,以TSKgel Octadecyl-4PW作为色谱分离柱,以含0.12%三氟乙酸(TFA)、5%乙腈的水溶液作为A相溶液,以含0.1%TFA的乙腈作为B相溶液,在50℃柱温条件采用分段线性洗脱的方式分离蛋白,并考察CN10蛋白以及PEG化修饰后CN10蛋白的量效关系,根据外标法检测CN10和CN10-PEG的蛋白含量,根据PEG化修饰前后CN10蛋白量效关系的变化推断CN10蛋白的PEG化修饰率。结果 PEG化修饰前后的CN10蛋白经TSKgel Octadecyl-4PW色谱柱层析均能达基线分离,当用214 nm波长检测时,CN10蛋白浓度以及PEG修饰后的CN10蛋白均与其对应峰面积呈现良好的线性关系(r2=0.999 58;r2=0.999 67)。结论建立了一种简单快速的检测CN10蛋白PEG化修饰率的方法 ,此方法具有较高的准确性及专属性,可用于CN10的PEG化修饰工艺的监测。
- 梁凌宇王婉茹郭玉婷陆俭杨军蒋琳
- 关键词：睫状神经营养因子反相高效液相色谱
- 恶性疟原虫Pfs25蛋白在毕赤酵母中高效分泌表达策略的研究被引量：2
- 2013年
- 目的:探索Pfs25蛋白在毕赤酵母中高效分泌表达策略,提高Pfs25蛋白的表达量。方法:本研究主要通过4个方面深入研究Pfs25蛋白的高效表达策略。①构建Pfs25蛋白的诱导型表达重组株pPICZαA-Pfs25/GS115和组成型表达重组株pGAPZαA-Pfs25/GS115,并比较两酵母菌株的表达量差异。②从培养基、pH值、表达时间等方面入手,分别对诱导型和组成型分泌表达条件进行研究,寻找适合Pfs25蛋白表达的最佳条件。③利用pAO815表达载体构建Pfs25多拷贝重组酵母菌株pAO815-(α-Pfs25)n/GS115,通过提高pfs25基因拷贝数来提高表达量。④将毕赤酵母中蛋白二硫键异构酶(PDI)基因引入Pfs25重组酵母中,以提高Pfs25蛋白的分泌表达。结果:本研究成功构建了Pfs25诱导型和组成型表达重组酵母菌株,实现了Pfs25的诱导型和组成型表达,组成型表达量略高于诱导型。并通过对各种表达条件的比较研究,找到了适合Pfs25蛋白在毕赤酵母中高效分泌表达的条件。结论:通过对Pfs25蛋白高效表达策略的研究,显著提高了Pfs25蛋白在毕赤酵母中的分泌表达水平,使其表达量提高了约5倍。
- 雷清刘晓陈勇梁凌宇马超蒋琳
- 关键词：恶性疟原虫毕赤酵母
- 重组戊型肝炎病毒抗原工程菌的发酵及表达产物的纯化
- 2007年
- 目的建立重组戊型肝炎病毒抗原工程菌的发酵和目的蛋白纯化工艺。方法在三角烧瓶中,探讨不同的诱导剂浓度和培养基对菌体密度和目的蛋白表达量的影响;在10L发酵罐中,探讨诱导时间、补料方式、溶氧量对菌体密度和目的蛋白表达量的影响。根据目的蛋白的理化特性建立纯化工艺。结果重组HEV抗原工程菌在10L发酵罐分批补料培养中,采用0·1mmol/L的IPTG诱导4h,目的蛋白表达量约为25%,目的蛋白产率约为2·88g/L,且以包涵体形式存在。经过对包涵体粗纯、复性、纯化,SDS-PAGE分析,纯度可达95%以上。结论建立了周期短、产率高且稳定可靠的发酵及纯化工艺,为重组HEV抗原的大规模生产奠定了基础。
- 应莲芳梁凌宇杨军高雪峰蒋琳
- 关键词：工程菌发酵纯化
- 重组戊型肝炎病毒抗原工程菌的发酵及表达产物的纯化
- 目的：建立从高表达重组戊型肝炎病毒抗原的工程菌发酵和目的蛋白纯化的工艺。
方法：在三角烧瓶中，探讨了不同的诱导剂浓度和培养基对菌体密度和目的蛋白表达量的影响;在10升发酵罐中，探讨了诱导时间、补料方式、溶氧量对...
- 应莲芳梁凌宇杨军高雪峰蒋琳
- 关键词：戊型肝炎病毒抗原工程菌蛋白纯化生物制品
- 文献传递
